G-CSF通过miR-146a/Smad4信号通路对HL-60白血病细胞增殖的调控作用

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对白血病细胞株HL-60中mi R-146a/Smad4表达水平和白血病细胞增殖活性的影响。方法采用G-CSF(50 ng/m L)提前48 h处理人白血病HL-60细胞株,另设G-CSF未处理组作为对照。采用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化,实时荧光定量PCR检测mi R-146a及Smad4 m RNA表达情况,Western blotting检测总Smad4蛋白表达。结果 G-CSF升高白血病细胞mi R-146a表达,同时降低细胞Smad4 m RNA和总Smad4蛋白的表达,提高白血病细胞的增殖活性。转染了mi R-146a过表达质粒后的白血病细胞Smad4 m RNA和总Smad4蛋白表达均降低,而用G-CSF处理转染后的细胞,其mi R-146a表达升高及Smad4表达降低得更为明显。结论 G-CSF通过调控mi R-146a/Smad4信号轴,影响Smad4表达水平,刺激处于静止状态的白血病细胞进入细胞增殖阶段。

不同miR-146a表达条件下Treg细胞体内回输对小鼠心脏移植免疫排斥反应的影响

目的:本研究探讨调控miR-146a Treg细胞体内回输对小鼠心脏移植免疫排斥反应的影响。方法:流式分选Treg细胞并进行体外扩增。转染试剂分别上调和下调Treg miR-146a表达。建立小鼠心脏移植模型,设立对照组,空白Treg组,miR-146a上调组,miR-146a下调组。移植后回输Treg,观察生存曲线,病理分级,测定受体脾T细胞亚群,RT-PCR检测供心IFN-γ、IL-4、IL-17表达。结果:细胞扩增10倍后miR-146a表达无明显变化,并能有效调控miR-146a表达。回输后空白Treg组(中位生存期11 d)及上调组(中位生存期13 d)生存时间延长,病理分级降低(P<0.05);上调组更为明显(P<0.05);下调组(中位生存期7 d)生存时间缩短,病理分级升高(P<0.05),Th1细胞数量(28.6%±2.7%)及供心IFN-γ表达(1.12±0.11)升高(P<0.05)。结论:体外能有效地分选和扩增Treg细胞,并保证miR-146a的表达。回输Treg明显抑制小鼠心脏移植急性排斥反应,上调组抑制功能增强,下调组抑制功能减弱。

miR-146a-5p通过调控Notch2表达对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌损伤的影响

目的:探究miR-146a-5p调控Notch2表达对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响及作用机制。方法:将大鼠分为Control组、MI/R组、MI/R+mimic mock组、MI/R+mimic组,构建MI/R大鼠模型并使用相应的慢病毒处理,检测各组大鼠心脏LVEDD、LVESD和心肌梗死面积,RT-PCR检测miR-146a-5p基因表达水平,ELISA检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组化检测Ki67阳性细胞率,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Notch2、Hes1蛋白水平。将细胞分为Control组、OGD/R组、OGD/R+mimic mock组、OGD/R+mimic组、OGD/R+pc-Notch2组、OGD/R+mimic+pc-Notch2组,缺糖缺氧复糖复氧诱导心肌细胞损伤并转染对应的mimic,RT-PCR检测miR-146a-5p和Notch2基因表达水平,Western blot检测Notch2蛋白水平,MTT检测细胞活性、Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测SOD和MDA水平,生物信息学及荧光素酶报告实验检测miR-146a-5p和Notch2的靶向关系。结果:在动物实验中,与Control组比较,MI/R组miR-146a-5p基因表达水平降低、LVEDD、LVESD水平升高,心肌梗死面积,CK-MB、CK、LDH水平升高,心肌细胞凋亡率升高,Ki67阳性细胞率升高,SOD、GSH-Px水平降低,MDA水平升高,IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高,Bax、Notch2、Hes1蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低;与MI/R组比较,MI/R+mimic组miR-146a-5p基因表达水平升高、LVEDD、LVESD水平降低,心肌梗死面积、CK-MB、CK、LDH水平降低,心肌细胞凋亡率降低,Ki67阳性细胞率升高,SOD、GSH-Px水平升高,MDA水平降低,IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低,Bax、Notch2、Hes1蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高。在细胞实验中,与Control组比较,OGD/R组miR-146a-5p基因表达水平降低,Notch2基因和蛋白表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R组比较,OGD/R+mimic组miR-146a-5p基因表达水平升高,Notch2基因和蛋白表达水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD水平升高,MDA水平降低,OGD/R+pc-Notch2组Notch2蛋白表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R+mimic组比较,OGD/R+mimic+pc-Notch2组Notch2蛋白水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R+pc-Notch2组比较,OGD/R+mimic+pc-Notch2组Notch2蛋白水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD水平升高,MDA水平降低。在荧光素酶报告实验中,与Notch2 wt组比较,Notch2 wt+miR-146a mimic组荧光素酶活性显著降低。结论:miR-146a-5p能够在大鼠心肌缺血再灌注中减轻心肌损伤,其作用机制与抑制Notch2基因的表达有关。

