基于嘌呤能受体P2X7R的痛风性关节炎病理研究

目的 观察冰水泳浴对痛风大鼠模型病理变化的影响并探究其中P2X7R的调控机制。方法 雄性SD大鼠分为正常(NORM)组和实验组,实验组包括痛风对照(GC)组、冰水泳浴(IWS)组和亮蓝G(BBG,P2X7R拮抗剂)组。实验组大鼠通过尿酸酶抑制法联合Coderre法塑造高尿酸血症合并痛风性关节炎模型。冰水泳浴组大鼠在Coderre法造模后的0 h和12 h,分别于深约0.5 m的冰水混合物中进行5 min的耐力游泳,BBG组则在造模后立即腹腔注射BBG溶液1次。公式计算踝关节肿胀指数;尿酸酶法检测大鼠血清尿酸水平;ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量;HE染色观察踝关节和滑膜组织的病理变化;Western blot和免疫组化分别检测滑膜组织中P2X7R和NLRP3蛋白表达。结果 与正常组相比,实验组大鼠血清尿酸水平及踝关节肿胀指数均显著升高(P<0.05或P<0.01),且滑膜组织均存在不同程度的炎性浸润。与痛风对照组相比,冰水泳浴组踝关节肿胀指数在12 h显著升高(P<0.05),血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量(P<0.01)及滑膜组织中P2X7R、NLRP3蛋白量均有显著表达(P<0.05);病理结果显示软骨表面破损,滑膜组织出现严重增生与糜烂,并伴有大量炎性细胞聚集。BBG组大鼠滑膜组织的P2X7R、NLRP3蛋白表达与病理损伤较痛风对照组无显著变化(P>0.05),而血清IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均有显著改善(P<0.01)。结论 冰水泳浴模拟的寒冷刺激和剧烈运动可加重痛风性关节炎的病理损伤,其机制可能与关节局部P2X7R的高表达有关。

基于P2X7R/NF-κB通路探讨清解化攻方对重症急性胰腺炎肠屏障的保护作用机制

目的研究清解化攻方基于P2X7R/NF-κB信号通路对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障的保护作用及潜在作用机制。方法制备SAP大鼠模型,使用乌司他丁和清解化攻方干预后,采集各组大鼠血清、胰腺和回肠组织。HE染色观察胰腺和回肠组织病理变化;ELISA检测血清内毒素、D-乳酸含量;Western Blot法检测回肠组织P2X7R、p-IKK、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达情况;IHC检测回肠组织MUC-2和Claudin-1蛋白表达;透射电境观察回肠组织线粒体自噬情况。结果与正常组相比,模型组胰腺及回肠组织出现明显的病理改变,血清内毒素、D-乳酸含量明显升高(P<0.05),P2X7R、p-IKK、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平上调(P<0.05),Muc-2和Claudin-1蛋白表达明显降低(P<0.05);回肠组织线粒体数量减少,膜厚度增加,结构空洞,自噬小体减少;与模型组比较,清解化攻方各组和乌司他丁组大鼠胰腺及回肠组织病理损伤均缓解,血清内毒素、D-乳酸含量降低(P<0.05);P2X7R、p-IKK、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平下调(P<0.05);MUC-2和Claudin-1蛋白表达量升高(P<0.05);回肠组织线粒体数量增多,结构较完整,自噬小体增多。结论清解化攻方可以调控P2X7R/NF-κB信号通路,减轻炎症反应,起到改善SAP大鼠肠黏膜屏障损伤作用。

