针对非洲猪瘟病毒K205R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus,ASFV),本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID:MH766894.1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验分析显示,本文建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法Ct值与标准品在1×10^(11)~1×10^(2)copies/μL范围内具有很好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-2.797,检测下限为10^(2)copies/μL,与其他能引起相似临床症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于1.53774%,重复性好。本方法适用于临床样品及本实验室构建的表达ASFV K205R基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定及检测,对ASFV快速检测及ASF早期诊断有重要意义。

基于4R理论对“K12线上教育”营销策略的研究——以作业帮为例

“K12线上教育”近年来发展迅猛,但一直存在问题。本文以作业帮为例,运用4R营销理论研究该行业的营销策略,寻找其问题所在,并根据理论提出优化策略,尝试为行业健康发展寻找正确方向。研究表明,K12线上教育行业要让营销策略以学习服务为中心、以教育服务为基石。降低行业的功利性、淡化营销色彩、专注教育本身、与用户互利共赢,是K12线上教育行业健康发展的必由之路。

基于迁移学习与改进的Mask R-CNN液晶屏缺陷检测方法

针对液晶屏生产过程中出现的表面划痕、脏点、裂痕等细微缺陷,在有限数据集下探寻一种既能提高液晶屏表面缺陷的检测精度和速率又能满足实际工厂检测要求的检测方法,意义重大。基于此,本文提出一种基于迁移学习与改进的Mask R-CNN液晶屏缺陷检测方法,可解决传统的图像缺陷检测方法无法有效利用特征信息进行高精度检测与漏检的问题。设计K-means算法对缺陷液晶屏标注框进行聚类以获得合适的长宽比和锚框个数,并对改进的Mask RCNN模型应用本文数据集对缺陷区域特征提取并进行训练分类。为加速模型收敛,利用迁移学习思想将DAGM 2007数据集在本文改进模型上预训练并得到最优权重且迁移到液晶屏缺陷检测任务中。同时与主要目标检测方法进行对比,结果表明:通过引入迁移学习与改进的Mask R-CNN方法,能在样本较少的情况下准确识别背景复杂且微小瑕疵缺陷,测试集缺陷识别达到95.25%,较改进前综合提升5%。

IGF1R/PI3K/Akt通路及其调控对非小细胞肺癌血管生成拟态形成影响的研究

目的为非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗探索一个潜在的分子靶标.方法通过qPCR、Western blot、免疫组化检测NSCLC组织和癌旁组织KLF16、IGF1R表达情况;通过抑制IGF1R/PI3K/Akt通路活化,检测相关靶标MMP2和MMP9的表达;通过IGF1R/PI3K/Akt通路抑制剂LY294002干预血管生成拟态(VM)形成.结果与癌旁组织相比,免疫组化、Western blot和qPCR提示,KLF16在NSCLC组织中表达降低,且随着NSCLC级别提高,表达量递减.NSCLC组织中存在明显IGF1R阳性,且IGF1R阳性表达量随着NSCLC级别增高而递增.同时,Western blot和Matrigel三维细胞培养结果表明,随着IGF1R/PI3K/Akt通路抑制剂浓度增加,IGF1R/PI3K/Akt通路相关蛋白质、MMP2、MMP9表达水平也随之降低,肿瘤VM形成随之减少.结论NSCLC VM的形成与IGF1R/PI3K/Akt信号通路有关,KLF16在NSCLC中的表达趋势与IGF1R表达相反,两者之间是否存在调控关系需进一步验证.

基于IGF-1R/PI3K/AKT的益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影响及作用机制研究

目的:益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)有明显的治疗作用,但具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨益气固表丸对脂多糖(LPS)联合烟雾暴露构建慢性阻塞性肺病模型大鼠的治疗作用机制。方法:通过大鼠气管内灌注LPS和吸入香烟烟雾构建慢性阻塞性肺病模型,同时给予模型大鼠低、中、高剂量益气固表丸治疗14 d。观察呼吸参数及肺组织病理变化。采用酶联免疫吸附试验测定支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10水平。采用蛋白质印迹法检测大鼠肺组织样品中胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)/PI3K/AKT信号通路组分的磷酸化状态。结果:与对照组和低剂量益气组比较,大剂量益气固表丸治疗可显著改善COPD大鼠呼吸参数,减轻肺损伤和炎症,降低BALF和血清炎症介质水平。此外,高剂量益气固表丸干预的COPD大鼠肺组织标本中磷酸化IGF-1R、p-PI3K、p-AKT、p-GSK3、p-mTOR蛋白水平显著降低。结论:益气固表丸对COPD有明显的治疗作用,可能与靶向IGF-1R/PI3K/AKT信号通路有关。