miR-146b抑制白介素10缺陷小鼠自发肠炎的作用机制

目的探讨miR-146b在小鼠IBD模型中的作用和机制,我们以白介素10(IL-10)敲除小鼠自发肠炎为模型,通过向小鼠腹腔内注射miR-146b mimic,评价miR-146b对IL-10^(-/-)缺陷小鼠自发肠炎的治疗效果。方法提取野生型(WT)和IL-10^(-/-)小鼠骨髓细胞,采用GM-CSF诱导成为巨噬细胞。首先用qPCR和原位杂交方法评估miR-146b在WT和IL-10^(-/-)巨噬细胞中的表达。将13周龄IL10^(-/-)小鼠分为scramble及治疗组,腹腔内注射scramble或miR-146b mimic。饲养4周后处死小鼠并取材做相应检测,用病理切片的方法评估病理炎症评分;采用流式细胞术、qPCR等方法检测各种炎症相关因子的变化。结果和WT小鼠相比,miR-146b在IL-10^(-/-)小鼠的表达明显下降(P<0.05);治疗组小鼠和scramble小鼠相比体重上升明显(P<0.05);miR-146b mimic可以明显改善小鼠肠道炎症(P<0.05);流式细胞术分析显示miR-146b mimic显著抑制肠系膜淋巴结和肠道固有层Th1细胞群、Th17细胞群的激活以及M1巨噬细胞的分化。结论 IL-10缺失导致miR-146b表达减少;miR-146b可以减轻IL10^(-/-)缺陷引起的自发性肠炎,其机制可能是通过抑制肠道M1型巨噬细胞分化而进一步减少Th1和Th17细胞激活。

MicroRNA-146b在病毒性心肌炎小鼠血清中的表达及其意义

目的研究病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠血清micro RNA-146b(mi R-146b)浓度,探究其在VMC发病中的变化及其意义。方法用柯萨奇病毒B3(CVB3)建立Balb/c VMC小鼠模型,实验组注射100 TCID50病毒液0.1 m L,对照组注射等量磷酸盐缓冲液。在注射的第0、1、2、4和6周分别采用实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测两组小鼠血清mi R-146b浓度,同时用酶联免疫吸附试验法检测血清中白细胞介素(interleukin,IL)-17和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的浓度。结果实验组相应时间点小鼠血清mi R-146b浓度均高于对照组,差异均有统计意义(P<0.05)。血清mi R-146b浓度和血清IL-17与TNF-α浓度呈正相关(r=0.37,P<0.05;r=0.68,P<0.05)。结论 mi R-146b在VMC小鼠血清中表达明显增高,与IL-17和TNF-α呈正相关,提示循环中的mi R-146b可能通过IL-17和TNF-α而参与了VMC的发病过程。