人参皂苷Rc调节P2X7r-NLRP3信号通路改善酒精性肝病作用机制

目的探讨人参皂苷Rc(Ginsenoside Rc,简称Rc)对酒精性肝病的保护作用及其作用机制。方法采用50 mmol/L乙醇(EtOH)刺激小鼠肝细胞(AML-12)12 h后,采用不同浓度Rc处理24 h。Western blot方法检测AML-12细胞中P2X7r、NLRP3和IL-23蛋白表达情况;RT-qPCR测定AML-12细胞中SREBP1、Lipin-1、P2X7r、NLRP3的mRNA表达情况;通过ELISA法分析肝细胞上清液中IL-1β和IL-18水平。结果与对照组比较,EtOH能够诱导AML-12细胞脂质变性和炎症因子释放,Rc能够有效下调P2X7r、NLRP3和IL-23的蛋白或mRNA表达,抑制EtOH诱导AML-12细胞中SREBP1和Lipin-1的mRNA表达,抑制EtOH诱导AML-12细胞中IL-1β和IL-18向胞外释放(均P<0.001)。结论Rc能够抑制酒精性肝病进程,作用机制可能与抑制P2X7r-NLRP3信号通路有关。

百事乐加味方通过P2X7R/NLRP3调节卒中后抑郁脑-肠轴炎症反应的实验研究

目的通过观察P2X7R/NLRP3通路及脑肠肽相关指标的变化,探讨百事乐加味方(MBD)调节卒中后抑郁(PSD)大鼠脑-肠轴炎症反应的潜在机制。方法通过大脑中动脉栓塞(MCAO)结合慢性不可预见温和应激(CUMS)建立PSD大鼠模型。采用HE染色观察大鼠海马(HP)、前额叶皮层(PFC)病理形态;采用ELISA法检测大鼠血清、肠组织中IL-1β和脑肠肽NPY、GAS、MOT含量;采用免疫组化检测HP、PFC组织P2X7R、NLRP3的表达水平。结果与对照组比较,HE染色显示PSD组大鼠HP、PFC组织结构模糊,胞核皱缩且数量明显减少,可见炎性细胞浸润;Elisa检测表明PSD组大鼠血清及肠组织中IL-1β含量明显升高(P<0.05)、NPY含量明显降低(P<0.01或P<0.05),血清中GAS含量明显降低(P<0.05);免疫组化检测HP、PFC组织中P2X7R、NLRP3表达水平均明显上升(P<0.01或P<0.05)。与PSD组比较,MBD组HP、PFC组织形态接近正常,核仁皱缩程度减轻,数量有所增加,病理形态改善。Elisa检测表明MBD组血清中IL-1β含量明显降低(P<0.05),MBD组血清中MOT含量明显升高(P<0.05),MBD组肠组织中NPY含量明显升高(P<0.05);阻断剂组肠组织中IL-1β含量明显降低(P<0.05),血清及肠组织NPY含量明显升高(P<0.01或P<0.05)。免疫组化检测显示MBD组和阻断剂组HP、PFC组织中P2X7R表达水平明显降低(P<0.05),阻断剂组HP、PFC组织中NLRP3表达水平明显降低(P<0.05)。结论百事乐加味方防治PSD机制可能是通过P2X7R/NLRP3通路调节脑肠肽,从而减轻炎症反应,保护神经功能,改善PSD症状。

夹脊电针调控P2X7R/NLRP3信号通路相关因子改善脊髓损伤大鼠微环境炎症反应的作用机制研究

目的:明确夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠P2X7R受体介导的炎症反应的作用以及机制,为夹脊电针的临床应用提供理论依据。方法:120只大鼠,均分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、夹脊电针组(EA组)、P2X7干扰组(P2X7R siRNA组)和干扰对照组(Control siRNA组)共5组,每组又分1 d、3 d、7 d和21 d 4个时间点。BBB评分评定大鼠后侧肢体运动功能;免疫组化法检测脊髓组织中Cleaved caspase-1、IL-1β及P2X7R表达变化;免疫荧光双标法检测脊髓组织中P2X7R在小胶质细胞中的表达变化。结果:与Sham组比较,各时间点Model组大鼠BBB评分降低(P<0.05);与Model组大鼠比较,术后3 d、7 d、21 d EA组和P2X7R siRNA组大鼠BBB评分升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Sham组比较,术后1 d、3 d、7 d和21 d Model组大鼠脊髓组织Cleaved caspase-1、IL-1β和P2X7R增加(P<0.05);与P2X7R siRNA组比较,3 d、7 d和21 d时间点Control siRNA组Cleaved caspase-1、IL-1β及P2X7R表达仍然较高,差异有统计学意义(P<0.05);与Model组比较,造模后3 d、7 d和21 d 3个时间点EA组脊髓组织Cleaved caspase-1明显降低(P<0.05),造模后7 d和21 d两个时间点EA组脊髓组织IL-1β、P2X7R明显降低(P<0.05);与Model组比较,造模后3 d、7 d和21 d 3个时间点P2X7R siRNA组脊髓组织Cleaved caspase-1、IL-1β和P2X7R明显降低(P<0.05)。P2X7R同OX42(小胶质细胞标志物)存在共定位。结论:夹脊电针可以通过干扰脊髓损伤大鼠脊髓组织中Cleaved caspase-1、IL-1β和P2X7R的表达,抑制炎性反应,从而促进肢体运动功能恢复。

