miR-551在甲状腺癌患者中的表达及靶向ERBB4对SW579细胞移植瘤生长的影响

目的 探讨miR-551在甲状腺癌患者中的表达及靶向ERBB4对SW579细胞移植瘤生长的影响。方法 选取2019年1月-2022年3月于我院病理科采集并保存的甲状腺乳头状癌组织及其配对的癌旁组织100例。将SW579细胞随机分为Control组、miR-NC组、miR-551组和miR-551+pcDNA-ERBB4组。RTPCR检测甲状腺癌组织和细胞中miR-551表达,分析甲状腺癌组织中miR-551表达和临床病理特征相关性;CCK-8、Transwell法、流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡率;蛋白质印迹法检测细胞中ERBB4蛋白表达;荧光素酶活性基因报告检测miR-551和ERBB4靶向关系。建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为miR-NC组和miR-551组,比较两组裸鼠肿瘤体积;TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡率。结果 甲状腺癌组织中miR-551表达低于癌旁组织(P<0.05)。与甲状腺上皮细胞相比(1.00±0.10),甲状腺癌细胞中miR-551表达(0.32±0.04)明显降低(P<0.05)。与Control组相比,miR-551组细胞中miR-551表达(1.28±0.13)和细胞凋亡率(25.72±1.78)明显增加,24 h、48 h细胞活力(分别为52.38±5.46、32.29±3.17)、细胞侵袭数目(81.06±6.32)和细胞中ERBB4蛋白(0.46±0.05)表达明显降低(P<0.05);与miR-551组相比,miR-551+pcDNA-ERBB4组细胞中miR-551表达和细胞凋亡率(7.69±0.82)明显降低,24 h、48 h细胞活力(分别为85.11±7.61、71.56±6.82)、细胞侵袭数目(136.82±7.54)和细胞中ERBB4蛋白表达(0.84±0.08)明显增加(P<0.05);与miR-NC组(1.00±0.10)相比,转染野生型ERBB4(ERBB4-WT)时miR-551组荧光素酶活性明显降低(0.34±0.04)(P<0.05);与miR-NC组相比,miR-551组裸鼠肿瘤体积明显减少,肿瘤组织中细胞凋亡率(51.62±4.31)明显升高(P<0.05)。结论 甲状腺癌组织中miR-551呈低表达,过表达miR-551可靶向调控ERBB4抑制甲状腺癌细胞增殖和侵袭,诱导甲状腺癌细胞凋亡。

粪便移植对肠易激综合征患者肠道菌群及脑肠菌轴、IFN-γ、IL-4水平的调节作用

目的 探究粪便移植对肠易激综合征(IBS)患者肠道菌群及脑肠菌轴、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4水平的调节作用。方法 选取138例IBS患者,根据治疗方法分为粪便移植组(62例)和益生菌组(76例)。比较两组治疗前后肠道菌群、IFN-γ、IL-4、胃肠功能(血管活性肠肽、生长抑素、P物质、胃动素水平)、IBS生活质量量表(IBS-QOL)评分、IBS严重程度评分系统(IBS-SSS)、胃肠道症状评定量表(GSRS)评分及临床疗效。结果 治疗后,两组肠杆菌、肠球菌及酵母菌数量、IFN-γ、IL-4、IBS-QOL、IBS-SSS、GSRS评分、血管活性肠肽、生长抑素下降,乳酸杆菌、双歧杆菌数量、IL-4、P物质、胃动素升高;且粪便移植组改善较益生菌组更为显著(P<0.05)。粪便移植组治疗总有效率高于益生菌组(P<0.05)。结论 粪便移植可帮助IBS患者重建肠道微生态平衡,提高临床疗效及生活质量,促进胃肠功能恢复。