特应性皮炎患儿外周血miR-122a和miR-146a水平与Th1/Th2/Th17免疫平衡的相关性分析

目的:探讨特应性皮炎(AD)患儿外周血微小核糖核酸(mi RNA)-122a和mi R-146a水平与辅助性T细胞(Th)1/Th2/Th17免疫平衡的相关性。方法:选取2020年5月~2023年5月石家庄市妇幼保健院皮肤科收治的AD患儿100例为AD组,根据特应性皮炎评分(SCORAD)分为轻度组31例、中度组41例、重度组28例,另选取同期100名体检健康儿童为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测外周血mi R-122a、mi R-146a水平,流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Th17细胞比例,酶联免疫吸附法检测外周血Th1、Th2、Th17相关细胞因子[白细胞介素(IL)-2、干扰素-γ (IFN-γ)、IL-4、IL-13、IL-17、IL-22]水平,并计算Th1/Th2/Th17比值。采用Pearson/Spearman相关性分析AD患儿外周血mi R-122a、mi R-146a与Th1、Th2、Th17和相关细胞因子及Th1/Th2/Th17的相关性。结果:AD组外周血mi R-122a、mi R-146a、Th1、Th1/Th2/Th17、IL-2、IFN-γ水平低于对照组,Th2、Th17、IL-4、IL-13、IL-17、IL-22水平高于对照组(P均<0.05)。轻度组、中度组、重度组外周血mi R-122a、mi R-146a、Th1、Th1/Th2/Th17、IL-2、IFN-γ水平依次降低,Th2、Th17、IL-4、IL-13、IL-17、IL-22水平依次升高(P均<0.05)。Pearson/Spearman相关性分析显示,AD患儿外周血mi R-122a、mi R-146a与Th1、Th1/Th2/Th17、IL-2、IFN-γ水平呈正相关(r/rs分别为0.679、0.677、0.684、0.706、0.693、0.689、0.671、0.694,P均<0.001),与Th2、Th17、IL-4、IL-13、IL-17、IL-22呈负相关(r/rs分别为-0.690、-0.680、-0.681、-0.669、-0.675、-0.676、-0.676、-0.686、-0.682、-0.674、-0.680、-0.689,P均<0.001)。结论:AD患儿外周血mi R-122a、mi R-146a水平降低,与病情严重程度密切相关,可能通过调节Th1/Th2/Th17免疫平衡参与AD发生发展。

骨碎补对骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中miR-27a、miR-146a表达的影响

目的:探讨骨碎补对骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a表达的影响。方法:选取我院收治的骨性关节炎患者46例,随机分为两组,每组各23例。对照组予抗骨增生治疗,实验组在对照组基础上加以骨碎补治疗。观察和比较两组患者的临床疗效、炎性因子水平的变化以及骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a的表达情况。结果:1治疗后,两组患者的临床症状均有所改善,且实验组疗效高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2治疗后,两组患者的IL-1β、PGE2水平均较治疗前显著降低,且实验组降低较对照组更明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。3治疗后,两组患者的骨关节滑膜组织中的mi R-27a、mi R-146a表达均降低,且与对照组比较,实验组较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:骨碎补能够降低骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a的表达,降低IL-1β、PGE2的水平,提高临床疗效。

