产R-肾上腺素脱氢酶菌种筛选与产酶条件研究

以肾上腺酮为底物,在1 300余份土壤中筛选到一株不对称还原肾上腺酮生成R-肾上腺素的菌株S289,产物得率为23.3%,对映体过量值e.e.高达99%,并对其产酶条件进行了研究,使其酶活和比酶活分别提高了168%和230%.

生物转化体系中R-肾上腺素光学纯度的测定

以羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)为手性选择剂,采用高效毛细管电泳技术,对肾上腺素对映体拆分进行了研究。以55mmol/LTris-磷酸(含30g/LHP-β-CD,pH2.5)为运行缓冲液,分离电压23kV,柱温22℃,采用压力正极进样(3kPa×4s),肾上腺素对映体于13min内获得良好分离(RS=2.12)。在波长214nm处进行紫外检测,迁移时间和峰面积的相对标准偏差≤3.7%,峰面积与S-肾上腺素含量在0.3～130μg/L范围内呈良好的线性关系(相关系数为0.9951),回收率在97.5%～102.5%之间,肾上腺素对映体检出限(S/N=3)可达0.1μg/L,将其应用于手性生物转化样品分析,可很好地检测出R-肾上腺素的光学纯度。本研究为该类药物的生物不对称转化提供了很好的分析方法。

一种新型的R-肾上腺素生物不对称合成工艺

目前合成R-肾上腺素的方法主要是手性拆分的方法和以氨基酸为原料通过生物法制备R-肾上腺素。传统的手性拆分工艺因工艺路线长、拆分收率低导致R-肾上腺素生产成本高。氨基酸生物转化法也因存在着杂质多且生产成本高的问题而未被广泛应用。在此,建立了一种全新的生物不对称合成方法直接制备手性药物R-肾上腺素,以2-氯-3,4-二羟基苯乙酮为原料,经甲胺化反应、成盐反应合成得到盐酸肾上腺酮,再经酶不对称催化反应合成手性药物R-肾上腺素。最优工艺参数为:氮气保护下2-氯-3,4-二羟基苯乙酮和甲胺摩尔比为1:8,生物酶的用量为盐酸肾上腺酮重量3.3%、酶催化反应温度为(30±2)℃,酶催化反应时间为24 h,制备得到的R-肾上腺素手性纯度不低于99.0%。以生物不对称法合成R-肾上腺素,避免了手性拆分步骤,缩短了工艺流程,收率显著提高,产品杂质少,方法可行,适合于工业化生产。

生物催化肾上腺酮不对称合成R-肾上腺素

研究了生物不对称还原肾上腺酮生成单一对映体R-肾上腺素.以肾上腺酮为前体,从土壤中筛选到一株对肾上腺酮具有较高立体选择性催化的菌株S289,以其为出发菌株,依次进行紫外和亚硝酸诱变,得到R-肾上腺素高转化菌株UN-78.确定了最佳转化条件,在初始底物浓度为10 mmol/L、摇床转速180 r/m in、温度30℃和pH 6.5,R-肾上腺素得率达56.2%,对映体过量值e达到99.8%.