Tricellulin与IL-13Rα2在结直肠癌中的表达及相关性分析

目的探讨Tricellulin与IL-13Rα2在早期与晚期结直肠癌组织中的表达及Tricellulin与IL-13Rα2的表达相关性。方法选取滨州医学院附属医院2020年1—7月的收治的42例结直肠癌患者术后的石蜡组织标本。采用免疫组化法检测Tricellulin与IL-13Rα2表达,分析其与临床病理特征的关系,观察肿瘤不同分化程度中Tricellulin核表达的情况,分析Tricellulin与IL-13Rα2的表达相关性。结果与TNM分期较早(Ⅰ/Ⅱ期)的患者比较,结直肠癌TNM分期较晚(Ⅲ/Ⅳ期)的患者中Tricellulin与IL-13Rα2的H-Score评分较高(P<0.05)。低分化结直肠癌组织中存在Tricellulin异常的核表达(P<0.05)。Pearson相关性分析显示IL-13Rα2与Tricellulin的表达呈正相关(P<0.05)。结论Tricellulin与IL-13Rα2在晚期结直肠癌组织中表达明显增加。低分化结直肠癌组织中存在Tricellulin异常的核表达。IL-13Rα2与Tricellulin的表达存在正相关。

小鼠sIL-13Rα2在毕赤酵母菌中的表达及初步活性分析

目的:克隆并在毕赤酵母中表达小鼠sIL-13Rα2基因。方法:从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,应用分段PCR的方法将sIL-13Rα2基因定向克隆至酵母表达质粒pPICZα-A,并转染至毕赤酵母菌表达系统进行目的蛋白表达。目的蛋白行SDS-PAGE和Western分析。结果:克隆出可溶性IL-13Rα2目的基因片段,构建重组pPICZα-A/sIL-13 Rα2表达载体,成功转染至毕氏酵母菌,诱导表达出可溶性IL-13Rα2目的蛋白。结论:已成功克隆并在毕赤酵母中表达了小鼠可溶性IL-13Rα2目的基因,为应用sIL-13Rα2蛋白治疗哮喘及其他过敏性疾病奠定了基础。

日本血吸虫感染鼠巨噬细胞IL-13Rα2的表达

目的检测IL-13的诱骗受体IL-13Rα2在血吸虫病巨噬细胞的表达,为从细胞水平探讨Th2型免疫性疾病分子病理机制奠定基础。方法建立日本血吸虫病鼠模型,采用免疫荧光标记法分别检测肝肉芽肿和原代巨噬细胞IL-13Rα2蛋白的表达情况。结果荧光显微镜下观察:肝肉芽肿内可见似"咖啡豆样"散在分布的IL-13Rα2免疫阳性信号,巨噬细胞膜内缘呈异常增强的环状荧光。结论巨噬细胞是IL-13Rα2阳性表达细胞,IL-13Rα2是血吸虫病重要的免疫病理调节分子。

sIL-13Rα2抑制IL-13介导的NIH-3T3胶原I的合成及血吸虫病肝组织中sIL-13Rα2/IL-13的表达(英文)

目的研究在成纤维细胞NIH-3T3中IL-13可溶性受体sIL-13Rα2对IL-13的抑制作用,为进一步研究sIL-13Rα2对日本血吸虫感染小鼠体内肝纤维化的治疗作用奠定基础。方法用ELISA和RT-PCR检测感染日本血吸虫的BALB/c小鼠0、6、8、10和12w不同感染时期肝脏组织IL-13和sIL-13Rα2表达和转录水平。构建sIL-13Rα2表达质粒转染成纤维细胞NIH-3T3,用IL-13(50ng/mL)刺激转染后成纤维细胞NIH-3T3,用RT-PCR和Western blotting分别检测该细胞分泌的Ⅰ型胶原。结果感染后小鼠肝脏肉芽肿组织中IL-13和sIL-13Rα2的蛋白表达水平随感染时间的延长而逐渐增高,第8wIL-13水平达到高峰(16.1586pg/mL),随后逐渐降低但仍高于正常水平(3.4146pg/mLP=0.017);第10wsIL-13Rα2的分泌达到高峰(4827.426pg/mL),以后逐渐减低,但仍高于正常水平(4057.112pg/mLP=0.021)。IL-13和sIL-13Rα2的mRNA转录趋势和ELISA检测结果相符合,均随感染时间的延长而增高,分别在第8w和第10w达到最高峰,随后逐渐降低但仍高于正常组小鼠(P=0.033;P=0.025)。实验组(sIL-13Rα2=2mg/mL)Ⅰ型胶原mRNA转录水平较正常对照组减低8.83%(P=0.012);蛋白水平较对照组减低7.41%(P=0.031)。结论sIL-13Rα2在NIH-3T3细胞中对IL-13有抑制作用,提示sIL-13Rα2在治疗血吸虫病肝纤维化中具有潜在价值。