非小细胞肺癌患者血清miR-146a、miR-141的表达及临床意义

目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA-146a(mi R-146a)、mi R-141的表达及临床意义。方法:选取2015年1月至2018年1月我院收治的106例NSCLC患者记为NSCLC组,另选取同期于我院进行体检的40例健康体检者记为健康对照组。采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清mi R-146a、mi R-141的表达水平,分析NSCLC患者血清mi R-146a、mi R-141表达水平与临床病理参数的关系,比较血清mi R-146a、mi R-141单一诊断及联合诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度。结果:NSCLC组患者的血清mi R-146a、mi R-141表达水平高于健康对照组(P<0.05)。NSCLC患者血清mi R-146a表达水平与病理分期有关(P<0.05),与年龄、性别、吸烟史、病理类型、病理分级、肿瘤直径及是否伴有淋巴结转移无关(P>0.05)。NSCLC患者血清mi R-141表达水平与病理分期、病理分级及是否伴有淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、性别、吸烟史、病理类型、肿瘤直径无关(P>0.05)。血清mi R-146a、mi R-141单一诊断及两者联合诊断NSCLC的AUC分别为0.841、0.772、0.921,敏感度分别为85.1%、80.5%、93.5%,特异度分别为84.2%、75.3%、89.8%。结论:NSCLC患者血清mi R-146a、mi R-141表达水平升高,且与部分临床病理参数有关,两者联合检测对NSCLC诊断具有较高的诊断价值。

MiR-146a减轻脂多糖诱导的大鼠隐窝上皮细胞的损伤

目的研究Mi R-146a对脂多糖(LPS)导致的大鼠隐窝上皮细胞(IEC-6)的损伤效应。方法将复苏后的IEC-6细胞分为三组:正常组(无LPS,N组),脂多糖组(LPS,L组)和Mi R-146a治疗组(LPS+Mi R-146a,H组)。在H组,Mi R-146a在LPS刺激30 min后立即加入细胞培养基中。LPS刺激2 h后收集细胞用于氧自由基(ROS)测定,LPS刺激12 h后,离心细胞用于超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的测定;LPS刺激24 h后,收集细胞用于细胞凋亡和细胞活力检测,并用Hoechst33342进行细胞凋亡的检测。结果 Mi R-146a抑制了LPS导致的ROS的过量产生,减轻了氧化应激的损伤,进而减轻了LPS诱导的IEC-6细胞的凋亡和活力的下降。结论 Mi R-146a可以减轻LPS造成的IEC-6细胞的损伤。

参芪益气生血合剂调节免疫性血小板减少症患者microRNA-146a表达的研究

目的研究免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血单核细胞(PBMC)中micro RNA-146a(mi R-146a)的表达水平及参芪益气生血合剂体外干预对其表达的影响。方法以荧光定量PCR法,对比ITP组与正常对照组PBMC中mi R-146a表达水平的差异,对比ITP药物干预组(参芪益气生血合剂)患者与ITP空白对照组患者PBMC中mi R-146a表达水平的差异。结果与正常对照组相比,ITP组患者PBMC中mi R-146a表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);ITP药物干预组患者PBMC中mi R-146a表达水平较ITP空白对照组高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 mi R-146a表达异常可能与ITP的发生发展相关,参芪益气生血合剂可能通过参与调节ITP患者的mi R-146a表达达到改善ITP效果。

外周血miRNA表达改变是苯暴露致遗传损伤的潜在生物标志

目的探究mi R-34a与mi R-146a的表达水平与苯暴露工人DNA损伤的关系。方法按照纳入和排除标准选取80名苯暴露组工人及91名非暴露组工人,收集研究对象的基本情况,采集工人血、尿样本,以HPLC-MS/MS检测尿的苯代谢产物苯巯基尿酸(SPMA)反映苯暴露水平,彗星实验检测DNA损伤,RT-PCR方法检测mi R-34a和mi R-146a的表达。结果暴露组工人外周血彗星实验tail DNA%、tail moment、olive tail moment结果均高于非苯暴露组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。与非苯暴露组相比,暴露组工人的mi R-34a表达量上调,mi R-146a表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析发现,mi R-34a的表达与DNA损伤的相关无统计学意义;mi R-146a的表达与tail DNA%、tail moment、olive tail moment均存在负相关,有统计学意义(P<0.05)。结论苯接触会导致工人外周血中mi R-34a和mi R-146a表达水平的改变,是苯暴露致DNA损伤潜在的早期效应标志物。