黄花苜蓿MfMYB3R-3基因克隆及结构与功能的生物信息学分析

MYB转录因子是植物中分布最广的转录因子家族之一,在植物响应生物及非生物胁迫,调控逆境胁迫相关基因表达方面起着重要的作用。本研究基于黄花苜蓿转录组数据,鉴定和克隆了黄花苜蓿MfMYB3R-3基因,并进行了生物信息学分析。结果表明,MfMYB3R-3基因CDS区长1701 bp,编码566个氨基酸,具有SANT保守结构域,为MYB3R型转录因子;MfMYB3R-3蛋白化学分子式为C_(2690)H_(4314)N_(796)O_(873)S_(20),理论等电点为8.75,该蛋白是亲水性不稳定偏碱性非分泌蛋白,不具有信号肽,无跨膜结构,亚细胞定位预测在细胞核。系统进化分析发现,黄花苜蓿MfMYB3R-3蛋白与蒺藜苜蓿的MYB3R-3的亲缘关系最近。

气相色谱法检测R-3-氨基丁醇的研究

采用气相色谱内标法测定R-3-氨基丁醇的含量,R-3-氨基丁醇与相关溶剂的分离度较高。通过外标法和内标法的比较,其内标法的RSD值(0.46%和0.94%)远小于外标法(2.75%和2.17%)。R-3-氨基丁醇的浓度在5.0~99.0 mg/mL范围内与响应比值的线性关系良好,线性回归方程为Y=0.1026X-0.1993,R^(2)=0.9992,方法的检测限和定量限分别为0.50mg/mL和1.52 mg/mL,回收率为95.2%~99.7%,RSD值为0.13%~0.97%。实验结果表明,气相色谱内标法的准确度高,重复性好,在生产过程中监测和成品质量控制领域具有广泛的应用和参考价值。

circRNA_0031269调控miR-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移

目的 探讨circRNA_0031269调控mi R-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移。方法 选取深圳市南山区前海蛇口自贸区医院2020年3月—2021年4月妇科肿瘤专科收治的40例宫颈癌患者,经手术治疗切除的癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶联反应(quantitativereal-time PCR,q RT-PCR)检测不同组织中circ RNA_0031269和mi R-127-3p的相对表达;双荧光素酶报告基因检测观察circRNA_0031269和miR-127-3p的靶向关系。采用MTT、Transwell细胞实验检测宫颈癌细胞增殖、迁移能力。结果 癌组织中circ RNA_0031269表达高于癌旁组织,mi R-127-3p表达低于癌旁组织(P<0.05);miR-127-3p过表达可降低WT-circ RNA0031269的荧光酶活性,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);anti-miR-127-3p过表达可抑制He La细胞增殖、迁移,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);抑制circ RNA_0031269表达可抑制He La细胞增殖、迁移,上调miR-127-3p表达,与si-NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 circ RNA0031269可通过上调miR-127-3p表达降低宫颈癌He La细胞的增殖和迁移。

天冬氨酸酶体系中R-3-氨基丁酸相关物质HPLC方法研究

为了建立一种高效被大众认可的满足酶促体系中R-3氨基丁酸及相关物质的分析方法。基于显色法、衍生法本文探究了高效液相色谱UV检测器210 nm下采用特定流动相及检测参数的HPLC外标法。结果表明在选定的色谱条件下,R-3-氨基丁酸与相关物质可以和酶促反应中其它物质得到很好的分离,反应过程中底物巴豆酸在浓度0.05~0.4 g/L范围线性良好,R2大于3个9,产物R-3-氨基丁酸在此检测条件下灵敏度好,检测限、定量限符合规定,浓度0.35~2 g/L范围线性良好,R2大于3个9。该方法同时满足原辅料、催化反应、纯化结晶、成品含量及杂质检测。

