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高温胁迫下甜玉米雌穗发育基因差异表达谱分析 被引量:12
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作者 李余良 刘建华 +1 位作者 郑锦荣 胡建广 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期269-279,共11页
利用数字化基因表达谱技术,对高温胁迫下优良甜玉米杂交种粤甜13雌穗发育相关基因的表达谱进行分析。结果表明,在高温胁迫和适温下差异表达基因达949个,其中有上调表达基因705个,下调表达基因244个,上调表达10倍以上的基因108个,下调表... 利用数字化基因表达谱技术,对高温胁迫下优良甜玉米杂交种粤甜13雌穗发育相关基因的表达谱进行分析。结果表明,在高温胁迫和适温下差异表达基因达949个,其中有上调表达基因705个,下调表达基因244个,上调表达10倍以上的基因108个,下调表达10倍以上的基因40个。对差异表达基因功能注释分析表明,它们主要集中在细胞内组分和膜上,主要具催化活性、结合活性、水解酶活性、氧化还原酶活性等,参与代谢、细胞结构与功能、胁迫应答、物质运输和生物调节等生物学过程,推测对雌穗发育过程中籽粒和果穗的形成具有重要作用。这些基因中有一半以上的基因功能未知,下一步将对其开展克隆和功能方面的分析。 展开更多
关键词 甜玉米 高温胁迫 数字化基因表达谱 基因表达 实时定量RT-PCR
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烟夜蛾感觉神经元膜蛋白基因的克隆、序列分析与组织特异性表达 被引量:2
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作者 罗梅浩 蔡永萍 +3 位作者 赵艳艳 王甜甜 郭线茹 原国辉 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第5期91-95,共5页
利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guenée)触角中扩增得到感觉神经元膜蛋白(sensory neuron membrane protein,SNMP)基因HassSNMP(GenBank登录号:EU580138)。序列分析结果显示,该片段长度为1658bp... 利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guenée)触角中扩增得到感觉神经元膜蛋白(sensory neuron membrane protein,SNMP)基因HassSNMP(GenBank登录号:EU580138)。序列分析结果显示,该片段长度为1658bp,其中ORF长1572bp,编码523个氨基酸残基,预测成熟蛋白分子量为59.2 kDa,等电点为6.54。序列比对结果表明,烟夜蛾与其它昆虫的SNMP基因推导表达的氨基酸序列具有较高的一致性。半定量RT-PCR研究结果显示,SNMP在烟夜蛾触角、头(去掉触角)、喙和足中表达,其中在触角中的表达量最高,且雌雄虫触角中的表达量差异不显著,在喙中的表达量次之,在翅、胸和腹中没有表达;此外,该基因在成虫、十日龄蛹以及卵中也有表达,其中在卵中的表达量相对较低;在幼虫、一日龄蛹、四日龄蛹和七日龄蛹中没有表达。该研究结果说明烟夜蛾SNMP是非触角特异性表达基因。 展开更多
关键词 烟夜蛾 感觉神经元膜蛋白基因 基因克隆 序列分析 半定量RT-PCR
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胃癌患者外周血hTERT mRNA转录水平及临床意义 被引量:1
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作者 胡福军 凌志强 +1 位作者 陈晓钟 余传定 《浙江临床医学》 2008年第8期1029-1031,共3页
目的研究胃癌患者外周血中hTERT mRNA的表达,探讨其作为胃癌肿瘤细胞标志物的可行性。方法应用实时荧光定量RT-PCR技术检测96例原发性胃癌、50例胃溃疡和60例健康献血员血清中hTERT mRNA表达水平,并对阳性PCR产物进行克隆、测序。结果... 目的研究胃癌患者外周血中hTERT mRNA的表达,探讨其作为胃癌肿瘤细胞标志物的可行性。方法应用实时荧光定量RT-PCR技术检测96例原发性胃癌、50例胃溃疡和60例健康献血员血清中hTERT mRNA表达水平,并对阳性PCR产物进行克隆、测序。结果胃癌组hTERT mRNA表达水平(12.78±0.97)copies/ml,显著高于良性胃溃疡组(0.93±0.23)copies/ml和健康对照组(0.29±0.17)copies/ml。多变量分析表明,hTERT表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤生长方式、肿瘤分化程度、淋巴管侵犯、静脉侵犯均无显著相关性(p>0.05),而与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、pTNM分期及CEA有显著相关性(p<0.05)。结论qRT-PCR具有快速、敏感和特异的特点。定量分析外周血hTERT mRNA转录水平可作为胃癌的肿瘤细胞标志物之一,用于早期诊断。 展开更多
关键词 胃癌 肿瘤标志物 HTERT MRNA 实时荧光定量RT-PCR
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Aquaporin 8 mRNA expression after intestinal resection in rat