IL-13对A549细胞IL-13Rα2表达及增殖和迁移的影响

目的探讨IL-13对人肺腺癌细胞(A549)IL-13受体α2(IL-13Rα2)表达及增殖、迁移的影响。方法采用定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)、Western blot法检测IL-13刺激A549细胞后,检测IL-13Rα2的转录和蛋白质表达水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中的可溶型IL-13受体α2(sIL-13Rα2)含量;流式细胞术(FCM)检测胞膜型IL-13受体α2(memIL-13Rα2)、胞内型IL-13受体Rα2(iIL-13Rα2)的细胞数。MTT法、Transwell实验和细胞划痕实验观察IL-13对A549细胞增殖及迁移作用的影响。结果 A549细胞可表达IL-13Rα2,并且IL-13在较低质量浓度(10、20 ng·mL^(-1))时能上调A549细胞IL-13Rα2的表达水平,而对增殖和迁移无显著影响;在较高质量浓度(50、100 ng·mL^(-1))时对IL-13Rα2的上调作用不明显,但能促进细胞增殖和迁移。另外低质量浓度IL-13(10、20 ng·mL^(-1))对IL-13Rα2整体水平、sIL-13Rα2、memIL-13Rα2以及iIL-13Rα2的表达均有不同程度的上调(P<0.05);高质量浓度IL-13(50、100 ng·mL^(-1))刺激条件下IL-13Rα2整体水平的上调不明显且不再有剂量依赖性,sIL-13Rα2水平无明显改变、memIL-13Rα2表达略有增加、iIL-13Rα2水平明显下调(P<0.05)。结论IL-13对人肺腺癌A549细胞IL-13Rα2表达水平及增殖、迁移的影响具有双相性和差异性;IL-13Rα2在肺腺癌A549中发挥抑制IL-13促细胞增殖和迁移的作用。

抗IL-13Rα2单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定

目的:在成功制备小鼠抗人IL-13Rα2高亲和力单克隆抗体(mAb)的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人IL-13Rα2 mAb杂交瘤细胞LX147-7中提取总RNA,以此为模板反转录获得cDNA,用针对小鼠mAb重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应。将PCR产物连入克隆载体,经筛选阳性克隆,PCR和酶切鉴定正确后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因。结论:获得了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因序列,为构建相关基因工程抗体打下了良好基础。

小鼠IL-13Rα2胞外区基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆并在原核表达载体pET-28a中表达小鼠IL-13受体α2(sIL-13Rα2)胞外区基因。方法利用小鼠3T3细胞总RNA,逆转录为cDNA,设计引物,常规PCR法扩增出小鼠sIL-13Rα2基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,经双酶切及测序鉴定后,再亚克隆入pET-28a,构建重组质粒pET-28a/sIL-13Rα2,并转化到大肠杆菌BL21感受态细胞。IPTG诱导表达后表达产物经Western blot鉴定。结果PCR扩增产物与预期大小相符合,重组质粒经双酶切鉴定及基因序列测定表明构建正确;sIL-13Rα2蛋白表达以包涵体形式存在,可与山羊抗小鼠sIL-13Rα2单克隆抗体发生特异性反应,相对分子质量约为36 ku。结论成功原核表达sIL-13Rα2基因,为进一步探讨sIL-13Rα2在血吸虫病肝纤维化过程中的调节作用奠定了基础。

IL-13Rα2在肿瘤研究中的进展

近年来对肿瘤的治疗,越来越倾向于靶向治疗。所谓靶向治疗,即是在细胞分子水平上,针对已经明确的致癌位点（该位点可以是肿瘤细胞内部的一个蛋白分子,也可以是一个基因片段）来设计相应的治疗药物,药物进入体内会特异地选择致癌位点来结合发生作用,使肿瘤细胞特异性死亡,而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞,所以分子靶向治疗又被称为＂生物导弹＂。