4R危机管理理论下预警干预模式在冠状动脉旁路移植术病人中的应用效果

目的:探究4R危机管理理论下预警干预模式对冠状动脉旁路移植术(CABG)病人治疗依从性及并发症发生率的影响。方法:选取医院2022年7月-2023年12月收治的100例冠心病病人为研究对象,均行CABG,根据随机抽签法分为试验组(n=50)、参照组(n=50),参照组接受常规护理干预,试验组基于参照组接受4R危机管理理论下预警干预模式,持续干预6周。比较两组治疗依从性、并发症发生率、护理质量、康复进程及干预前后心功能[左室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期内径(LVESD)、6 min步行试验(6 MWT)]、生活质量、心理状况。结果:试验组治疗依从率(98.00%)高于参照组(84.00%)(P<0.05);试验组并发症发生率(4.00%)低于参照组(18.00%)(P<0.05);试验组护理态度、护理操作、护理记录单书写评分高于参照组(P<0.05);试验组首次下地、首次排气、拔管、住院时间短于参照组(P<0.05);干预后试验组LVEF、6 MWT高于参照组,LVESD小于参照组(P<0.05);试验组干预后焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS)评分低于参照组,慢性病病人生命质量测定量表-冠心病(QLICD-CHD)评分高于参照组(P<0.05)。结论:4R危机管理理论下预警干预模式可提高CABG病人生活质量及治疗依从性,改善病人心功能,降低并发症发生率,提高护理质量。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨归术益坤方联合粪菌移植对多囊卵巢综合征大鼠的治疗作用

目的 探讨归术益坤方联合粪菌移植治疗多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome, PCOS)的潜在机制。方法 将30只6周龄SD雌性大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、粪菌移植组、中药组、中药联合粪菌移植组,每组各6只。采用来曲唑诱导PCOS大鼠模型,以对照组大鼠新鲜粪便、归术益坤方进行干预,观察大鼠动情周期。检测大鼠血清性激素[黄体生成素(Luteinizing hormone, LH)、促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone, FSH)、睾酮(Testosterone, T)]、空腹胰岛素(Fasting insulin, FINS)、空腹血糖(Fasting plasmaglucose, FPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)检测大鼠白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor, TNF-α)水平;HE染色观察大鼠卵巢形态学变化;Western Blot检测卵巢组织Toll样受体4(TLR-4)、磷酸化NF-κB p65相对表达量。结果 与对照组比较,模型组大鼠出现动情周期紊乱、卵巢呈多囊样改变,T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、FINS、HOMA-IR、IL-18、TNF-α水平均明显升高(P<0.01),卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达量上升(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,归术益坤方联合粪菌移植可显著改善上述指标(P<0.05);粪菌移植可降低T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、HOMA-IR、TNF-α(P<0.05),下调卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达(P<0.01),归术益坤方可降低T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、FINS、HOMA-IR、IL-18、TNF-α(P<0.05),下调卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达量(P<0.01)。结论 归术益坤方联合粪菌移植可明显改善PCOS大鼠生殖功能和代谢异常,潜在机制可能是改善肠道微生态,下调TLR-4/NF-κB信号通路,改善慢性炎症状态。

壮方壮肝逐瘀煎联合骨髓间充质干细胞移植对CCl4大鼠肝纤维化的影响

目的 探讨壮肝逐瘀煎联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mensenchymal stem cell,BMMSC)移植对CCl4诱导的肝纤维化大鼠的影响。方法 取20只大鼠为正常对照组(A组),另取80只造模成功后的大鼠,随机分为模型组(B组)、单纯壮肝逐瘀煎组(C组)、单纯BMMSC组(D组)、壮肝逐瘀煎联合BMMSC组(E组),每组20只。A组、B组、D组灌服生理盐水(0.1 m L/kg,1次/d),C组、E组灌服壮肝逐瘀煎(0.1 mL/kg,1次/d),各组均连续干预12周。其中,第4周末,B组、C组尾静脉注射生理盐水,D组、E组尾静脉注射BMMSC。干预后,采用HE染色观察各组大鼠肝脏病理变化;采用全自动生化仪检测肝功能指标[谷草转氨酶(aspartate aminotransaminase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、白蛋白(albumin,ALB)]变化;采用RT-PCR检测肝组织甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、ALB、细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)mRNA;采用Western blot检测表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的表达;冷冻切片技术检测携带绿色荧光蛋白的BMMSC向肝脏归巢的情况。结果 B组肝小叶结构被广泛增生的纤维化组织分割并包绕成大小不等的圆形或类圆形的肝细胞团(即假小叶),肝细胞排列絮乱、坏死、变性及再生。C组、D组、E组肝小叶结构得到不同程度的恢复,肝细胞变性、水肿得到不同程度的改善。与A组比较,B组AST、ALT、TBIL明显升高(P<0.05),ALB和AFP、ALB、CK18 m RNA及HGF、EGF蛋白表达明显降低(P<0.05)。与B组比较,C组、D组、E组AST、ALT、TBIL明显降低(P<0.05),ALB和AFP、ALB、CK18 mRNA及HGF、EGF蛋白表达明显升高(P<0.05)。与E组比较,C组、D组AST、ALT、TBIL明显升高(P<0.05),ALB和AFP、ALB、CK18 mRNA及HGF、EGF蛋白表达明显降低(P<0.05)。免疫荧光结果显示,E组肝脏内携带绿色荧光蛋白数量明显高于A组、D组。结论 壮肝逐瘀煎联合BMMSC治疗可抗肝纤维化,可有效促进BMMSC向肝脏归巢,修复受损的肝组织。