miR-129-2靶向PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路减轻肺内皮细胞损伤

目的探讨miR-129-2在肺血管内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法SPF级小鼠40只随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、空载组、过表达组,给予气管滴注LPS诱导急性肺损伤(ALI),尾静脉注射高表达慢病毒来过表达miR-129-2,观察ALI小鼠呼吸频率、体质量等一般情况,检测miR-129-2及炎症因子IL-6、IL-10、TNF-α表达水平和肺损伤程度。人肺微血管内皮细胞(HPMECs)分为Control组、LPS组、NC组和mimic组,LPS处理诱导细胞损伤,转染miR-129-2 mimic来上调miR-129-2的水平,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力,检测各组细胞中miR-129-2、IL-6、IL-10、TNF-α及PIK3R1 mRNA的表达水平。双荧光素酶实验验证miR-129-2与PIK3R1的靶向关系,Western blot检测miR-129-2对PIK3R1及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。结果在小鼠中,miR-129-2过表达能使小鼠进食增加、呼吸频率减慢、体质量增加、肺组织损伤减轻,IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高(P<0.05)。在HPMECs中,mimic转染使miR-129-2表达水平上调,炎症因子表达水平降低,细胞迁移能力增强,PIK3R1表达降低(P<0.05);双荧光素酶报告显示miR-129-2与PIK3R1存在结合位点,miR-129-2下调使PIK3R1表达增加,PI3K/AKT信号通路被激活。结论miR-129-2过表达能够减轻小鼠炎症反应和肺损伤,并能介导PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路缓解肺内皮细胞损伤。

K_(n)□K_(m,s)的r-hued染色

考虑完全图K_(n)和完全二部图K_(m,s)的笛卡尔乘积图的r-hued色数.首先,根据正整数r的不同值进行分类,并结合K_(n)□K_(m,s)的性质,刻画该图r-hued色数的下界;其次,找到K_(n)□K_(m,s)的一个具体的(k,r)-染色,并以此刻画该图r-hued色数的一个上界;最后,确定了K_(n)□K_(m,s)的r-hued色数.

PIK3R1基因低甲基化在肺腺癌中的临床意义

目的:为早期筛查、获取有效诊治手段来提高肺腺癌(LUAD)患者的总体生存率,探索PIK3R1基因低甲基化指标对肺腺癌诊疗及预后判断的影响。方法:使用大型公共数据库:TCGA、GEO、GEPIA2、UALCAN、KaplanMeier Plotter、LinkedOmics和TIMER进行在线分析。在LUAD人群不同的临床特征亚组中构建单变量和多变量COX比例风险模型。结果:低表达的PIK3R1会导致LUAD患者的总生存期(OS)、首次进展后生存期(FP)和疾病进展后生存期(PPS)较差。性别、肿瘤分期、吸烟史、T分型、N分型和PIK3R1低表达是LUAD发病的危险因素,低表达的PIK3R1是LUAD的潜在独立危险因素。DNA甲基化分析显示,探针ID(包括cg01239651、cg24797508、cg16664523和cg25008444)的PIK3R1启动子内CpGs的低甲基化通过DNA甲基转移酶(DNMT1)降低PIK3R1的表达。ROC曲线分析显示,PIK3R1的甲基化和表达在LUAD的准确诊断中具有高灵敏度和特异度。免疫分析研究表明,PIK3R1低甲基化和表达与免疫细胞(B细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞)浸润有关。此外,共表达基因(PGR、C5orf41、SCN7A、RBMS3、FAT4、RASSF2、A2M、ITGA8、FLI1和RECK)通常与PIK3R1具有相似的功能。结论:PIK3R1的低甲基化及表达可视为肺腺癌的一种特异性诊断生物标志物和独立的预后因素,并可以预测免疫治疗的有效性。

非洲猪瘟病毒K205R蛋白重组腺病毒载体的构建及小鼠免疫效力评价

为了研制安全有效的非洲猪瘟(ASF)疫苗,本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV) Georgia 2007/1株基因组序列合成ASFV K205R基因,通过同源重组技术构建重组腺病毒Ad5-ASFV-K205R,使用Western blot检测K205R非结构蛋白的表达情况,PCR检测其遗传稳定性,腺病毒滴度检测试剂盒测定其滴度。使用重组腺病毒免疫BALB/c小鼠,通过ELISA测定血清K205R特异性抗体,采用多因子检测试剂盒测定血清中IFN-γ和IL-4细胞因子含量,采用CCK8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果显示,成功包装出重组腺病毒Ad5-ASFV-K205R,能够正确表达K205R融合蛋白;接种293T细胞并连续传代20代,均可稳定遗传,病毒滴度可达9.5×1010PFU/mL;ELISA结果显示,小鼠一免后7~21 d可检测到K205R特异性抗体,并在二免后14 d内产生更高的抗体水平;K205R蛋白能显著刺激免疫小鼠脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4,同时也能显著刺激脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05)。结果表明,Ad5-ASFV-K205R重组腺病毒免疫小鼠能诱导机体的体液免疫应答和细胞免疫应答,具有很好的应用潜能,为进一步研发ASF疫苗提供基础。

