秋菊丸化学成分鉴定及靶向GLUT9-OAT3尿酸转运体介导慢性高尿酸血症大鼠尿酸代谢和肾保护的机制研究

目的初步明确秋菊丸化学成分,研究秋菊丸对慢性高尿酸血症(HUA)模型大鼠尿酸(UA)升高及肾脏损伤的治疗作用及机制。方法借助超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)技术,初步鉴定秋菊丸的化学成分。48只雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组、苯溴马隆(5.45 mg·kg^(-1),阳性药)组和秋菊丸低、中、高剂量(1.31、2.62、5.24 g·kg^(-1))组,除对照组外,通过ig腺嘌呤和乙胺丁醇制备大鼠慢性HUA模型,造模同时每天ig给药1次,连续28 d。使用全自动生化仪测定大鼠血清UA、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)水平;HE及Masson染色观察肾脏组织病理学变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肾脏组织中葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)、有机阴离子转运体家族蛋白3(OAT3)、ATP结合盒亚家族G成员2(ABCG2)、转化生长因子-β(TGF-β1)、SMAD蛋白3(Smad3)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA水平。结果秋菊丸中共鉴定出41个成分,包括黄酮类(9个)、有机酸类(5个)、生物碱类(3个)、苯丙素类(7个)、香豆素类(1个)、酚类(3个)、呋喃类(2个)、脂肪酰类(6个)、醌类(2个)、萜类(1个)、内酯类(1个)、脂肪酸类(1个)。给药28 d后,HE染色结果表明,与模型组比较,各给药组肾损伤的病理学改变明显恢复,减轻了肾小球萎缩、肾小管扩张、肾纤维化及肾间质炎性细胞浸润等病理改变,其中秋菊丸高剂量组及苯溴马隆组肾脏损伤最轻。与模型组比较,秋菊丸高剂量组的CRE、UA水平均显著降低(P<0.01),各剂量组BUN水平有降低趋势,但无显著性差异;高、中剂量组肾组织中肾小管上皮细胞中胶原蛋白的含量显著降低(P<0.05、0.01);高剂量组GLUT9 mRNA表达量显著减少(P<0.05、0.01),各剂量组OAT3、ABCG2的mRNA表达量均显著增加(P<0.05、0.01);中、高剂量α-SMA mRNA表达量显著减少(P<0.05、0.01),高剂量组TGF-β1 mRNA表达量显著减少(P<0.01),各给药组Smad3的mRNA表达量有减少趋势,但无显著性差异。结论初步明确秋菊丸化成成分,秋菊丸具有增强UA代谢、减轻HUA所致肾脏损伤及肾纤维化的作用,其机制可能与调控GLUT9-OAT3尿酸转运体相关。