MiR-29b参与大鼠膝骨关节炎引起的软骨退变和股四头肌萎缩

目的:探讨mi R-29b在膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠软骨自噬和肌肉萎缩中的作用及机制。方法:SD大鼠按随机数字表法分为对照组、KOA组、KOA+miR-NC antagomir组、KOA+mi R-29b antagomir组。前交叉韧带离断术诱导KOA,术前1周膝关节注射mi R-NC antagomir或mi R-29b antagomir。30天后取材,验证造模是否成功;检测肌肉和软骨中miR-29b含量及miR-29b antagomir对软骨退变、自噬、凋亡和肌肉萎缩的影响;检测萎缩相关蛋白MuRF1和Atrigon-1的表达,以及肌肉中PI3K、p-AKT、P70的表达。结果:q PCR显示antagomir可下调关节和肌肉中的mi R-29b;负重实验表明,抑制mi R-29b改善关节功能;HE、PAS染色和WB显示下调mi R-29b抑制肌肉萎缩;免疫组化显示抑制mi R-29b可通过激活软骨中LC3和beclin-1增加自噬;免疫荧光和WB显示mi R-29b下调影响IGF/PI3K/AKT信号。结论:mi R-29b antagomir对KOA后软骨自噬和肌肉萎缩具有治疗作用,mi R-29b可作为KOA潜在治疗靶点。

miR-29b抗肝纤维化的机制研究

目的:研究miR-29b对肝星状细胞(HSC)中TGF-βⅠ型受体(TGF-βⅠR)表达的调节作用。方法:生物信息学方法预测miR-29b靶基因为TGF-βⅠR。将靶基因3'端非编码区片段克隆至pMIR-re-porter载体构建重组质粒,然后和pRL-TK、miRNA前体共转染入HSC,检测荧光素酶的表达。将miRNA前体转染HSC后检测TGF-βⅠR的mRNA和蛋白质水平。结果:酶切和测序证实重组质粒构建成功;过表达miR-29b时,共转染pMIR-TGF-βⅠR质粒的细胞相对荧光素酶活性较相应过表达miR-NC组明显降低(P<0.05);而共转染pMIR-空载体质粒的细胞相对荧光素酶活性较相应过表达miR-NC组无显著差异(P>0.05);上调miR-29b水平后,TGF-βⅠR mRNA和蛋白的相对表达较转染miR-NC组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-βⅠR是miR-29b的靶基因。miR-29b通过负向调控TGF-βⅠR表达而起抗肝纤维化作用。

人miR-29b过表达慢病毒载体的构建及其对A549细胞迁移的影响

[目的]构建能高效表达人mi R-29b的慢病毒载体,研究其对人肺腺癌A549细胞迁移的影响。[方法]PCR扩增mi R-29b前体序列,克隆入慢病毒表达载体,测序鉴定。包装好的慢病毒感染A549细胞,流式细胞仪分选后用荧光定量PCR检测mi R-29b表达水平,划痕实验观察过表达mi R-29b对A549细胞迁移的影响。[结果]测序结果证明成功构建人mi R-29b过表达慢病毒载体。mi R-29b过表达慢病毒感染效率为88.56%,使A549细胞中mi R-29b表达升高2.78倍。与A549细胞相比,稳定过表达mi R-29b的A549-mi R-29b细胞的迁移能力显著性降低。[结论]成功构建mi R-29b过表达慢病毒载体,过表达mi R-29b可抑制A549细胞的迁移,为进一步研究mi RNA对肿瘤转移的调控作用奠定了基础。

砷对人脐静脉血管内皮细胞凋亡及mi R-29b的作用机制

微小RNA（mi RNAs）是一类长度约为18-25 nt的单链小RNA,具有高度保守性,不参与编码机体蛋白质。同时mi RNAs表现出的组织特异性及时序性,决定着机体组织及细胞的功能特异性,且在机体胚胎发育、组织损伤修复、器官纤维化、细胞凋亡及肿瘤发生发展等过程中发挥着非常重要的作用。

微RNA-29b通过调控cyclin D2表达参与宫颈癌发生的机制研究

目的:分析微RNA-29b(microRNA-29b,miR-29b)在宫颈癌组织中的表达情况,并探讨miR-29b在宫颈癌发生过程中的作用及其可能的机制。方法:利用实时荧光定量PCR法检测miR-29b在50例宫颈癌组织标本中的表达情况,分析miR-29b表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系。在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-29b模拟物,然后采用CCK-8法、FCM法、细胞划痕实验及Transwell法检测miR-29b过表达对宫颈癌细胞增殖、周期分布和迁移的影响。通过Targetscan软件预测miR-29b的靶基因,然后采用双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法明确miR-29b在SiHa细胞中与该靶基因的相互作用。实时荧光定量PCR法检测miR-29b的靶基因在宫颈癌组织中的表达情况。结果:miR-29b在宫颈癌组织中的表达水平与相应癌旁正常组织相比明显下降(P<0.05)。模拟物转染后miR-29b过表达,能明显抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移,且提高G1期细胞所占百分率(均P<0.05)。miR-29b与其靶基因细胞周期蛋白D2(cyclin D2,CCN D2)相互作用,在宫颈癌细胞中二者表达呈负相关性(r2=0.225,P<0.05)。宫颈癌组织中CCN D2表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。结论:miR-29b水平在宫颈癌组织中显著下调。初步的体外实验结果提示,它可能作为一种抑癌基因,通过下调CCND2表达,参与宫颈癌的发生与发展。因此,预测miR-29b可能将作为宫颈癌诊断和治疗的新的作用靶点。