circ-HIPK3对急性心肌梗死的影响及作用机制研究

目的探讨circ-HIPK3对急性心肌梗死(AMI)的影响及作用机制研究。方法将C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组和AMI组,每组10只;通过左冠状动脉前降支结扎法构建AMI模型。另分离乳鼠原代心肌细胞并构建体外缺氧模型。采用原位末端转移酶标记染色法检测心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应检测circ-HIPK3、miR-215表达水平,蛋白质印迹法检测叉头框蛋白O1(FOXO1)以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、活化的胱天蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测验证miR-215与FOXO1的相互作用。结果与假手术组比较,AMI组小鼠心脏组织病理学改变明显,细胞凋亡数量增多,circ-HIPK3和FOXO1表达水平均升高,miR-215水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.01);在体外缺氧培养的心肌细胞中亦有相同变化(均P<0.01)。circ-HIPK3敲低后心肌细胞活力增加,细胞凋亡数量减少,Bcl-2表达水平升高,Bax、Cleaved caspase-3表达水平均降低,差异均有统计学意义(均P<0.01)。miR-215与FOXO1存在结合位点;双荧光素酶报告基因检测证实FOXO1是miR-215的下游靶基因,其表达受miR-215调控。与缺氧组比较,缺氧+si-FOXO1(敲低FOXO1)组细胞活力增加,细胞凋亡数量减少,Bcl-2表达水平升高,Bax、Cleaved caspase-3表达水平均降低,差异均有统计学意义(均P<0.01);转染circ-HIPK3过表达质粒后,si-FOXO1对缺氧心肌细胞的作用被逆转(均P<0.01)。结论circ-HIPK3通过调控mi R-215促进FOXO1表达,进而增强心肌细胞凋亡作用,促进AMI的发生、发展。

红发夫酵母中3R,3’R-虾青素的分离纯化和结构鉴定

研究红发夫酵母中3R,3’R-虾青素的分离纯化工艺条件,并利用高效液相色谱串联大气压化学电离源质谱(high performance liquid chromatography-atmospheric pressure chemical ionization-mass spectrometry,HPLCAPCI-MS)、核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)和高效液相色谱-紫外光谱(high performance liquid chromatography-ultra violet,HPLC-UV)对纯化得到的虾青素结构进行鉴定。结果表明:利用细胞玻璃研磨器进行研磨提取、硅胶柱层析分离和结晶提纯相结合的方法,能够有效减少反式虾青素的异构化,得到的虾青素纯度高于95%。采用高效液相色谱-质谱仪(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)、超导核磁共振谱仪(1H和13C NMR)以及Chiralpak IC手性固定化纤维柱分析,显示制备的反式虾青素几乎都以3R,3’R结构组成。

2R,3R-丁二醇和2,3-丁二醇诱导匍匐翦股颖抗病性的比较

以2R,3R-丁二醇和2,3-丁二醇作为诱抗剂,在诱导匍匐翦股颖产生对褐斑病抗性的过程中,重点比较了不同施用方式的诱抗效果,筛选出了诱抗剂的最佳作用方式和浓度。结果表明:匍匐翦股颖接菌后第15d,2R,3R-丁二醇根部注射处理下,100μmol/L的病情指数最低,诱导效果最佳;而与叶面喷施相比,叶面喷施的诱导效果不明显;2,3-丁二醇根部注射处理下,250μmol/L的病情指数最低,诱导效果最佳,而与叶面喷施相比,叶面喷施的诱导效果不明显。结果表明,100μmol/L的2R,3R-丁二醇与250μmol/L的2,3-丁二醇根部注射可有效诱导匍匐翦股颖产生对褐斑病的抗性。

