miR-200b在肝癌中靶向调控Bmi1基因的实验研究

目的研究miR-200b在肝癌中对Bmi1的调控作用,并分析其结合位点。方法首先利用生物信息学软件预测人Bmi1 3′-UTR上mi R-200b可能的结合位点;然后构建Bmi1 3′-UTR野生型和突变型报告载体,应用双荧光素酶报告基因分析检测Bmi1 3′-UTR上mi R-200b的结合位点;最后利用real time PCR和Western blot在人肝癌细胞Hep G2中验证mi R-200b对Bmi1的调控作用。结果人Bmi1 3′-UTR上存在3个mi R-200b的潜在结合位点;双荧光素酶报告基因分析提示,转染mi R-200b-3p mimic后野生型组荧光素酶活性明显低于突变型组;real time PCR和Western blot结果提示在Hep G2细胞中过表达mi R-200b可明显下调Bmi1的表达。结论 mi R-200b在肝癌中可通过靶向结合Bmi1基因3′-UTR特异性调控Bmi1基因的表达。