P2X7R在结核分枝杆菌感染中的作用研究进展

结核病是一种全球范围内的人畜共患病,由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起,其防治形势日趋严峻。嘌呤能离子通道型受体7(purinergic ligand-gated ion channel 7 receptor,P2X7R)是嘌呤受体的一个亚型,在机体抗MTB感染过程中发挥重要作用。现对P2X7R在MTB感染中的作用研究进展进行综述,有助于阐明结核病的发病机制并为其治疗提供新的策略。

XRCC2基因R188H位点多态性与大肠癌易感性的Meta分析

目的 通过系统性回顾性分析评价X射线交错互补修复基因2（XRCC2）基因多态性与大肠癌易感性的相关性,以期为大肠癌的临床诊断提供相应参考。方法 计算机检索知网、万方、PubMed,Embase,WebofScience和CNKI数据库,2000年1月-2015年12月XRCC2基因R188H多态性与大肠癌的病例对照研究,应用RevMan5.3及Stata软件进行定量分析。结果 共纳入5篇病例-对照研究：大肠癌病例组2 106例,正常对照组2 607例。Meta分析结果显示,XRCC2 R188H基因多态性与大肠癌发病风险的差异无统计学意义。GA vs GG基因型[OR=1.08,95%CI（0.92-1.27）,P=0.36]。AA vs GG 基因型[OR=1.26,95% CI（0.81-1.97）,P=0.31]。GA＋AA vs GG基因型[OR=1.04,95% CI（0.87-1,23）,P=0.69]。AAvs GG＋GA基因型[OR=1.26,95%CI（0.81-1.96）,P=0.31]。结论 XRCC2 R188H基因多态性与大肠癌易感性无关,而进一步的验证则仍需要更大样本的多中心随机化对照试验进行研究。

右美托咪定对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X4R蛋白表达的影响

目的：观察右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓P2X4R总蛋白及膜蛋白表达水平的影响。方法：雄性SD大鼠40只,180~220 g,随机分为4组（每组10只）：正常组（N组）、假手术组（S组）、神经病理性痛组（SNI组）、右美托咪定组（Dex组）。N组不作任何处理,Dex组于术后即刻腹腔注射右美托咪定40μg/kg,间隔24 h追加给药一次至术后14 d,S组和SNI组均腹腔注射等容量的生理盐水。术前1 d及术后1、3、5、7、14 d检测机械缩足反射阈值（MWT）。术后14 d用Western blot方法检测脊髓L4~6节段P2X4R总蛋白和膜蛋白表达量。结果：与N组和S组相比,SNI组大鼠术后MWT明显降低（P〈0.05）,脊髓水平P2X4R总蛋白和膜蛋白表达量均明显增加（P〈0.05）;与SNI组相比,Dex组MWT明显升高（P〈0.05）,脊髓水平P2X4R总蛋白和膜蛋白表达量均明显降低（P〈0.05）。结论：Dex能减轻大鼠神经病理性痛,其机制可能与抑制脊髓P2X4R总蛋白及膜蛋白水平有关。