转化生长因子β1 RⅡ和白细胞介素13 Rα2在血吸虫病肝纤维化中的作用

血吸虫病肝纤维化是由被激活的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)生成大量的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)在肝组织间质中过度沉积所致。研究发现,细胞因子网络紊乱是导致血吸虫病肝纤维化发生发展最根本的原因。转化生长因子β1(TGF-β1)和白细胞介素13(IL-13)都通过肝星状细胞膜上特异性受体来介导纤维化的发生。本文就上述因子作用的诱饵受体TGF-β1 RⅡ(TGF-β1 typeⅡreceptor)和IL-13 Rα2(IL-13 receptorα2)在血吸虫病肝纤维化中的作用进行综述。

IL-13Rα2及IL-13在胶质瘤发生发展及治疗中的研究进展

IL-13为活化Th2细胞分泌的多功能细胞因子,在炎症性疾病中具有重要作用.其高亲和力受体IL-13Rα2,作为诱导受体在恶性胶质瘤中高表达,与肿瘤不良预后相关.胶质瘤细胞中,IL-13Rα2与IL-13结合通过其胞内尾端与IL-4Rα相互作用,抑制IL-4R介导的STAT6信号通路,进而促进肿瘤细胞的侵袭转移与增殖,抑制肿瘤细胞凋亡.由于IL-13Rα2在胶质瘤中特异性高表达,使其成为胶质瘤靶向治疗和免疫治疗的理想位点,且已取得了突破性进展.IL-13Rα2与IL-13在胶质瘤中作用及机制的进一步明确,有利于为胶质瘤治疗提供充分的依据.

IL-13Rα2介导的毒素融合蛋白在肿瘤治疗中的应用

近年来IL-13受体IL-13Rα2的研究已经成为一个新兴热点,IL-13Rα2在许多肿瘤细胞细胞表面存在特异性高表达,而在正常组织中不表达或表达量很低,通过IL-13Rα2介导的毒素融合蛋白靶向治疗肿瘤也已成为肿瘤诊断和免疫治疗研究中的重要方面。随着对IL-13Rα2结构和功能及其与肿瘤关系研究的不断深入,将为肿瘤的靶向治疗提供新的思路,为肿瘤的临床治疗提供新的理论依据。对IL-13Rα2在不同肿瘤中的表达及IL-13和不同毒素融合得到的毒素融合蛋白在细胞和动物体内等不同水平上对肿瘤治疗的作用做出了相应概括,并对通过IL-13Rα2介导的毒素融合蛋白治疗肿瘤机理的研究以及融合蛋白方法改进及其它相关治疗方法等方面作出综述。

联合应用sIL-5Rα及sIL-13Rα2对哮喘小鼠IgE、INF-γ水平的影响

目的探讨联合应用sIL-5Rα及sIL-13Rα2对哮喘小鼠IgE、INF-γ水平的影响。方法 50只BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、sIL-5Rα治疗组、sIL-13Rα2治疗组及联合sIL-5Rα、sIL-13Rα2治疗组(简称联合治疗组)。哮喘组及治疗组用鸡卵蛋白(OVA)和氢氧化铝致敏,用OVA激发,建立小鼠哮喘模型,正常组用生理盐水代替,其中sIL-5Rα治疗组、sIL-13Rα2治疗组及联合治疗组分别于激发前30min腹腔注射100μgsIL-5Rα、sIL-13Rα2及联合应用sIL-5Rα及sIL-13Rα2各100μg,正常组和哮喘组激发前30min腹腔注射相同体积生理盐水。比较各组支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清IgE、INF-γ水平变化。结果与正常组比较,哮喘组BALF及血清中IgE含量明显升高,而INF-γ含量明显降低(P<0.01);联合治疗组可有效降低BALF及血清中IgE含量,同时可升高INF-γ的含量,与哮喘组比较有显著性差异(P<0.01);与单独治疗组相比,联合治疗组亦具有显著性差异(P<0.01)。结论联合应用sIL-5Rα及sIL-13Rα2治疗哮喘小鼠,可明显降低BALF及血清中IgE含量,同时升高INF-γ含量,从而达到缓解和治疗哮喘的目的。

