黄柏(Phellodendron amurense Rupr．)枝条组培快繁技术研究

以黄柏枝条为外植体,通过研究MS培养基不同激素对黄柏枝条初始萌发的表现,筛选黄柏最佳培养基新配方,结果表明:最适宜黄柏茎段萌动的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,最适宜的增殖培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1mg/L,最适宜的生根培养基为MS+NAA 0.3 mg/L+IAA 0.2 mg/L。

黄檗丛枝菌根(AM)真菌PCR-DGGE条件研究

从东北林业大学林场采集黄檗根际土壤及菌根，采用Nested—PCR技术分别扩增黄檗菌根及根际土壤AM真菌18SrDNANS31／Glol区域，利用该扩增产物对AM真菌DGGE条件进行优化。表明Nested—PCR技术具有较高的灵敏性，可有效的从微量DNA中扩增出约230bp的目标片段；经DGGE条件优化，确定AM真菌最佳DGGE条件为丙烯酰胺浓度8．0％，纯化后的PCR产物作为DGGE上样样品，凝胶变性梯度范围30％～60％，电泳电压130V，电泳时间8h，电泳温度60℃。

Effect of Arbuscular Mycorrhiza on the Content of Nitrogen and Nitrogenous Matter in Amur Corktree Seedlings

[Objective] This study aimed to explore the effect of arbuscular mycorrhiza on the content of nitrogen and nitrogenous matter in amur corktree（Phellodendron amurense Rupr.）seedlings. [Method] The annual seedlings of Phellodendron amurense Rupr. were inoculated with four arbuscular mycorrhiza fungi in a pot experiment to study the influences of arbuscular mycorrhiza on the content of nitrogen and nitrogenous matter in Phellodendron amurense Rupr. [Result] After inoculation with arbuscular mycorrhiza fungi, the Phellodendron amurense Rupr. seedlings developed arbuscular mycorrhiza, leading to an enhancement of photosynthetic capacity. The leaf nitrogen content of those inoculated with Glomus mosseae increased to 1.28- 1.60 times as compared with the control. The chlorophyll content and chlorophyll a/b ratio were also raised, with an increase over 25% of chlorophyll a content. In addition, IAA content in plants increased to 1.65-2.41 times; and nitrate reductase activity was also enhanced, as well as soluble protein content, 1.67-2.49 times as high as the control, which improved the nitrogen metabolic ability, and promoted the plant growth, as well as the secondary metabolic ability. [Conclusion] This study provides a theoretical basis for the application of arbuscular mycorrhiza on Phellodendron amurense Rupr.

微波辅助离子液体提取黄檗生物碱的工艺研究

采用微波辅助离子液体提取方法从黄檗树皮中提取3种生物碱(药根碱、巴马汀和小檗碱)。首先基于单因素试验考察离子液体的种类和料液比对提取效率的影响,进一步考察离子液体浓度、提取时间和温度3种因素对提取效率的影响,最终应用Box-Behnken响应面方法优化,得到最佳提取工艺,并与传统提取方法进行比较。研究结果表明,1-丁基-3-甲基咪唑嗅盐([Bmim][Br])溶液对生物碱的提取效率最高,最佳提取条件为离子液体浓度为0.31 mol/L,温度为94℃,时间为15 min,在该条件下药根碱得率为0.047%±0.003%,巴马汀得率为0.421%±0.011%,小檗碱得率为1.150%±0.028%。与传统水加热回流法相比,提取效率分别高出9.3%、12.8%和23.6%。该研究表明,利用微波辅助离子液体提取技术可以高效地从黄檗树皮中提取生物碱,为提取黄檗中活性成分提供坚实的理论基础和实证支持。

关黄柏历史沿革及产业发展现状与策略探析

关黄柏为东北三大珍贵阔叶树种之一,具有较高的药用价值、生态价值及经济价值,市场需求量极大,为国家珍贵的药用保护树种。目前,关黄柏资源短缺、供给关系失衡、质量控制薄弱、衍生品种类不足、资金投入不足、政策支持不够等问题严重制约了关黄柏产业的可持续性高质量发展。本文通过对关黄柏本草考证、资源现状、产业发展等方面的研究进展进行综述,全面分析关黄柏全产业链发展现状,并提出相应的发展策略,为关黄柏资源可持续利用及产业高质量发展提供参考。