中脑导水管周围灰质中P2X7R调控慢性神经病理性疼痛的研究

目的研究神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray matter,PAG)中P2X7受体(P2X7receptor,P2X7R)的分布和表达变化规律,并观察鞘内给予P2X7R拮抗剂对疼痛的影响及探讨可能的机制。方法成年雄性SD大鼠78只鞘内置管,手术成功后行保留性坐骨神经损伤(spared nerve injury,SNI)手术。术后将大鼠随机均分为三组:假手术组(Sham组)、对照组(C组)、亮蓝G(brilliant blue G,BBG)组(BBG组)。术毕当天起连续7d鞘内给予生理盐水或P2X7R拮抗剂BBG10μl,每组各取8只,分别于术前、术后7、14、21d测定50%缩足阈值(PWT)作为机械痛阈,每组各取18只分别于建模后14和21d处死,取PAG组织,通过免疫荧光观察P2X7R的分布和蛋白印迹(western blot)检测P2X7R蛋白表达量的变化。结果与Sham组比较,建模后7、14、21dC组和BBG组大鼠损伤同侧后肢PWT明显降低,建模后14、21dP2X7R表达、GFAP表达明显增加(P<0.05或P<0.01)。与C组比较,建模后7、14、21dBBG组大鼠损伤同侧后肢PWT明显升高,建模后14、21d P2X7R表达、GFAP表达明显减少(P<0.01)。Sham组、C组和BBG组PAG中均存在P2X7R表达分布。P2X7R与GFAP具有重叠分布性,而与Iba-1和NeuN无重叠分布性。结论 P2X7R参与慢性神经病理性疼痛在中脑节段的调控。

背根神经节P2X3R和TRPV1介导CFA致炎性痛大鼠不同时期痛行为

目的:动态检测完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)诱导的炎性痛大鼠健患侧足跖厚度、痛行为和背根神经节(dorsal ganglia root,DRG)中P2X3受体(purinergic P2X3 receptor,P2X3R)、辣椒素受体(transient receptor potential vanilloid type 1,TRPV1)蛋白表达,探索炎性痛不同时期痛行为差异及其可能机制。方法:采用大鼠左侧足跖注射CFA建立炎性痛模型。将大鼠按随机数字表法分为对照组(control,Con group)和炎性痛组(CFA group)。分别检测基线(baseline,BL)和造模后1、3、7、14、28、42天时大鼠双侧足跖厚度、热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)和机械刺激缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT);Western bolt检测健(contralateral,Contra)患(ipsilateral,Ipsi)侧L_(4)-L_(6)DRG中P2X3R、TRPV1蛋白表达。结果:CFA大鼠患侧足跖厚度于造模后各时间点均显著高于Con-Ipsi组和CFA-Contra组。CFA大鼠患侧TWL仅于造模后1、3、7、14天时显著低于同期Con-Ipsi组,于造模后所有时间点均显著低于CFA-Contra组;CFA大鼠健侧TWL各时间点与Con-Contra相比均无差异。CFA大鼠患侧MWT于造模后所有时间点均显著低于同期Con-Ipsi组,于造模后1、3、7、14、28天时显著低于同期CFA-Contra组;与同期Con-Ipsi和Con-Contra组比,CFA大鼠健侧MWT于造模后28、42天时出现明显降低。CFA大鼠患侧DRG中P2X3R、TRPV1蛋白表达于造模后1、14、28、42天时均显著高于Con-Ipsi和Con-Contra组;CFA大鼠健侧DRG中P2X3R蛋白表达于造模后28、42天时显著多于Con-Contra组,而健侧DRG中TRPV1蛋白表达无差异。结论:CFA致炎性痛大鼠患侧足跖热痛觉过敏和机械痛觉异常持续存在,炎性痛后期可诱发出健侧足跖机械痛觉异常;P2X3R和TRPV1可能参与CFA大鼠早期和晚期外周痛敏化发生和维持,健侧背根神经节内P2X3R表达增加可能参与机械镜像痛的产生。

