R脊椎蛋白1协同Wnt3A通过Wnt／β-联蛋白信号通路促进成骨细胞分化

目的探究R脊椎蛋白1（RSPO1）在成骨分化中的作用及机制。方法利用xCELLigence系统研究RSPO1对C2C12细胞增殖及细胞活力的影响。通过磷酸酶检测试剂盒检测ALP活性，ELISA法检测护骨因子的表达，通过双荧光素酶报告基因检测系统，利用TOPflash T细胞因子（TCF）报告质粒检测Wnt/β-联蛋白（β-catenin）信号通路活性。利用蛋白印迹法检测β-catenin蛋白累积情况。采用t检验进行统计学分析。结果RSPO1对C2C12细胞增殖及细胞活力无影响。RSPO1单独处理上调ALP活力（2.85±0.08和1.74±0.21，t=3.014，P〈0.05）及护骨因子表达能力（1.29±0.13和1.0±0.21，t=3.348，P〈0.05）较弱，而RSPO1及Wnt3A协同处理可显著增强ALP活力（81.37±5.08和1.74±0.21，t=31.31，P〈0.01）并上调护骨因子表达（5.26±0.60和1.00±0.21，t=6.99，P〈0.01）。RSPO1协同Wnt3A激活TCF活性并诱导β-catenin蛋白积累（3.28±0.18和1.00±0.21，t=10.94，P〈0.05）。但是，单独RSPO1对TCF的活性及β-catenin积累无影响（1.25±0.08和1.0±0.21，t=2.225，P〉0.05）。结论RSPO1可协同Wnt3A激活Wnt/β-catenin信号通路，诱导细胞成骨分化，提示RSPO1有望应用于RA的治疗。

G蛋白耦联受体49在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨G蛋白耦联受体49（GPR49）在胰腺癌组织中表达的临床意义及其生物学作用。方法采用组织芯片和免疫组织化学染色技术比较77例胰腺癌患者癌组织和癌旁组织中GPR49的表达，并分析其在不同病理分级和临床分期患者癌组织中的表达水平。以GPR49阳性胰腺癌细胞株CFPAC-1为细胞模型，GPR49的配体R-脊椎蛋白1进行体外刺激，采用细胞计数方法分析其对CFPAC-1细胞的促增殖作用，并采用流式细胞术分析R-脊椎蛋白1对CFPAC-1细胞表达细胞膜CD44水平的影响。将R-脊椎蛋白1孵育后的CFPAD1细胞皮下接种于裸鼠，观察小鼠成瘤时间和肿瘤大小。统计学分析分别采用t检验和单因素方差分析。结果77份胰腺癌组织中普遍表达GPR49。胰腺癌组织中GPR49的免疫组织化学染色综合评分为（9．0±2．4）分，高于癌旁组织的（5．7±2．4）分，差异有统计学意义（t=8．995，P〈0．01）。GPR49的表达与患者肿瘤大小、病理分级、淋巴结转移、临床分期等无明显相关性（P均〉0．05）。体外实验表明，R-脊椎蛋白1可促进CFPAC-1细胞增殖，上调CFPAC-1表达CD44。体内实验表明，R-脊椎蛋白1刺激组小鼠在接种CFPAC-1细胞后30d的肿瘤体积为（606．0±188．0）mm3，大于PBS刺激组的（364．2±83．7）mm3，差异有统计学意义（t=2．616，P=0．031）。结论GPR49普遍表达于胰腺癌细胞，R-脊椎蛋白1／GPR49途径对胰腺癌细胞具有促增殖作用，提示其可能是干预胰腺癌生长的潜在靶点。