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作者 Yu Koyama Hitoshi Kameyama +6 位作者 Jun Sakata Takashi Kobayashi Masahiro Minagawa Shin-ichi Kosugi Tadashi Yamamoto Kohei Akazawa Toshifumi Wakai 《Open Journal of Gastroenterology》 2014年第2期62-68,共7页
Backgrounds: Aquaporins (AQPs), the mammalian water channels, have been localized in various organs, including the gastrointestinal (GI) tract. We examined AQPs expression in rat models of massive intestineal resectio... Backgrounds: Aquaporins (AQPs), the mammalian water channels, have been localized in various organs, including the gastrointestinal (GI) tract. We examined AQPs expression in rat models of massive intestineal resection to determine the functions of AQPs in the GI tract. Methods: Female Sprague-Dawley rats (n = 15) underwent 90% resection of the small intestine, and Female Wistar-Kyoto rats (n = 10), received subtotal colectomy, and were sacrificed following the operations. RNase protection assay and quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) were performed to measure the AQPs mRNA expression in the GI tract. Immunohistochemistry was performed to confirm AQP8 protein expression. Results: AQP8 mRNA expression (mean ± standard error), was enhanced in the jejunum of the short bowel rats at days 7 and 14 (37.6% ± 1.4% and 18.5% ± 2.4%, respectively, p < 0.01). Enhancement of AQP8 mRNA was also observed in the remnant rectum of the subtotal colectomized rats at both days 21 and 42 (116.1% ± 4.5% and 143.3% ± 7.4%, respectively, p < 0.01). Immunohistochemistry demonstrated enhanced AQP8 expression in the remnant rectum of the subtotal colectomized rats. No intensive change was observed with other AQPs in both models. Conclusions: Our results suggest a compensatory role of AQP8 in the maintenance of intestinal fluid balance. 展开更多
关键词 AQUAPORIN 8 Short BOWEL SUBTOTAL COLECTOMY RNASE Protection ASSAY quantitativert-pcr
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强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞的组蛋白甲基化 被引量:3
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作者 谢永华 许超尘 +2 位作者 温扬敏 游玉权 陈淑增 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期681-684,共4页
目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞(PBMC)组蛋白修饰情况。方法收集27例AS患者及22例健康对照者的静脉血;分离PBMC,采用H3K4、H3K9甲基化检测试剂盒提取组蛋白和检测H3K4、H3K9甲基化水平;半定量PCR法检测AS患者的PBMC组蛋... 目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞(PBMC)组蛋白修饰情况。