基于P2X7R/NLRP3信号通道研究痛风清热方对急性痛风性关节炎大鼠局部组织中炎性信号表达的影响

目的:观察痛风清热方对急性痛风性关节炎模型大鼠的踝关节滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R基因和蛋白表达及TNF-α、IL-1β、IL-18等炎症因子水平的影响。方法:选取雄性SD大鼠48只,随机分为4组,每组12只。模型组、痛风清热方组及秋水仙碱组按经典Coderre大鼠动物模型造模,正常对照组在相应部位给予等体积生理盐水。痛风清热方组予痛风清热方水提液灌胃、秋水仙碱组予秋水仙碱悬液灌胃。干预后取受试踝关节滑膜组织,用RT-qPCR法测定滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA表达,用Western blot法测定滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R蛋白表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18含量。结果:与正常对照组比较,模型组NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),与模型组比较,痛风清热方组及秋水仙碱组NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);与正常对照组比较,模型组大鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18水平显著升高(P<0.05),与模型组比较,痛风清热方组及秋水仙碱组大鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-18水平显著降低(P<0.05)。结论:痛风清热方能抑制急性痛风性关节炎大鼠踝关节滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、P2X7R mRNA及蛋白表达,并能降低滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-18水平,减少局部组织炎症反应。

背根神经节嘌呤受体亚型P2X3R介导小鼠术后急—慢痛转化

目的探讨不同部位不同嘌呤受体亚型在小鼠切口术后痛转化中的作用差异。方法足底切口恢复后注射PGE_(2)构建术后痛转化模型。第一部分:C57BL/6小鼠随机分为对照(Con)组、假敏化(sHP)组、敏化(HP)组,检测机械痛阈、自发痛评分和焦虑样行为;Western blot检测患侧L 3-5背根神经节(DRG)和脊髓背角(SCDH)中P2X3R和P2X7R蛋白表达变化。第二部分:C57BL/6小鼠随机分为Con组、HP+生理盐水组、HP+P2X3R拮抗剂组或HP+P2X7R拮抗剂组,观察拮抗不同亚型嘌呤受体对小鼠机械痛阈的影响。结果与正常小鼠相比,切口痛小鼠注射PGE_(2)后机械痛阈明显下降,自发痛评分明显增加(P<0.05),未表现出焦虑样行为(P>0.05),且P2X3R蛋白在DRG中表达明显增多(P<0.05),在SCDH中未检出,而P2X7R蛋白在DRG和SCDH各组中表达均无差异(P>0.05)。拮抗P2X3R能阻断术后痛转化的产生,而拮抗P2X7R无明显影响。结论切口痛小鼠经PGE_(2)诱导可出现急慢性痛的转化,不伴发焦虑样情绪,DRG中P2X3R可能是参与术后痛转化的关键受体之一。

基于生物信息学的人P2X7R结构分析及功能预测

目的:利用生物信息学分析人嘌呤能离子通道型受体7(purinergic ligand-gated ion channel 7 receptor,P2X7R)蛋白结构特征,同时对不同物种的P2X7R蛋白同源性、蛋白质间的相互作用、细胞抗原表位进行预测,为相关疾病诊断与治疗提供理论依据。方法:登录ProtParam、TMHMM、ProtScale及SignalP 5.0 Server等软件对人P2X7R蛋白进行分析预测。结果:人P2X7R蛋白由595个氨基酸组成,分子式为C_(3077) H_(4749) N_(835) O_(871) S_(40,)理论等电点PI为8.62,不稳定系数46.07,总平均亲水性为−0.317;该蛋白为亲水性蛋白,无信号肽同时存在跨膜区,属于跨膜蛋白;二级结构中存在157个α-螺旋,288个无规卷曲,分别占所有氨基酸比例26.39%、48.40%,三级结构预测结果的覆盖率为100%,序列相似度为80.34%,同时拉曼图结果分析该预测结构较为稳定;蛋白相互作用结果显示,存在多种与人P2X7R蛋白相互作用的蛋白,且P2X7R与炎症发生密切相关;该蛋白存在多个B、T细胞抗原表位,可为疫苗的研制提供思路。结论:基于生物信息学方法得到的人P2X7R蛋白分析具有一定可靠性,P2X7R参与炎症疾病的发生发展,通过预测筛选出的B、Th、CTL细胞抗原表位将为疾病的治疗提供方案。

