miR-145下调与结直肠癌上皮间叶转化的分子机制探讨

目的:研究miR-145通过靶向调节目的基因对结直肠癌(CRCs)上皮间叶转化(EMT)的影响。方法:通过实时荧光定量PCR检测不同进展CRC肿瘤患者组织样本,验证miRNA差异表达;利用划痕实验检测多株CRC细胞株过表达miR-145后细胞的转移能力;通过Western blot检测过表达miR-145后细胞EMT相关分子标志表达变化;结合生物信息学、Luciferase报告系统以及Western blot预测并验证miR-145的靶基因。结果:miR-145在高转移预后差的CRC肿瘤组织中表达明显上调,且过表达miR-145后CRC细胞株转移能力明显降低,间叶细胞多种分子标志显著下调,而上皮细胞多种分子标志显著上调,其转移能力明显降低。生物信息学预测microRNA靶基因以及实验证实miR-145可以直接靶向调节TGFBR2蛋白表达,是TFG-β信号通路的主要受体及信号分子。结论:miR-145直接靶向调节TGFBR2影响TFG-β通路,抑制EMT过程,进而抑制肿瘤的侵袭和转移。过表达miR-145能够抑制CRC细胞的转移。miR-145是临床诊断CRC的新靶标,对CRC的防治及预后分析具有潜在的临床意义。

miR-145-5p靶向FGF5对缺血/再灌注损伤诱导的神经细胞凋亡和氧化应激的调控作用

目的研究miR-145-5p对体外缺血/再灌注(I/R)损伤神经细胞模型的调控作用,并探讨其机制。方法运用氧-葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)建立脑缺血/再灌注损伤细胞模型。采用荧光素酶报告实验验证miR-145-5p与FGF5的靶向关系;RT-PCR、流式细胞术、Western blot等方法检测miR-145-5p对神经细胞HT22的凋亡和氧化应激损伤的影响。结果结果表明,与未进行OGD/R处理组(Normoxia组)相比,OGD/R处理6 h、12 h、24 h组凋亡率和氧化应激损伤明显增加。在OGD/R环境下,miR-145-5p inhibitor转染减轻HT22细胞凋亡和氧化应激损伤。然而,转染FGF5 siRNA逆转了这一效应。在OGD/R模拟的脑I/R损伤过程中,miR-145-5p通过靶向FGF5促进神经细胞凋亡和损伤。结论研究结果为缺血性脑卒中的治疗提供了一种新的治疗靶点。

miR-145在胃癌中的表达及其意义

目的:探讨微小RNA-145(miR-145)在胃癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系.方法:收集62例胃癌患者肿瘤组织和配对癌旁组织标本,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(q RT-PCR)方法检测miR-145的相对表达量,并分析其与临床病理资料和预后的关系.生存分析采用Kaplan-Meier法,并以Log-rank法比较组间差异,应用Cox模型进行多因素分析.结果:miR-145在胃癌组织中的表达水平显著低于配对癌旁组织(P<0.01).miR-145的表达水平与临床分期、浸润深度及淋巴结转移呈明显相关(P<0.05),与患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、民族均无明显相关(P>0.05).miR-145高表达者生存时间明显高于低表达组(P<0.05).多因素分析未显示单一的因素与患者的生存相关.结论:miR-145在胃癌组织中呈低表达,且与预后相关,可能参与了胃癌的发生、发展过程,可成为胃癌诊断及预后判断的指标.

MicroRNA-145与肿瘤的关系及研究进展

随着人们对生命科学的认识不断加深,作为非编码RNA的重要代表micro RNA受到越来越多的青睐。人类多种肿瘤的发生发展及侵袭转移与micro RNAs（mi RNAs）存在着密切关系,mi RNAs可能成为一类新的致癌基因或抑癌基因,通过抑制靶m RNA翻译或诱导靶m RNA降解在转录后水平调控基因表达,参与肿瘤的发生、发展及侵袭转移。

叶下珠水提物对HBx致肝癌细胞miRNA-21和miRNA-145异常表达的影响

目的:探讨HBx基因(简称HBx)对人肝癌Hep G2细胞mi RNA(亦称mi R或mincro RNA)-21、mi R-145表达的影响,以及叶下珠水提物对HBx和mi R-21、mi R-145异常表达的影响。方法:体外培养HBx阴性的Hep G2-CAT及稳定表达HBx的Hep G2-HBx细胞,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mi R-21、mi R-145表达的变化;分别以不同浓度叶下珠水提物(15mg/ml、7.5 mg/ml、3.75 mg/ml、0 mg/ml)处理96h后,RT-PCR检测Hep G2-HBx细胞中HBx的表达变化,以及Hep G2-CAT和Hep G2-HBx细胞中mi R-21、mi R-145的表达变化。结果:叶下珠能浓度依赖性地抑制HBx的表达(<0.05或0.01),HBx蛋白可显著上调mi R-21表达及下调mi R-145的表达水平(<0.01)。叶下珠水提物明显下调Hep G2-HBx细胞中mi R-21表达水平,且随着药物浓度的增加抑制作用显著增强(<0.01);中浓度叶下珠水提物促进Hep G2-HBx细胞中mi R-145表达(<0.01),高浓度叶下珠水提物明显提高Hep G2细胞中mi R-145的表达(<0.01)。结论:抑制HBx进而下调mi R-21及上调mi R-145表达,或直接上调mi R-145表达可能是叶下珠抗肝癌的作用机制之一。