方法收集27例AS患者及22例健康对照者的静脉血;分离PBMC,采用H3K4、H3K9甲基化检测试剂盒提取组蛋白和检测H3K4、H3K9甲基化水平;半定量PCR法检测AS患者的PBMC组蛋白甲基转移酶基因(SET1、SUV39H1和SUV39H2)的mRNA表达水平;ELISA分析外周血白细胞介素(IL)-23、IL-17和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与健康对照者比较,AS患者PBMC组蛋白H3K4甲基化水平显著升高(P<0.05),而两者组蛋白H3K9甲基化水平比较差异无统计学意义(P>0.05);半定量PCR结果显示AS患者PBMC的SET1和SUV39H1基因表达水平分别是健康对照者的1.73和0.68倍(P<0.05),而两者PBMC的SUV39H2基因的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);AS患者中IL-23、IL-17、TNF-α的蛋白表达水平显著高于健康对照者(P<0.05,P<0.01);AS患者PBMC组蛋白H3K4甲基化水平与血清中IL-23、IL-17和TNF-α蛋白表达水平均呈正相关(P<0.05)。结论 AS患者外周血PBMC组蛋白甲基化呈现异常,且与AS发生发展有一定的相关性。 展开更多
关键词 强直性脊柱炎 外周血单个核细胞 组蛋白甲基化 半定量PCR
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NaCl胁迫对水稻品种中花11幼苗根系生长发育的影响 被引量:3
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作者 高林 陈春丽 《种子》 CSCD 北大核心 2012年第7期7-12,共6页
以水稻中花11幼苗为材料,探讨高浓度NaCl处理对其根系生长发育的影响。结果表明,200 mmol/L NaCl胁迫下,幼苗胚根生长受到抑制,不定根数目减少,根毛数量减少长度变短;幼苗根系出现褐化,且根系木质素含量增加,根系过氧化物酶(POD)活力显... 以水稻中花11幼苗为材料,探讨高浓度NaCl处理对其根系生长发育的影响。结果表明,200 mmol/L NaCl胁迫下,幼苗胚根生长受到抑制,不定根数目减少,根毛数量减少长度变短;幼苗根系出现褐化,且根系木质素含量增加,根系过氧化物酶(POD)活力显著上升;半定量RT-PCR检测显示,盐胁迫应答基因OsCDPK7表达显著下降,P 5 CS 1表达上升,OsHKT 1;5、OsNHX 1在处理初期表达上升,其后随处理时间延长而下降。 展开更多
关键词 水稻 盐胁迫 根生长发育 过氧化物酶 半定量RT—PCR 盐胁迫应答基因
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拟穴青蟹(Scylla paramamosain)蛋白二硫键异构酶基因的分子克隆与表达分析
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作者 曾祥兰 刘元婧 +3 位作者 曾慧 黄辉洋 叶海辉 王桂忠 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1512-1518,共7页
蛋白二硫键异构酶(PDI)是内质网中的关键酶,参与蛋白合成过程中二硫键的形成、还原和异构。本文首次从拟穴青蟹(Scylla paramamosain)克隆获得了PDI基因cDNA全长,该序列长度为2015bp,开放阅读框为1452bp,编码483个氨基酸。荧光定量PCR... 蛋白二硫键异构酶(PDI)是内质网中的关键酶,参与蛋白合成过程中二硫键的形成、还原和异构。本文首次从拟穴青蟹(Scylla paramamosain)克隆获得了PDI基因cDNA全长,该序列长度为2015bp,开放阅读框为1452bp,编码483个氨基酸。荧光定量PCR检测发现PDI存在于拟穴青蟹的多个组织中;在拟穴青蟹卵巢发育过程中,PDI基因的表达量在前4个时期逐渐上升,到了第5期(成熟期)表达量则下降,表明PDI参与了卵巢发育的蛋白合成过程。免疫组化表明,拟穴青蟹卵母细胞存在PDI阳性反应,进一步为该分子参与卵巢发育提供了形态学证据。 展开更多
关键词 蛋白二硫键异构酶 拟穴青蟹 卵巢发育 荧光定量 免疫组化
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低温胁迫差异表达基因在佛手和枳中的半定量RT-PCR分析
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作者 张真真 邱立军 +3 位作者 李玲 陈文荣 应海良 郭卫东 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第12期2105-2113,共9页
以佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle)和枳(Poncirus trifoliata Raf.)为试材,-4℃低温处理24 h后,采用半定量RT-PCR技术,研究佛手34个低温胁迫差异表达基因在佛手和枳中的表达情况,通过比较获得佛手低温敏感相关基因,分... 以佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle)和枳(Poncirus trifoliata Raf.)为试材,-4℃低温处理24 h后,采用半定量RT-PCR技术,研究佛手34个低温胁迫差异表达基因在佛手和枳中的表达情况,通过比较获得佛手低温敏感相关基因,分析两者抗寒性差异原因。结果表明,佛手和枳中变化趋势不同的基因有17个,其中14个基因在佛手中表达量有变化,枳中表达量不变,3个基因在佛手与枳中表现出完全相反的变化趋势;8个基因变化趋势相同;9个基因在枳中未检测到。推测17个变化趋势不同的基因可能与佛手低温敏感相关,它们所介导的分子途径可为揭示佛手低温敏感提供有力证据;9个枳中未检测到的基因是佛手中特异表达基因,可能是引起佛手低温敏感,造成佛手和枳抗寒性差异的关键基因。 展开更多
关键词 佛手 低温胁迫 差异表达基因 半定量RT-PCR
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