夹脊电针对脊髓损伤大鼠P2X7R/NLRP3信号通路相关蛋白的影响

目的:观察夹脊电针对脊髓损伤大鼠P2X7R/NLRP3信号通路NLRP3蛋白、NLRP3mRNA及NLRP3/OX42的共定位表达的影响,为夹脊电针在临床中治疗脊髓损伤提供实验理论依据。方法:将120只SD大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、夹脊电针组、P2X7R干扰组和干扰对照组,每组根据不同时间点分为1 d、3 d、7 d和21 d共4个亚组,每个亚组6只,假手术组仅暴露大鼠脊髓,模型组采用改良Allen’s打击法制备SCI大鼠模型,夹脊电针组于模型组基础上给予夹脊电针治疗,P2X7R干扰组于模型制备基础上注射P2X7RsiRNA干扰病毒,干扰对照组注射阴性对照病毒,选取BBB评分1~3分者纳入本实验。各组大鼠在相应时间治疗后再次进行BBB评分,然后处死并取材。用Western blot法检测NLRP3蛋白的表达,用Realtime-PCR检测各组大鼠脊髓组织NLRP3 mRNA的表达,用免疫荧光双染法观察NLRP3与OX42共定位表达。结果:BBB评分结果显示,各时间点模型组BBB评分较假手术组显著降低(P<0.05),夹脊电针治疗后BBB评分明显升高(P<0.05);术后3 d、7 d和21 d,假手术组、夹脊电针组和P2X7R干扰组NLRP3蛋白表达量均低于模型组(P<0.05),干扰对照组NLRP3蛋白表达量高于P2X7R干扰组(P<0.05);各时间点模型组NLRP3 mRNA较假手术组均升高显著(P<0.05),夹脊电针治疗后在7 d、21 d时NLRP3 mRNA表达水平明显低于模型组(P<0.05),在3 d、7 d和21 d时,P2X7R干扰组NLRP3 mRNA表达水平低于干扰对照组和模型组(P<0.05);术后各时间点模型组NLRP3与OX42共定位阳性表达较假手术组明显增多,3 d、7 d和21 d时夹脊电针组NLRP3与OX42共定位阳性表达明显低于模型组。结论:夹脊电针能降低脊髓损伤大鼠NLRP3蛋白、NLRP3 mRNA及NLRP3/OX42的共定位表达,减轻脊髓损伤大鼠炎症反应,改善脊髓损伤大鼠运动功能。

芒柄花黄素调控P2X7R/NLRP3通路对高糖诱导的心肌细胞炎症反应与焦亡的影响

目的探讨芒柄花黄素(FN)调控嘌呤能2X7受体(P2X7R)/核苷酸结合寡聚化结构域受体蛋白3(NLRP3)通路对高糖诱导的心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡的影响机制。方法将H9C2细胞分为对照组、高糖(HG)组、HG+FN低浓度(FN-L)组、HG+FN中浓度(FN-M)组、HG+FN高浓度(FN-H)组、HG+FN-H+P2X7R激活剂(ATP)组。24 h后,CCK-8检测H9C2细胞活力变化;TUNEL染色检测细胞焦亡变化;qRT-PCR检测焦亡因子白细胞介素(IL)-18、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)、NLRP3 mRNA表达水平;ELISA检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6和IL-1β水平;Western blot检测P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达水平。结果与对照组相比,HG组细胞活力显著下降(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05);与HG组相比,HG+FN-L组、HG+FN-M组、HG+FN-H组细胞活力显著增加(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著降低(P<0.05);与HG+FN-H组相比,HG+FN-H+ATP组细胞活力显著下降(P<0.05),但焦亡率、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、P2X7R、IL-18、Caspase-1、NLRP3蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论FN通过抑制P2X7R/NLRP3通路减轻高糖诱导的心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡,缓解细胞损伤。