高效液相色谱法测定关黄柏叶中黄柏酮的含量

目的:采用高效液相色谱法建立关黄柏叶中黄柏酮的含量测定方法。方法:高效液相色谱法,WondaSil C18 Superb色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1%醋酸水(V∶V=49∶51)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为215 nm,柱温为30℃。结果:黄柏酮在1.68~52.74μg/mL范围内,线性关系良好(R2=0.9999)。供试品溶液在24 h内稳定性良好,方法的精密度高,平均加样回收率为102.2%,RSD为2.27%。关黄柏叶中黄柏酮的含量为1.604 mg/g。结论:所建立的方法可用于测定关黄柏叶中黄柏酮的含量。

黄檗中生物碱含量的高效液相色谱分析

建立了一种简便、快速、准确的测定黄檗 (PhellodendronamurenseRupr.)中生物碱含量的高效液相色谱分析方法。色谱条件 :采用日本KYAHIQsilC 18柱 (2 5 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,流动相乙腈 /水溶液 (10 0 0mL溶液中含磷酸二氢钾 3.4 g及十二烷基磺酸钠 1.7g) 1∶1,流速 1.0mL/min ,检测波长 345nm ,进样量 10μL。样品制备以 6 3%的乙醇作溶剂 ,在 4 1℃下超声波提取黄檗茎皮 6 4min。用HPLC分别测定了黄檗根皮、茎皮和叶中小檗碱、掌叶防己碱、药根碱的含量 ,结果表明 :小檗碱和药根碱在根皮中的含量最高 ,茎皮次之 ,叶最低 ,而掌叶防己碱在茎皮中的含量最高 ,根皮次之 ,叶最低。

长白山黄檗基本情况调查及保护

通过野外实地调查、记录、分析、总结。掌握长白山黄檗资源、生存现状的基本情况,提出保护和利用的设想。掌握了黄檗分布范围、生态条件、生长发育规律、自然更新途径、致危因子、保护措施。为黄檗的保护和合理利用提出了指导意见。

中国黄檗资源现状及可持续利用对策

阐述了黄檗的生物学和生态学特性,总结了中国黄檗资源的分布现状,分析了黄檗的濒危原因,提出了黄檗资源的可持续利用对策。人为严重破坏是黄檗濒危的外部原因,林下不能天然更新等生物生态学特性是黄檗濒危的内部原因。加强基础研究工作,逐渐建立新的药用模式,是解决黄檗保护与利用矛盾的根本出路。通过人工栽培获取中药材以及通过种植幼树获取药用原料,可以促进黄檗资源的可持续利用。

黄波罗不同种源对育苗质量的影响

对黄波罗不同种源的种子质量和育苗的苗木质量进行了研究, 结果表明:黄波罗种源以柴河最好,海林次之,而穆棱较差;苗木质量也表现相同,种源柴河最好,海林与山河屯次之,而穆棱较差。

黄檗种子及果肉中抑制物质活性的研究

目的探讨黄檗野生种群更新困难的原因,为其种子的萌发机制研究提供参考依据。方法采用甲醇、乙醚、蒸馏水分别浸提黄檗果肉和种子,以白菜、小麦和黄檗作为受试植物,检测种子发芽及幼苗生长情况。结果黄檗果肉和种子的浸提液分别降低了白菜、小麦和黄檗种子的发芽率,对幼苗生长也有不同程度的抑制作用。抑制作用随浓度的增高而增强,以乙醚提取液抑制作用最强,水提液抑制作用不明显。将黄檗种子分离为胚、胚乳和子叶3部分用蒸馏水提取,生物测定发现子叶水提液的抑制活性最强。结论黄檗果肉和种子中均存在着活性较强的抑制物质,能够明显抑制自身及其他植物的生长,抑制物质主要存在于子叶中。