子宫腺肌病IVF-ET助孕病人血清PIBF、RBP-4水平及其对妊娠结局的预测价值

目的:探讨子宫腺肌病体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕病人血清孕激素诱导阻断因子(PIBF)、视黄醇结合蛋白-4(RBP-4)的表达及其对妊娠结局的预测价值。方法:选取行IVF-ET助孕的子宫腺肌病病人96例为研究对象,根据临床妊娠情况将研究对象分为临床妊娠组(56例)和未妊娠组(40例)。比较2组病人基本特征及治疗数据、血清PIBF、RBP-4水平。Pearson法分析血清PIBF、RBP-4与基础卵泡刺激素(FSH)、抗缪勒管激素(AMH)、基础促黄体生成素(LH)的相关性。多因素logistic回归分析影响子宫腺肌病IVF-ET助孕病人临床妊娠结局的影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PIBF、RBP-4水平对子宫腺肌病IVF-ET助孕病人妊娠结局的预测价值。结果:临床妊娠组FSH、AMH、促性腺激素(Gn)用量明显高于未妊娠组(P<0.05~P<0.01)。未妊娠组血清PIBF水平明显低于临床妊娠组(P<0.01),RBP-4水平明显高于临床妊娠组(P<0.01)。相关性分析显示,子宫腺肌病病人血清PIBF与基础FSH、AMH呈正相关(r=0.517、0.669,P<0.01),血清RBP-4与基础FSH、AMH呈负相关(r=-0.558、-0.634,P<0.01)。多因素logistic回归分析显示,基础FSH低水平、AMH低水平、PIBF低水平、RBP-4高水平是影响子宫腺肌病IVF-ET助孕病人临床妊娠结局的危险因素(P<0.05~P<0.01)。血清PIBF、RBP-4联合预测子宫腺肌病IVF-ET助孕病人妊娠结局的ROC曲线下面积(AUC)显著大于PIBF、RBP-4单独预测的AUC(P<0.05)。结论:血清PIBF、RBP-4与子宫腺肌病IVF-ET助孕病人妊娠结局相关,两者联合对子宫腺肌病IVF-ET助孕病人妊娠结局具有一定的预测价值。

特异性敲除肠上皮Toll样受体4基因促进小鼠移植瘤的增殖

目的:从肠道菌群和肠黏膜屏障角度探讨肠上皮Toll样受体4(TLR4)基因特异性敲除(IEC-CreTLR4KO)促进小鼠皮下移植瘤增殖的可能机制。方法:设IEC-CreTLR4KO组、IEC-TLR4flox/flox组和BALB/c野生型组,注射CT-26结肠癌细胞于各组小鼠的右腋下皮肤,细胞数为4×10^(5)个,观察并记录各组小鼠移植瘤体积以及体质量,检测肿瘤增殖标记物Ki67;16S rDNA高通量测序检测各组小鼠结肠粪便,分析肠道菌群的丰度与多样性;GMrepo数据库分析差异菌的肿瘤相关性;光、电镜技术观察肠黏膜形态结构;免疫组织化学检测小鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1表达。结果 :相较于BALB/c组和IEC-TLR4flox/flox组,IEC-CreTLR4KO荷瘤组小鼠肿瘤体质量比显著增高;与BALB/c组相比,IEC-CreTLR4KO组小鼠肠道菌群丰度和多样性增加,其中f_Enterococcaceae、g_Erysipelatoclostridium及g_Mucispirillum丰度增高,而f_Tannerellaceae、g_RuminococcaceaeUCG_010丰度降低;上述关键差异菌与肿瘤等疾病密切相关;电镜观察显示IEC-CreTLR4KO组小鼠空肠上皮细胞间的连接结构松散,同时空肠和结肠上皮细胞ZO-1表达显著下降。结论 :肠上皮TLR4基因特异性敲除促进小鼠移植瘤的增殖,可能与该基因缺失后引起肠道菌群变化和肠黏膜屏障破坏密切相关。