MicroRNA-155通过P2X7R激活NLRP3炎性小体促进ApoE-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块的形成

目的:探索在ApoE−/−小鼠中,microRNA-155 (miR-155)调控NLRP3炎症小体参与其颈动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)斑块形成的可能机制,为预防和治疗AS提供理论基础。方法:36只6周龄的雄性ApoE−/−小鼠随机分为6组(每组6只):blank组、NC组、miR-155 mimic组、miR-155 inhibitor组、miR-155 mimic and NC组、miR-155 mimic and P2X7R(-)组。利用PCR技术检测小鼠颈动脉斑块中miR-155的表达水平,HE染色显示颈动脉内膜,利用western blot技术检测P2X7R、NLRP3炎症小体相关蛋白、IL-1β表达水平。结果:与NC组相比,miR-155 mimic组中miR-155表达、P2X7R、NLRP3炎症小体相关蛋白以及IL-1β表达的升高有显著的统计学意义(P −/−小鼠中,miR-155可能通过调控P2X7R,激活NLRP3炎症小体,增强炎症反应,从而促进AS斑块的形成和发展。

夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织P2X7R、NLRP3蛋白表达的影响

目的:观察夹脊电针对急性脊髓损伤(ASCI)大鼠P2X7R、NLRP3蛋白和基因表达的影响,探讨夹脊电针治疗急性脊髓损伤作用机制。方法:72只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(Model)和夹脊电针组(EA),采用Allen’s打击法制备脊髓损伤模型,治疗1 d、3 d、7 d、21 d后采用BBB评分法对大鼠脊髓损伤后运动功能进行评估;于治疗后1 d、3 d、7 d、21 d提取脊髓组织,蛋白印迹法(Western blot)测定大鼠脊髓组织中P2X7R、NLRP3蛋白表达的变化,实时荧光定量PCR测定NLRP3 mRNA、P2X7R mRNA的表达变化。结果:蛋白印迹法结果显示,Sham组中NLRP3、P2X7R蛋白表达均维持在少量而稳定的低水平,与Sham组比较,Model组3 d、7 d和21 d NLRP3蛋白表达显著升高(P<0.05),与Model组相比,EA组在各时间点NLRP3蛋白表达均下降(P<0.05);而与Sham组比较,Model组P2X7R蛋白表达在3 d、7 d和21 d升高(P<0.05),与Model组比较,EA组P2X7R表达在术后7 d、21 d蛋白表达明显下降(P<0.05);实时荧光定量PCR结果显示,与Sham组相比较,Model组各时间点NLRP3 mRNA、P2X7R mRNA表达均升高(P<0.05),与Model组比较,EA组NLRP3 mRNA、P2X7R mRNA表达均下降(P<0.05)。结论:夹脊电针通过抑制P2X7R、NLRP3的表达而发挥对急性脊髓损伤大鼠的治疗作用。

miR-373通过P2X7R影响抑郁症小鼠行为的作用机制

目的探讨miR-373对抑郁症小鼠模型抑郁样行为,小胶质细胞激活和焦亡的影响。方法采用慢性不可预知应激构建抑郁症小鼠模型。蔗糖偏好,强迫游泳,尾部悬挂和社会实验评估小鼠的抑郁样行为。免疫荧光双染小胶质细胞标志物Iba-1和小胶质细胞活化标志物OX-42以评估小鼠海马层中小胶质细胞增殖和活化状态。TUNEL试剂盒检测小胶质细胞的凋亡。荧光定量PCR检测miR-373的表达水平。蛋白质印记检测P2X7R和细胞焦亡相关蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-373和P2X7R的靶向关系。结果慢性不可预知应激处理的小鼠,蔗糖偏好度和社交时间显著下调,并且强迫游泳和尾部悬挂不动时间显著增加(P<0.05)。miR-373在抑郁症模型小鼠中异常高表达,且能够缓解小鼠的抑郁样行为(P<0.05)。miR-373靶向负调控小鼠海马层小胶质细胞中P2X7R的表达水平(P<0.01)。miR-373抑制小鼠海马层中小胶质细胞增殖和激活(P<0.01)。miR-373抑制小胶质细胞中Caspase-1,C-caspase-1,NLRP3,IL-1β和IL-18表达,并抑制小胶质细胞凋亡(P<0.05)。结论miR-373通过靶向抑制P2X7R的表达,从而缓解抑郁症小鼠模型的抑郁样行为,并抑制其海马层中小胶质细胞活化和焦亡。