非洲猪瘟病毒K205R蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定

【目的】利用噬菌体展示技术筛选非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)K205R蛋白的特异性纳米抗体。【方法】将原核表达、纯化的ASFV K205R蛋白免疫双峰驼,采集全血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA并反转录,巢式PCR扩增VHH基因,构建VHH噬菌体文库,利用噬菌体展示技术筛选K205R特异性纳米抗体。【结果】成功构建库容量为5×10^(8)的VHH噬菌体文库,然后利用噬菌体展示技术经过3轮淘选,特异性VHH噬菌体得到明显富集,氨基酸序列比对显示共筛选出5株K205R蛋白的特异性纳米抗体,分别为ASFV-K205R-Nb1、ASFV-K205R-Nb14、ASFV-K205R-Nb35、ASFV-K205R-Nb64和ASFV-K205R-Nb82。【结论】筛选的5株纳米抗体均具有良好的特异性,其中ASFV-K205R-Nb1、ASFV-K205R-Nb35和ASFV-K205R-Nb82具有更好的亲和力,为以纳米抗体作为灵敏探针建立的特异性强、灵敏度高、成本低的新型ASFV血清学诊断方法提供依据。

基于改进Mask R-CNN的多片烟叶部位的同步识别

为解决烟叶智能分级识别中需对多片散放烟叶同步进行部位识别的问题,提出一种基于改进Mask R-CNN的多片烟叶的部位同步识别方法:在Mask R-CNN区域建议网络中引入K-means聚类算法,对已标注目标检测框进行聚类,实现对预设的5种尺度的锚点尺寸和3种比例的锚点长宽比的优化,使其更加符合烟叶图像数据的分布特性,达到提高生成建议框的精确性、缩短识别时间的目的。基于采集的烟叶图像数据集,验证改进Mask R-CNN方法的有效性。结果表明,当IoU为0.5时,改进Mask R-CNN单样本耗时313 ms,比Mask R-CNN的326 ms快,在测试集上的均值平均精度(mAP)提高了3.56%。与Faster R-CNN和SSD目标检测算法相比,在准确率和召回率上也表现出优势。

非洲猪瘟病毒K205R蛋白的原核表达与单克隆抗体制备

为研发非洲猪瘟病毒的免疫检测试剂提供素材,制备非洲猪瘟病毒K205R蛋白的单克隆抗体。采用PCR方法扩增K205R基因,构建重组表达质粒pET-30a-K205R,将重组质粒pET-30a-K205R转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中并通过IPTG诱导表达ASFV K205R蛋白。将纯化出的蛋白乳化后免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。将筛选出来的单克隆细胞注射至小鼠腹腔中,待小鼠腹部膨大时收集腹水,通过ELISA方法鉴定腹水效价、Western blot和IFA鉴定单克隆抗体特异性及反应原性,并对单克隆抗体亚型进行鉴定。经SDS-PAGE鉴定,重组ASFV K205R蛋白成功表达。Western blot分析显示,His标签抗体能够特异性识别重组表达的ASFV K205R蛋白,表明其具有良好的特异性以及反应原性。通过细胞融合和细胞筛选得到1株能稳定分泌抗ASFV K205R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,将其命名为1C3G6。ELISA检测腹水中抗体效价为1∶100000。Western blot和IFA鉴定结果显示单克隆抗体1C3G6与K205R蛋白反应性良好。通过亚型鉴定,单克隆抗体1C3G6的重链为IgG2b类,轻链为Kappa型。经Western blot和IFA鉴定,筛选得到的1C3G6单克隆抗体可以特异性识别原核系统和真核系统表达的K205R蛋白,说明该抗体具有良好的特异性。

ITIC:一种高效的k-影响社区top-r查询算法

k-影响社区(k-Influential Community, k-IC)是网络中具有较大影响值且无包含关系的最大连通k-core。k-IC的top-r查询的目标是返回影响值较大的前r个k-IC。针对此问题,提出W-D(Weight-Degree)索引用于管理网络。提出k-IC的top-r查询优化算法ITIC(Index-based Top-r Query Algorithm for k-Influential Community),该算法无须频繁计算连通分量,并且从权重较大的节点开始处理,一般只对部分节点进行处理即可求得结果。同时,该算法是渐进输出k-IC,可根据用户需求随时终止算法。通过实验验证所提算法的有效性。实验结果表明,相对于现有算法,ITIC可以显著提高计算效率。