AGGF1中和抗体联合抗CTLA-4抗体抑制小鼠色素瘤生长的分子机制研究

目的:探究抗AGGF1中和抗体(RDD-Ab),RDD-Ab + 抗CTLA-4抗体联合治疗对小鼠黑色素瘤的治疗作用。方法:合成AGGF1的GTFQRDDAPASVHSE肽并制备多克隆中和抗体(RDD-Ab)。为了评估RDD-Ab对血管生成活性和黑色素瘤生长的影响,我们实施了小管生成实验、迁移实验、细胞增殖实验、黑色素瘤细胞皮下移植性模型实验和免疫组化等实验。结果:实验结果显示,制备的RDD-Ab可以识别细胞中天然的AGGF1蛋白和过表达的AGGF1蛋白。RDD-Ab可显著抑制血管内皮细胞小管形成、迁移和增殖。与IgG对照组相比,RDD-Ab治疗显著减缓黑色素瘤生长,RDD-Ab + CTLA-4抗体联合治疗时肿瘤生长速度最慢。免疫组化实验也表明,RDD-Ab显著减少瘤内微血管生成与肿瘤细胞增殖,同时,联合治疗可显著增加瘤内CD4+和CD8+淋巴细胞的浸润。结论:RDD-Ab可在体外抑制血管内皮细胞的血管新生功能,具有高效的黑色素瘤生长抑制作用,RDD-Ab + CTLA-4联合治疗黑色素瘤效果更佳(显著增加瘤内CD4+和CD8+淋巴细胞的浸润),这为未来黑色素瘤的临床干预提供了一种新的潜在治疗方案。Objective: To investigate the therapeutic effect of neutralizing antibody (against AGGF1, RDD-Ab), RDD-Ab + CTLA-4 therapy on mouse melanoma. Methods: Synthesize GTFQRDAPASVHSE peptide of AGGF1 and prepare polyclonal neutralizing antibody (RDD-Ab). In order to evaluate the effects of RDD-Ab on angiogenesis and melanoma growth, we conducted tube formation, migration, cell proliferation, subcutaneous melanoma cell transplantation model and immunohistochemistry (IHC). Results: RDD-Ab can recognize both natural AGGF1 protein and overexpressed AGGF1 protein in cells. The experimental results showed that RDD-Ab significantly inhibits the formation, migration, and proliferation of endothelial cell tubules. Compared with the IgG control group, RDD-Ab significantly slowed down the growth of melanoma. IHC experiments showed that RDD-Ab significantly suppressed tumor angiogenesis and proliferation. The combination therapy of RDD-Ab + CTLA-4 antibody has the slowest tumor growth rate, and the combination therapy increases the infiltration of CD4+ and CD8+ lymphocytes robustly in solid tumors. Conclusion: RDD-Ab can inhibit the angiogenesis function of endothelial cells in vitro and has a highly effective inhibitory effect on melanoma growth has an efficient inhibitory effect on melanoma growth, and the combined treatment with CTLA-4 antibody is more effective. This provides a new potential treatment option for clinical intervention of melanoma in the future.