不同种质及生长年限关黄柏中生物碱含量变化规律的研究

采用反相高效液相色谱法对不同种质(北京、东北),不同生长年限关黄柏中有效成分(小檗碱、巴马汀、药根碱)含量的变化规律进行研究。为科学地确定关黄柏采收期,保护关黄柏资源提供依据。高效液相色谱法,色谱柱:Alltim a HP C1(8250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液(40:60,含种0.1质%(的吉十林二通烷化基)磺9年酸生钠以),上流的速关:1黄.0柏m中L/m小in檗;柱碱温含:量25可℃达,检到测中波国长药:典34规5定nm的。含北量京要种求质。2不年同生种以质上,、不东北同生长年限的关黄柏生物碱含量具有差异性,且变化趋势不同。

3种丛枝菌根真菌对不同种源黄檗幼苗的影响

丛枝菌根(Arbuscular mycorrhizal,AM)作为分布最广泛的菌根类型,在植物生长和环境改善中起着非常重要的作用。许多研究也证实,丛枝菌根能够影响植物次生代谢过程,使次生代谢产物发生变化。本实验选用了3种不同的丛枝菌根真菌(Glomus spp.)进行接菌实验,同时选取了吉林、黑河和太空育种3个种源的黄檗幼苗作为研究对象。通过不同菌种和不同种源的结合,来探究丛枝菌根真菌对黄檗幼苗生长情况及生物碱含量的影响作用,以及这种影响作用在不同种源间的差异。本实验的结果显示,接种丛枝菌根真菌的黄檗幼苗生长情况及小檗碱、药根碱和掌叶防己碱3种生物碱含量都不同程度地优于对照组,说明丛枝菌根真菌在黄檗幼苗的生长和生物碱含量的积累方面均有一定的促进作用。在对生物碱含量的影响方面,对小檗碱和药根碱含量影响作用最显著的是摩西球囊霉,对掌叶防己碱含量的影响作用最显著的是根内球囊霉。同时,从实验结果我们还可以看出,本实验选取的3种丛枝菌根真菌对黄檗幼苗生物碱含量的影响作用的大小关系在不同种源间存在明显差异,说明丛枝菌根真菌对黄檗幼苗生物碱含量的影响受到黄檗种源的影响。

播种量与育苗密度对黄波罗苗木质量的影响

对黄波罗育苗中的播种量和育苗密度进行了研究，结果表明在垄作和床作中应采用播种系数为4，0的播种量，其效果可以满足育苗密度的需求；育苗密度在垄作中以60～70株／m、床作中以80～90株／m^2为优。

高效液相色谱法测定关黄柏不同采收期及黄檗不同部位的小檗碱、巴马汀含量

目的测定关黄柏不同采收期及黄檗不同部位的小檗碱、巴马汀的含量。方法采用高效液相色谱法测定。结果检测波长 345nm ,平均加样回收率分别为 96 9%和 97 2 % ,RSD =0 5 7%和0 6 2 %。结论沈阳地区关黄柏的最佳采收期为 10月 ;黄檗枝条中的小檗碱含量虽不及关黄柏 。

我国黄檗野生种群生存现状及化学表征研究

黄檗(Phellodendron amurense Rupr.)为我国常用中药关黄柏的基原,也是国家二级保护植物,但在20世纪60-90年代其野生资源遭到严重破坏,并且至今种群规模未得到很好的恢复。本文对我国燕山、千山、长白山、张广才岭、小兴安岭5条山脉黄檗野生种群的种群密度、年龄结构(径级结构)、生物碱类成分含量等进行了调查和研究,结果显示:黄檗野生种群年龄结构呈纺锤形,幼龄级、青壮级个体分别占总个体数的13.9%和68.0%,表明幼龄植株储备匮乏,天然更新不足,总体呈严重的衰退趋势,受威胁状况严峻;千山种群的小檗碱、巴马汀、黄柏碱含量及生物碱总量最高,而小兴安岭种群最低,且二者与其他三条山脉黄檗种群的生物碱类成分含量差异显著。本研究结果表明,野生黄檗种群分布区缩小,年龄结构呈衰退趋势,部分种群个体数量极少,即使在保护状态下也难以自我恢复;千山黄檗种群的生物碱类成分含量较高,在开展药材生产时应予以重视。