IL-13Rα2与乳腺癌肺转移以及ER阴性病人不良预后的相关性研究

乳腺癌是女性肿瘤中发病率最高,且致死率仅次于肺癌的癌症种类。大部分乳腺癌病人死亡的主要原因是癌细胞向远端器官发生了转移。在本文中,我们研究了IL-13Rα2与乳腺癌转移以及病人不良预后的相关性,并初步探寻了其影响癌细胞转移的可能机制。通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹实验、Kaplan-Meier生存分析、细胞免疫荧光和细胞侵袭等实验方法,我们证明了IL-13Rα2的表达与ER阴性乳腺癌细胞的肺转移能力、ER阴性乳腺癌病人的肿瘤转移和不良预后正相关,与乳腺癌样本中ER的表达负相关,并且其中的作用机制可能与IL-13通过IL-13Rα2调节肿瘤细胞上皮-间质转换(EMT)有关。

IL-13Rα2致敏的DC—CTL对人胶质瘤干细胞的体外杀伤效应

目的比较IL-13Rα2致敏的DC—CTL对人胶质瘤干细胞和普通胶质瘤细胞的体外杀伤效应。方法用神经干细胞无血清培养法培养出U251胶质瘤干细胞并进行免疫荧光鉴定，GM—CSF、IL-4体外诱导成树突状细胞（DCs），与人工合成的IL-13Rα2（345-354）多肽孵育后再激活T淋巴细胞，CFDA—SE／PI双荧光染料标记的流式细胞计数法检测其对U251胶质瘤干细胞和普通U251胶质瘤细胞的体外杀伤作用。结果IL-13Rα2（345-354）抗原肽致敏的Dc—CTL对U251胶质瘤干细胞的杀伤率为（18．59±1．42）％，高于未用抗原肽致敏的DC—CTL及CIK对胶质瘤干细胞的杀伤率，其杀伤率分别为（10．35±0．98）％和（7．15±0．58）％，差异具有统计学意义（P〈0．001）。同时，IL-13Rα2（345-354）抗原肽致敏的DC—CTL对U251胶质瘤干细胞的杀伤率也高于其对普通U251细胞（11．53±0．65）％的杀伤率（P=0．001）。结论IL-13Rα2（345-354）致敏的Dc—CTL在体外对胶质瘤干细胞具有杀伤作用，且杀伤率高于对普通的胶质瘤细胞。

不同时间点GABA_A受体α_2亚基在神经病理性痛中的表达

为探讨慢性坐骨神经压榨性损伤(CCI)模型背根神经节GABAA受体α2亚基在不同时间点(3、7、12d)表达。采用雄性SD大鼠28只,随机分为4组(n=7)。A组(假手术组)、B组(CCI术后3d)、C组(CCI术后7d)、D组(CCI术后12d),取L4-L6背根神经节做冰冻切片,用免疫荧光染色方法观察GABAA受体α2亚基表达变化。结果显示,(1)CCI模型鼠热缩足反射潜伏期与假手术组相比显著缩短(P<0.01)。(2)免疫荧光染色示A组、B组、C组、D组DRG神经元均有GABAA受体α2亚基表达,分布于DRG各种直径神经元细胞膜上。(3)与A组比较,D组L4-L6背根神经节GABAA受体α2亚基受体的表达减少(P<0.05);B组、C组变化不明显(P>0.05)。由此可知,慢性坐骨神经压榨性损伤(CCI)模型背根神经节GABAA受体α2亚基表达下调,提示GABAA受体α2亚基参与了神经病理性痛的发生。

白细胞介素13受体α2在纤维化疾病中的研究进展

纤维化可发生于多种器官（如肺脏、肝脏、神经系统、心血管系统等）。主要病理改变为器官组织内纤维结缔组织增多,实质细胞减少,持续进展可致器官结构和功能减退,乃至衰竭。