免疫检查点抑制剂在肾移植后恶性肿瘤患者中安全性和有效性文献分析

目的探讨免疫检查点抑制剂(Immune checkpoint inhibitors,ICIs)在肾移植后恶性肿瘤患者中的安全性和有效性,为上述患者使用ICIs提供参考。方法检索中国知网、维普、万方、PubMed以及Web of Science数据库,收集至2022年12月关于ICIs在肾移植后恶性肿瘤患者中应用的文献,提取数据并整理分析。结果纳入分析的患者,平均年龄为64.58岁,其中男21例,女10例;恶性肿瘤的诊断时间与最后一次肾移植时间的平均跨度为9.67年;免疫抑制剂有完整使用记录的患者中约一半在使用ICIs后对药物进行了调整,多数为减少免疫抑制剂的种类;患者肿瘤诊断主要为黑色素瘤,次之为皮肤鳞状细胞癌;使用ICIs类型包括程序性死亡受体-1(programmed cell death protein 1,PD-1)抑制剂,程序性死亡配体-1(programmed cell death-1 ligand-1,PD-L1)抑制剂和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)抑制剂,ICIs在肾移植后恶性肿瘤患者中的疾病控制率为55.17%;发生排斥的10例患者,经处理后,最终5例丢失移植物。结论ICIs可能给部分肾移植后恶性肿瘤患者带来临床获益,但也可能诱发患者发生排斥反应,因此,肾移植后恶性肿瘤患者使用ICIs需充分考虑获益风险比。

靶向CXCL12/CXCR4信号轴抑制肺癌细胞增殖和迁移

越来越多的研究表明,破坏CXC基序趋化因子12(CXCL12)/CXC基序趋化因子受体4(CXCR4)信号轴可能会降低肿瘤的生长和转移。然而,从实验室到临床的转换必须非常谨慎,因为CXCL12/CXCR4信号轴对组织和器官的正常发育和维持至关重要。A549细胞是一种源自人类非小细胞肺癌(NSCLC)的细胞株,在本研究中,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和Transwell迁移试验用于检测表达CXCR4的A549细胞的体外增殖和迁移能力,无论是否存在AMD3100(一种特异性CXCR4信号传导小分子抑制剂)。通过注射A549细胞建立裸鼠移植瘤模型,测量肿瘤大小。结果表明,CXCR4阻断抑制了体外A549细胞的增殖及其向CXCL12的迁移。AMD3100处理的裸鼠移植生长明显低于用载药处理的小鼠。总之,目前的数据表明,CXCL12/CXCR4信号轴靶向受损的非小细胞肺癌细胞生长和迁移受限,表明它可能是一种新的非小细胞肺癌治疗策略。

白花蛇舌草多糖调节CXCL12/CXCR4轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨白花蛇舌草多糖(Hedyotis diffusa Willd.Polysaccharide,HDP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及对CXCL12/CXCR4轴的调控机制。方法将乳腺癌细胞分为对照组,CXCL12/CXCR4抑制剂组(AMD 3100组),HDP低、中、高剂量组(HDP-L组、HDP-M组、HDP-H组),HDP高剂量+CXCL12组(HDP-H+CXCL12组);通过CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验、Transwell实验分别测定细胞的迁移和侵袭能力;Western blot分析细胞中上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CXCL12、CXCR4蛋白的表达;建立BALB/c-nu雌性裸鼠MDA-MB-231异种移植瘤模型并观察各组肿瘤生长情况,采用HE染色观察裸鼠移植瘤细胞的形态学特征。结果与对照组相比,AMD 3100组和HDP各剂量组细胞增殖活性、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达显著抑制(P<0.05,P<0.01),而E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与HDP-H组相比,HDP-H+CXCL12组细胞的增殖活力、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达水平明显升高(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平被显著抑制(P<0.01)。此外,动物实验表明,与模型组相比,AMD 3100组和HDP各剂量组的肿瘤重量明显降低(P<0.05,P<0.01);与HDP-H组相比,HDP-H+CXCL12组裸鼠肿瘤重量明显增加(P<0.01);HE染色显示,AMD 3100组和HDP各干预组肿瘤组织坏死与凋亡细胞增多。结论HDP可以通过抑制CXCL12/CXCR4轴进而抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭。

CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植的体外实验研究

目的 探索重组腺病毒载体 (Recombinantadenovirus ,rAdv)介导CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植免疫耐受的分子机制。方法 构建CTLA4Ig重组腺病毒载体 ,转染猪树突状细胞 (DendriticCell,DC) ,以猪表皮细胞匀浆液为刺激原 ,观察DC递呈猪表皮抗原刺激人T细胞增殖、活化及信号转导的影响 ;同时 ,以CTLA4Ig rAdv转染小鼠DC细胞 ,观察该DC膜表面分子CD40、CD80表达。结果 CTLA4Ig转染DC能显著抑制人外周血T淋巴细胞增殖能力 (P <0 .0 1)和T细胞肌醇磷脂信号系统转导活性 ,IL 2分泌亦受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ;转染CTLA4Ig的小鼠DC膜表面分子CD80表达降低 (P <0 .0 5 )。结论 腺病毒介导CTLA4Ig基因转染猪皮能诱导人外周血T淋巴细胞免疫耐受。

CTLA4Ig基因表达对鼠皮肤移植免疫抑制作用的研究

目的 探讨静脉注射CTLA4Ig腺病毒后在大鼠体内的表达和对同种异体移植皮肤存活的影响 ,以及该载体应用的安全性 ,为该基因治疗方法在抑制器官移植排斥反应的临床应用奠定基础。方法 供体SD大鼠皮肤移植前 1周 ,用腺病毒作载体将CTLA4Ig导入Wistar大鼠体内 ,用蛋白质斑点印迹实验检测血清中CTLA4Ig的表达 ,用腺病毒荧光抗体检测腺病毒在脏器的分布。同时还观测了各脏器的病理改变及移植物生存时间。结果 CTLA4Ig腺病毒在肝、脾、心、肺、肾均有明显分布 ,但实质细胞均未见严重损伤性改变。CTLA4Ig基因能在血清中的表达高峰时间一般在 7d左右 ,移植皮肤的生存显著长于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 从静脉注射导入的CTLA4Ig基因能在大鼠体内表达并对同种移植的排斥反应有明显的抑制作用。

骨髓间充质干细胞在CD4^+CD25^+调节性T细胞减轻大鼠移植物抗宿主反应中的作用

本研究探讨间充质干细胞(MSC)对GVHD的作用及其机制。建立大鼠同种异体骨髓移植模型,同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应,联合或不联合移植供体来源的MSC,观察受鼠的GVHD的发生情况;利用双荧光标记抗体标记受鼠脾脏和胸腺单个淋巴细胞,通过流式细胞术分析CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例的变化,分析MSC的作用机制。结果显示实验组的GVHD的发生程度减轻,存活率提高,而CD4/CD8比值在GVHD组出现不同程度的减少,CD4+CD25+调节性T细胞在实验组中的脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的比例分别为31.55±7.58%、93.20±2.69%,在GVHD组中的比例分别为20.90±1.90%、57.17±6.79%,实验组中CD4+CD25+调节性T细胞比例比GVHD组中增多,具有显著性差异。结论MSC能有效抑制HSC移植后致死性GVHD的发生,提高生存率,同时MSC可能通过作用于体内调节性T淋巴细胞而间接发挥了抑制GVHD的作用。

CTLA4 Ig在诱导小鼠心脏移植免疫耐受中的作用

目的 通过建立小鼠心脏移植模型 ,探讨CTLA4Ig在免疫抑制和诱导免疫耐受中的作用。方法 建立小鼠心脏移植模型 ,供体分别为DBA/2和 6 15新生鼠心脏 ,受体为BALB/c小鼠 ,移植后分别予以CTLA4Ig 0 .1、1、5mg·kg-1·d-1,治疗 1周 ,观察不同剂量CTLA4Ig对新生鼠移植心脏存活时间的影响 ;BALB/c小鼠首次移植 2周后再次移植DBA/2或 6 15新生鼠心脏 ,观察CTLA4Ig对再次移植心脏存活的影响。结果 与对照组相比 ,CTLA4Ig 0 .1mg·kg-1·d组 ,移植心脏的存活时间不能延长 ,CTLA4Ig 1mg·kg-1·d和 5mg·kg-1·d-1组能显著延长心脏的存活时间 ,但两组间差异不显著 (P >0 .0 5 )。再次移植 6 15心脏各组 ,移植心脏的存活时间均无显著延长 ,而再次移植DBA/2新生鼠心脏 ,CTLA4Ig 1mg·kg-1·d-1和 5mg·kg-1·d-1组 ,其移植心脏的存活时间仍然能显著延长 (P <0 .0 1)。结论 CTLA4Ig能延长新生鼠心脏移植存活时间 。