黄檗枝条生物碱含量初步分析

利用岛津20A高效液相色谱仪对黄檗不同枝龄主要生物碱质量分数进行了检测.结果表明:在黄檗木质部和韧皮部内,掌叶防己碱最多,小檗碱较少,药根碱最少;韧皮部中各生物碱质量分数均远高于木质部.药根碱质量分数在黄檗不同枝龄间差异显著.木质部内药根碱质量分数与小檗碱质量分数和黄檗枝龄均呈显著正相关;韧皮部内药根碱质量分数和掌叶防己碱质量分数呈显著正相关,小檗碱质量分数与掌叶防己碱质量分数呈极显著负相关,掌叶防己碱质量分数在木质部和韧皮部间呈显著正相关.

臭氧对黄檗幼苗叶片可见伤害及气孔特征的影响

以4年生黄檗(Phellodendron amurense Rupr.)幼苗为试验材料,利用开顶箱(OTCs)模拟法,设置了4个处理(O3摩尔分数为40×10-9(对照)、60×10-9、80×10-9和120×10-9)的气体熏蒸试验,观测了不同摩尔分数臭氧对黄檗叶片的可见伤害及叶片气孔结构特征的影响。结果表明:单叶伤害面积比和单株叶可见伤害比随O3摩尔分数升高而增加(P<0.01),摩尔分数为120×10-9下熏蒸6 d时黄檗叶片出现坏死斑等伤害症状。O3摩尔分数为80×10-9和120×10-9处理组下表皮气孔密度极显著增加(P<0.01),分别增加37.26%和35.12%,两处理组间差异不显著。气孔宽度、开度、周长和面积也均极显著降低(P<0.01)。而O3摩尔分数为60×10-9时除气孔宽度和开度降低外,其他参数变化不显著(P>0.05)。气孔比随O3摩尔分数升高而增大,并在80×10-9时达到最大为3.52,随后降低。黄檗叶片气孔大小参数与O3摩尔分数之间的相关性可用一元二次曲线方程较好地描述。推测摩尔分数为(80±10)×10-9时是黄檗幼苗臭氧胁迫忍耐性的临界点。

培养条件对黄檗快速繁殖影响的研究

以黄檗带顶芽和腋芽的茎段为材料,以MS和1/2MS为基本培养基,进行黄檗组培苗的快速繁殖,以研究不同培养条件对黄檗快速繁殖的影响。结果表明:以MS+6-BA0·8mg·L^(-1)为培养基,浓度10%次氯酸钠溶液消毒黄檗茎段8min,其组培苗生长最旺盛,成活率可达92·8%。以MS为基本培养基,蔗糖浓度20mg·L^(-1),pH值5·8对黄檗组培苗的壮苗效果最好。

利用血液代谢组学研究关黄柏生物碱对慢性非细菌性前列腺炎模型大鼠的干预作用

目的:本研究应用行为学、组织病理学和代谢组学技术研究关黄柏生物碱对慢性非细菌性前列腺炎(Chronic Nonbacterial Prostatitis,CNP)的干预作用,从血液代谢组学角度阐释关黄柏生物碱对CNP模型大鼠体内代谢水平的影响及其作用机制。方法:通过对关黄柏进行分离纯化得到含量较高的关黄柏生物碱富集物,采用前列腺注射辣椒素的方法制备CNP模型大鼠,应用UPLC-Triple TOF-MS/MS联用技术建立CNP血液代谢组学研究方法,鉴定CNP生物标记物及代谢通路,确定关黄柏生物碱对CNP干预作用的代谢途径。结果:确定了与CNP密切相关的18个生物标记物及14个代谢通路。关黄柏生物碱通过对花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢、嘌呤代谢等代谢通路的调节,可显著对各项指标及12个CNP生物标记物产生回调作用。结论:关黄柏生物碱可以有效干预CNP的发生与发展,本研究为抗CNP药物的研究与开发提供科学的实验数据。