郁金提取物对慢性压迫性神经损伤大鼠镇痛效果及脊髓P2X4R表达的影响

目的：探讨不同剂量郁金提取物对慢性压迫性神经损伤（CCI）大鼠痛阈及脊髓P2X4R表达的影响。方法：建立CCI大鼠模型,将SD大鼠分为正常组,模型组,郁金提取物低、中、高剂量组,加巴喷汀组和溶媒组,对各组大鼠进行机械缩足阈值测定,采用蛋白免疫印迹法检测大鼠L4~L6脊髓中P2X4R表达。结果：1与正常组相比,造模后大鼠机械痛阈值显著下降（P〈0.05）,说明神经病理性模型造模成功;与溶媒组相比,高剂量组和加巴喷汀组显著上调CCI模型大鼠机械痛域值（P〈0.05）。2造模后大鼠L4~L6脊髓的中P2X4R表达灰度值与内参的比值成上升趋势,均较正常组显著增加（P〈0.05）;与溶媒组相比,高剂量组和加巴喷汀组能显著降低L4~L6脊髓的中P2X4R的表达（P〈0.05）。结论：高剂量郁金提取物可能通过降低CCI模型大鼠脊髓的中P2X4R而发挥抗神经病理性疼痛的作用。

黄芪多糖减轻大脑中动脉闭塞模型大鼠的血脑屏障损伤:基于抑制P2X7R通道

目的研究黄芪多糖(APS)通过P2X7R通道对大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠血脑屏障的影响。方法建立血脑屏障体外模型及OGD模型,通过试漏实验对体外血脑屏障的形成进行初步判断,LC-MS检测APS对血脑屏障体外模型通透性的影响。将18只SD大鼠随机分为3组:对照组、MCAO+生理盐水组、MCAO+APS组,6只/组。对照组大鼠腹腔注射生理盐水,连续3 d;建立MCAO模型,造模成功后,MCAO+生理盐水组大鼠腹腔注射生理盐水,连续3 d;MCAO+APS组大鼠腹腔注射APS(45 mg/kg),连续3 d。取大鼠脑组织、血清,进行依文思蓝(EB)含量测定,制作标准曲线得到吸光度值换算成EB含量以评价血脑屏障的通透性;运用ELISA检测各组大鼠脑组织中三磷酸腺苷(ATP)含量变化情况;运用Western blot检测各组大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、P2X7R表达水平。结果经过APS处理可修复ATP或OGD状态下血脑屏障的完整性。与对照组相比,MCAO+生理盐水组、MCAO+APS组大鼠脑组织EB含量增多(P<0.01)、血脑屏障通透性增大(P<0.01),与MCAO+生理盐水组相比,MCAO+APS组大鼠脑组织EB含量减少(P<0.05),血脑屏障通透性改善(P<0.05)。与对照组相比,MCAO模型大鼠脑组织中ATP含量减少(P<0.05),MMP-9、P2X7R表达水平升高(P<0.01);与MCAO+生理盐水组相比,MCAO+APS组ATP含量有所恢复(P<0.01),MMP-9、P2X7R表达水平降低(P<0.05)。结论黄芪多糖通过稳定脑缺血缺氧状态下的内环境,下调MMP9表达水平,改善血脑屏障的通透性,起到对MCAO模型大鼠脑组织保护作用;并且其作用机制可能与抑制P2X7R通道相关。