γ-干扰素、白细胞介素4与CD25在角膜移植免疫排斥反应中的作用

目的:角膜移植免疫排斥反应是一个多因素参与的调节过程,近年来研究表明细胞因子在角膜移植免疫中起重要作用。实验拟验证γ-干扰素、白细胞介素4及CD25在大鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用。方法:①实验于2006-10/2007-05在南方医科大学南方医院实验动物中心完成。选用Wistar大鼠24只,SD大鼠54只,实验方法符合动物伦理学要求。②将54只SD大鼠按随机数字表法分为3组,正常组6只,角膜移植组及地塞米松组均24只。后两组制备Wistar→SD角膜移植大鼠模型,受体选择右眼手术,供体提供双眼角膜。③用裂隙灯观察移植排斥情况;利用反转录-聚合酶链反应检测植片内γ-干扰素、CD25mRNA的表达;应用酶联免疫吸附实验检测房水和血清中γ-干扰素、白细胞介素4含量;应用流式细胞术检测移植前后不同时相外周血淋巴细胞CD25的表达;术后第11天,应用免疫组织化学方法检测角膜CD4+,CD8+和CD25+T细胞的表达。结果:54只SD大鼠全部进入结果分析。①地塞米松组大鼠发生角膜移植排斥反应的时间长于角膜移植组(P=0.000)。②正常角膜植片无CD25、γ-干扰素mRNA表达,角膜移植组术后第11天角膜植片内γ-干扰素、CD25 mRNA的表达较地塞米松组增强(P<0.05)。③角膜移植组角膜移植术后6,11d血清γ-干扰素含量高于正常组(P<0.05);术后11d含量高于术后6,24d(P<0.01);地塞米松组术后6,11d低于同期角膜移植组(P<0.05)。④角膜移植组角膜移植术后6,11,24d房水γ-干扰素、白细胞介素4含量均高于正常组(P<0.05);地塞米松组术后6,11d均低于同期角膜移植组(P<0.05～0.01)。⑤地塞米松组术后6,11d外周血CD3+CD25+T/CD3+T比值低于同期角膜移植组(P<0.05)。⑥术后第11天角膜移植组植片内CD4,CD8及CD25明显表达,地塞米松组CD4,CD8及CD25表达明显减弱。结论:CD25、γ-干扰素和白细胞介素4在角膜移植免疫排斥反应过程中发挥重要的作用;促进白细胞介素4表达,抑制γ-干扰素及CD25产生,对降低角膜移植免疫排斥反应具有积极的作用。术后动态检测外周血CD25和γ-干扰素的表达有助于临床了解局部免疫反应程度并预测角膜移植排斥反应的发生。

U4b型单角子宫不孕患者胚胎移植妊娠结局观察

目的观察U4b型单角子宫不孕患者胚胎移植妊娠结局。方法选取U4b型单角子宫不孕患者52例(观察组,鲜胚移植35个周期、冻胚移植61个周期),子宫形态正常不孕患者1 716例(对照组,鲜胚移植618个周期、冻胚移植1 370个周期),两组均行辅助生殖治疗,比较两组鲜胚和冻胚移植的妊娠率、分娩率、早期流产率、异位妊娠率、晚期流产率、早产率、孕周、新生儿体质量。结果观察组鲜胚移植妊娠率28. 6%、分娩率17. 1 %、早期流产率20. 0%、异位妊娠率10. 0%、晚期流产率10. 0%、早产率33. 3%、孕周(37. 7 ±2. 3)周、新生儿体质量(2 757.1±687.0)mg,对照组分别为53.4%、46.4%、10.0%、1.0%、2.1%、8.7%、(38.3±1.6)周、(3 284.9± 560. 9) mg,两组临床妊娠率、分娩率比较,P均< 0. 05;观察组冻胚移植妊娠率37. 7%、分娩率18. 0%、早期流产率 47. 8%、异位妊娠率0、晚期流产率4. 3%、早产率18. 2%、孕周(37. 9 ± 1.4)周、新生儿体质量(3 346. 4 ± 343. 6) mg,对照组分别为48.2%、39.3%、14.7%、1.7%、2.0%、11.5%、(38.2±1.6)周、(3 390.4±525.2)mg,两组分娩率、早期流产率比较,P均<0.05。结论 U4b型单角子宫不孕患者无论是鲜胚移植还是冻胚移植,分娩率均低于子宫形态正常患者,提示单角子宫对妊娠及分娩结局有影响,易导致胎儿丢失。单角子宫患者鲜胚和冻胚移植妊娠结局比较无明显差异,提示两种方案均可实施。