F_(m)、P_(n)⊙F_(m)和C_(n)⊙F_(m)的r-hued染色研究

给定2个图G和H,它们的corona乘积图记为G⊙H,是将图G拷贝一份、图H拷贝|V(G)|份,图G的第i个顶点和图H的第i个拷贝份的每个顶点连边而得到的图.图G的(k,r)-染色是图G正常k-染色,使得度数为d的每个顶点的邻点至少染min{d,r}种不同的颜色.r-hued染色数是最小正整数k,使得图G具有(k,r)-染色,用χr(G)来表示.主要讨论F_(m),P_(n)⊙F_(m)和C_(n)⊙F_(m)的r-hued染色数.

基于K近邻算法的空中目标威胁度判断方法

针对传统的空中目标威胁度评估方法具有计算量大,实时性差,难以适用于数据缺失的情况,提出采用K近邻算法(KNN)对任意来袭目标实现威胁度评估的方法。该方法提取了空中目标的状态信息特征作为输入数据,使用离差最大化方法构建数据集,目标威胁度等级作为输出数据,利用K近邻算法构建了目标威胁度评估模型。仿真实验结果表明,该方法能够实现高准确度、实时化的目标威胁度评估,和TOPSIS方法与离差最大化方法进行对比,证明该方法对空中目标异常特征值具有更高的决策效率,更加适用于现代战场的高复杂性,进一步体现了该方法的优越性和可行性。

改进Faster R-CNN的视频SAR动目标检测算法

针对当前可用于深度学习的视频SAR数据稀少的现状,以及动目标检测算法中存在较多的漏检和虚警问题,基于美国桑迪亚国家实验室真实视频SAR数据制作深度学习数据集,提出一种改进Faster R-CNN的视频SAR动目标检测算法。算法以截取后的ResNet50为特征提取网络,利用K-means加遗传算法自适应计算锚框,并在数据预处理环节加入S型曲线增强方法,来增强图像的对比度信息。经实验验证,所提出方法能够显著提升动目标检测率和检测速度,其中,平均精度(AP)和F1分数提升均达到10个点以上,有效降低了虚警和漏检,整体表现优于一阶段算法SSD和RetinaNet。

一类新的r-K-泛圈图

在现有研究的基础上,推广并构造一类r-K-泛圈图,其中K=(2,2,4,4,4,4,2,2,(2^(μ),2^(μ),2^(μ),2^(μ+1),2^(μ+1),2^(μ+1),2^(μ+1),2^(μ))等.

Hilbert空间中的K-R-融合框架

给出了Hilbert空间中K-R-融合框架和紧K-R-融合框架一些新的刻画,并利用框架理论和算子理论的方法和技术给出了K-R-融合框架的几个性质。最后,讨论了Hilbert空间中的K-R-融合框架的冗余性。

基于射线跟踪与离开角空间聚类的5G-R网络优化技术研究

当前反复“路测-调整”的传统无线网络优化方式难以满足铁路5G专用移动通信系统(5G-R)的网络优化需求。面向京沈铁路干线场景,在确定了射线跟踪传播机理模型后,进行了5G-R无线信道建模仿真,提出一种基于射线跟踪与离开角空间聚类的网络优化算法。该算法以全向天线仿真结果为基础,使用K-means++算法对射线跟踪仿真的角度-能量域数据进行聚类,将水平离开角的空间聚类中心作为扇区方位角;结合水平离开角的聚类中心与高铁行车路径的空间位置关系,计算相应扇区的下倾角;以上述基于射线跟踪与离开角空间聚类的结果为初值,基于粒子群算法进行优化迭代,高效地完成铁路干线场景下的5G-R网络优化。结果表明,在相同的计算资源和仿真条件下,基于射线跟踪与离开角空间聚类的5G-R网络优化算法对比直接使用粒子群算法,在收敛速度方面提升了约10%,在优化效果方面提升了约30%。该方法针对铁路干线场景能够实现在迭代计算次数更少的情况下,给出更好的网络优化方案,为未来建设高质量5G-R通信系统提供技术积累和参考。

Top-k空间偏好查询方法研究

随着无线通信技术的发展和智能移动终端的广泛普及,基于位置的服务已经融入了人们生活的方方面面。其中,Top-k空间偏好查询在地理信息系统、城市建设规划、资源调度与分配、旅游规划等领域具有重要的意义。Top-k空间偏好查询是根据空间对象周围的特征对空间对象进行等级评价,并返回具有最高等级评价的k个空间对象。目前,对于Top-k空间偏好查询的研究主要集中在欧式空间和路网环境,本文对欧式空间和路网环境下的Top-k空间偏好查询方法进行分析和比较。