Marc-145细胞PKR基因遗传分析与表达

旨在克隆Marc-145细胞蛋白激酶R(PKR)基因,对其进行遗传特性及表达研究。利用RT-PCR克隆获得Marc-145细胞PKR基因,并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性与遗传进化分析;将该基因分别插入pEGFP-C1与pEGFP-N1多克隆位点,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合真核重组质粒,转染HEK293细胞,通过荧光显微镜观察、Western blot检测EGFP标签,开展PKR融合表达研究。结果显示,成功克隆获得Marc-145细胞PKR基因,编码区为1653 bp,推导编码550个氨基酸,与选取的灵长类及哺乳动物参考物种PKR基因核苷酸序列同源性在72.2%~99.8%之间,氨基酸序列同源性在55.4%~99.5%之间,与豚鼠及其供体物种非洲绿猴(Cercopithecus aethiops)同源性分别为最低、最高;成功构建了EGFP-PKR融合质粒,但荧光蛋白观察及Western blot检测表明,仅C端融合质粒成功表达。结果表明,成功克隆了Marc-145细胞PKR基因并进行了融合表达,为进一步开展猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在感染细胞与细胞内复制增殖时PKR所发挥的作用、PRRSV与细胞固有免疫抗病毒互作机制等研究奠定了基础。

MicroRNA-145增强非小细胞肺癌细胞对吉非替尼敏感性及其机制探讨

目的:探讨微小RNA-145(microRNA-145,miR-145)对非小细胞肺癌细胞系吉非替尼耐药的作用及其可能的潜在机制。方法:实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测正常细胞及非小细胞肺癌细胞中miR-145的表达差异;不同时间5μmol/L吉非替尼干预肺癌细胞SPC-A-1和A549后,Q-PCR检测miR-145表达变化;miR-145 mimics和miR-145 inhibitors分别转染SPC-A-1和A549肺癌细胞后,CCK8检测细胞活力变化;双荧光素酶报告系统检测miR-145与ADAM19的靶向结合;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,Western blot检测ADAM19蛋白表达;Western blot检测5μmol/L吉非替尼干预后,SPC-A-1和A549肺癌细胞中ADAM19蛋白的表达;mi R-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,再用5μmol/L吉非替尼干预,Western blot检测ADAM19蛋白的表达;采用si RNA抑制ADAM19表达,再用5μmol/L吉非替尼干预,CCK8检测细胞活力;采用BALB/C雌性裸鼠皮下接种肿瘤细胞的方法,观察上述效应。结果:QPCR结果显示,与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比较,肺癌细胞SPC-A-1和A549中mi R-145表达明显降低;5μmol/L吉非替尼干预SPC-A-1和A549细胞后,mi R-145表达显著上调;转染mi R-145 mimics后,CCK8结果显示两种细胞细胞活力下降;双荧光素酶报告系统结果显示,mi R-145靶向结合ADAM19基因的3’-UTR区;Western blot结果显示,5μmol/L吉非替尼诱导SPC-A-1和A549细胞后,两种细胞中ADAM19蛋白表达均降低;mi R-145 mimics转染SPC-A-1和A549细胞,之后给予5μmol/L吉非替尼治疗,ADAM19蛋白表达下调;si RNA抑制SPC-A-1和A549细胞中ADAM19表达,再给予5μmol/L吉非替尼治疗,CCK8结果显示,两种细胞的细胞活力显著降低;过表达BALB/C雌性裸鼠的mi R-145后,显著抑制皮下肿瘤生长,并且增强吉非替尼的抗肿瘤效果。结论:mi R-145显著增强肺癌细胞SPC-A-1和A549对吉非替尼的敏感性,其机制可能是通过靶向结合AMDM19基因的3’-UTR区域,从而抑制其表达。mi R-145有可能成为治疗非小细胞肺癌吉非替尼耐药的有效靶点。

小鼠肾脏缺血-再灌注损伤miRNAs差异表达谱研究

目的筛选小鼠肾脏缺血-再灌注损伤(IRI)差异性表达的微小核糖核酸(miRNAs),为进一步深入阐明肾脏IRI发生、发展的分子机制奠定基础。方法应用微型动脉夹夹闭小鼠双侧肾动脉制备急性肾缺血损伤模型,将15只小鼠分为IRI组和假手术组(E组),IRI组再分为A组(缺血时间45 min,再灌注时间24 h)、B组(缺血时间25 min,再灌注时间24 h)、C组(缺血时间45 min,再灌注时间4 h)、D组(缺血时间25 min,再灌注时间4 h),每组3只。采用肾脏组织形态学改变和肾功能评估结果来鉴定各组小鼠的IRI程度;采用miRNAs芯片聚类分析对小鼠IRI特定缺血时间(25、45 min)和再灌注时间(4、24 h)下肾脏差异性表达差异表达的miRNAs进行筛选鉴定;采用实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)对小鼠IRI后差异表达miRNAs芯片miR-695与miR-145进行验证。结果肾脏组织形态学改变和肾功能评估结果显示成功建立IRI模型。与假手术组相比,肾脏IRI组共检出71种差异性表达显著的miRNAs,其中30种下调表达,41种上调表达。q RT-PCR法检测结果表明,以E组特定miRNAs的表达量标准化为1,miR-695及miR-145在肾脏IRI组的相对表达量分别为11.82和0.31(均为P<0.05),与芯片结果基本一致。结论肾脏IRI后,miRNAs表达谱发生差异性改变,这些差异性表达的miRNAs将可作为肾脏IRI的分子标志物而具有潜在的临床及科研应用价值。