兔甲状腺组织移植血清T_3,T_4变化的动态观察

本实验建立兔甲状腺颈阔肌下移植模型，并动态观查移植甲状腺的功能。实验结果发现普通饲料喂养的兔血清Ｔ３、Ｔ４值较稳定。而甲状腺全切后，兔血Ｔ３、Ｔ４明显降低，Ｔ３下降较快，Ｔ４测缓慢些、同品系移植组动物（Ⅰ、Ⅱ）在第１、２周时，血Ｔ３、Ｔ４较低，第３、４周后，则接近正常值。异品系移植组动物（Ⅳ）在第１周时，血Ｔ３、Ｔ４接近组Ⅲ，组Ⅳ第２周以后，血Ｔ３、Ｔ４明显低于组Ⅲ，而逐渐接近同一时间组Ⅱ的水平。实验表明本实验模型制作简单，可动态观测功能指标，无论是作组织预处理实验，还是药物排斥实验，都有较好的应用价值。

肾移植病人中CYP3A4基因多态性对环孢素A代谢的影响

目的用基因分析技术对CsA代谢酶CYP3A4进行基因分型,以阐述CYP3A4基因多态性对环孢素A代谢的影响及相互关系,从而预测血药浓度及安全性.方法用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析法分别建立了CYP3A的CYP3A4基因亚型3个新突变点(CYP3A4*4,*5,*6)的基因分型方法,并对中国肾移植人群进行基因分型,同时测定C sA及其代谢物浓度,以原形药与代谢物浓度的比值MR作为表型验证指标.结果CYP3A4*4,*5,*6等位基因在中国肾移植人群中的突变率为:2/133,3/197,3/200.野生型病人中肝肾功能正常和异常者测得MR均值分别为0.47±0.13和0.82±0.21.3种突变型病人MR均值为0.90±0.30.结论CYP3A4*4,*5,*6等位基因的存在有可能降低了药物代谢酶CYP3A4的活性,从而使环孢素A的代谢减慢.

磁共振成像技术评价考布他汀A4磷酸酯对大鼠移植性肝脏肿瘤的治疗作用

在大鼠Walker-256移植性肝脏肿瘤模型上采用磁共振影像检测结合病理诊断,建立血管阻断药物的临床前研究方法,并用血管阻断药物考布他汀A4磷酸酯(CA4P)验证该方法的可靠性。20只SD大鼠左肝包膜下制成Walker-256移植性肝脏肿瘤模型,采用1.5T磁共振仪行T1WI、T2WI、DWI、CE-T1WI检查;CA4P治疗后24,48,72h采用以上序列再次进行MRI检查。扫描结束后处死动物,取肝脏肿瘤组织部位进行病理组织学检查。结果显示,与正常肝脏比较,肿瘤在T1WI图像上呈略低信号,T2WI呈高信号,DWI呈亮高信号,CE-T1WI呈略高信号。CA4P治疗后CE-T1WI中央区域低信号,边缘高信号,信号强度增强率降低(P<0.01),肿瘤体积增长明显小于对照组(P<0.01),坏死面积比率增大(P<0.01)。病理检查显示,对照组肿瘤血管内皮细胞扁平,血管内无栓塞;CA4P治疗后,可见肿瘤内大范围的坏死和血栓,血管内皮细胞肿胀。实验结果表明,MRI可以准确、无创性评价CA4P对大鼠Walker-256移植性肝脏肿瘤的疗效。应用1.5TMRI结合病理学检查方法可以作为血管阻断药物的临床前疗效研究方法。