白介素-13受体α2抗原肽致敏的DC-CIK细胞对人胶质瘤U_(251)细胞的杀伤效应

目的:观察人脑胶质母细胞瘤特异性抗原(IL-13Rα2)致敏的同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)在体外对U251的细胞毒效应。方法:用密度梯度分离法获取HLA-A*0201+健康志愿者的人外周血树突状细胞(dendritic cells,DC)的前体细胞与淋巴细胞,并在体外诱导而获得成熟的DC细胞和CIK细胞。收获IL-13Rα2抗原负载的DC与CIK细胞共培养,使DC递呈肿瘤抗原予CIK细胞,并激活CIK细胞。激活的CIK细胞与U251细胞在96孔板内混合培养24 h后,以CCK-8试剂间接检测其对U251细胞杀伤率。结果:IL-13Rα2抗原肽成功负载DC,CIK细胞被负载抗原的DC激活并增殖;特异性抗原肽激活的CIK细胞对人胶质瘤U251细胞有杀伤效应(P<0.01)。结论:IL-13Rα2抗原肽激活的CIK细胞对人胶质瘤U251细胞有杀伤效应。

人脑胶质瘤特异抗原肽白介素13α2受体的原核表达

目的:构建白介素13 α2受体(Interleukin-13α2 Receptor,IL-13Rα2)基因的表达质粒,并检测其在体外原核表达情况,为脑胶质瘤的免疫治疗奠定基础。方法:用RT-PCR技术从U251胶质瘤细胞株扩增IL-13Rα2基因,并与克隆质粒pMDl9 Simple T载体连接转入DH5α菌克隆,筛选重组阳性菌落,用Xhol和HindⅢ将目的基因从克隆质粒上切下并与同样双酶切后的表达质粒pET-28a连接,转入BL21(DE3)菌,提取重组质粒进行酶切及测序鉴定正确后,在IPTG诱导下原核表达IL-13R α2抗原肽,并利用镍柱进行纯化回收,SDS-PACE检测表达蛋白。结果:成功扩增出IL-13Rα2基因序列,大小为1142 bp,并表达纯化出IL-13Rα2抗原肽,大小为60 kD,于诱导第3 h表达量最高,以包涵体形式表达。结论:IL-13Rα2基因表达质粒能在体外成功构建,并能在IPTG诱导下成功表达及纯化得到IL-13Rα2抗原肽。

腹腔镜肝门肠吻合术治疗新生儿胆道闭锁症疗效初步研究

目的探讨采用腹腔镜肝门肠吻合术治疗新生儿胆道闭锁症(BA)的疗效及其血清IL-12p40和IL-13Rα2水平变化。方法2014年3月~2018年6月在我院接受救治的72例BA患儿,其中42例接受腹腔镜肝门肠吻合术,30例接受开腹肝门肠吻合术治疗。采用ELISA法检测血清IL-12p40和IL-13Rα2水平。结果术前,腔镜组患儿年龄为(55.8±7.4)d,身高为(64.4±2.8)cm,体质量为(3.8±0.6)kg,与开腹组的(57.3±8.2)d,身高为(65.2±3.0)cm,体质量为(4.1±0.8)kg比,差异无显著性(P>0.05);腹腔镜组患儿手术时间长于开腹组【(187.8±32.6)min对(152.4±39.3)min,P<0.05】,但术中出血量和进食时间均显著少于或快于开腹组【分别为(15.3±5.2)mL对(33.6±12.6)mL,P<0.05和(1.3±0.4)d对(2.3±0.7)d,P<0.05】,两组患儿术后麻醉苏醒时间比较,差异无统计学意义【(77.5±18.0)min对(82.1±20.2)min,P>0.05】;手术前,开腹组血清IL-12p40和IL-13Rα2水平分别为【0.7(0.1,2.0)】ng/mL和【6.3(2.2,17.6)】ng/mL,与腔镜组的【0.8(0.2,2.4)】ng/mL和【6.7(2.0,19.3)】ng/mL比,无显著差异(P>0.05),术后分别为【0.4(0.1,0.9)】ng/mL和【1.1(0.4,3.6)】ng/mL,与腔镜组的【0.4(0.2,1.0)】ng/mL和【1.1(0.6,4.0)】ng/mL比,也无显著差异(P>0.05);术后随访3个月,37例(51.4%)BA患儿预后良好,其中腹腔镜组5例(11.9%)继发胆管炎死亡,开腹组4例(13.3%)死亡,两组患儿预后情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用腹腔镜肝门肠吻合术治疗新生儿胆道闭锁症疗效确切、安全,值得进一步验证。