利用絮凝及双水相萃取分离纯化发酵液中的R，R-2，3-丁二醇

针对Paenibacillus polymyxa ZJ-9一步法发酵菊芋菊粉粗提液制备R,R-2,3-丁二醇的发酵液特点,利用壳聚糖对该发酵液进行絮凝研究。结果表明,壳聚糖分子量、壳聚糖用量、助凝剂海藻酸钠用量、pH和搅拌时间分别为:43.5 kDa、0.75 g/L、0.125 g/L、5.0和15 min时,絮凝效果最佳,在此工艺条件下,发酵液中菌体和蛋白质的絮凝率分别高达89.46%和78.93%,而R,R-2,3-丁二醇保留率约为98.54%。利用双水相萃取技术对絮凝后的发酵液中R,R-2,3-丁二醇进行了分离,结果表明,异丙醇/硫酸铵双水相体系萃取效果最好,当异丙醇和硫酸铵的用量分别约为33%和30%(w/w)时,R,R-2,3-丁二醇在上相的分配系数和萃取率最高,分别约为7.96和89.40%,且异丙醇/硫酸铵双水相体系能够有效萃取分离絮凝后的发酵液中不同含量的R,R-2,3-丁二醇。絮凝和双水相萃取技术分离发酵液中R,R-2,3-丁二醇具有针对性强、效率高、成本低等优点,适用于工业化生产。

miR-218-1-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探究miR-218-1-3p对非小细胞肺癌A549细胞周期和凋亡的影响。方法使用LipofectamineTM 2000 Reagent将miR-218-1-3p模拟物转染入非小细胞肺癌A549细胞中,实时PCR检测细胞中miR-218-1-3p的表达,MTS法检测miR-218-1-3p对A549细胞增殖的影响,流式细胞仪检测转染miR-218-1-3p的A549细胞周期及凋亡的改变,荧光定量PCR检测细胞增殖、周期和凋亡相关指标变化。结果同对照组相比,miR-218-1-3p模拟物组细胞生长受到明显抑制(P<0.05),S期和G2-M期细胞比例明显降低(P<0.05),此外miR-218-1-3p模拟物组早期凋亡细胞比例较对照组明显增加(P<0.05)。继续检测了与细胞增殖、周期和凋亡相关的指标,其中CYCLIN-D1和BCL-2的表达显著下调。结论 miR-218-1-3p可能通过调控CYCLIN-D1和BCL-2,从而抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖,对其产生细胞周期阻滞并促进其凋亡。

AsA-GSH循环参与2,3-丁二醇、2R,3R-丁二醇诱导后匍匐翦股颖的抗病反应

用250μmol/L的2,3-丁二醇(2,3-BD)与100μmol/L的2R,3R-丁二醇(2R,3R-BD)注射至匍匐翦股颖根部后接种立枯丝核菌,诱导匍匐翦股颖对褐斑病的抗性。测定两诱导剂处理对立枯丝核菌发病率的影响,分析诱导后匍匐翦股颖叶片抗坏血酸-谷胱甘肽循环中关键酶活性及氧化还原水平变化情况,确定2,3-BD与2R,3R-BD在诱导匍匐翦股颖抗病性过程中,抗坏血酸-谷胱甘肽循环的变化及其与抗病性的相关性。结果表明,2,3-BD与2R,3R-BD处理匍匐翦股颖后明显降低接菌后的病叶率,同时叶片抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性增幅低于对照,谷胱甘肽还原酶(GR)活性提高,还原型抗坏血酸(AsA)含量呈前期减少后期增加趋势,脱氢抗坏血酸(DHA)含量在第1,9天出现两次高峰,与对照相比显著提高,且两处理的AsA/DHA在第5天达到最大值,分别为对照的5.0,3.4倍,还原型谷胱甘肽(GSH)含量显著提高,并且两处理的GSH与氧化型谷胱甘肽(GSSG)比值在第9天达到最大值,分别为对照的2.34,1.66倍。2,3-BD与2R,3R-BD诱导匍匐翦股颖抗褐斑病的过程中,抗坏血酸-谷胱甘肽循环维持较高效率参与植物抗病反应。

重组菌转化4-氯乙酰乙酸乙酯为R-(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的研究

通过醛基还原酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶的基因构建重组大肠杆菌,并考察加入诱导剂的时间、浓度和诱导时间对酶活的影响,优化重组大肠杆菌的表达。实验结果表明,重组大肠杆菌在对数生长中期加入0.4 mmol/L的诱导剂,在32℃下培养8 h,酶活可达到5.27 U/mg-protein。以重组大肠杆菌为催化剂,研究4-氯乙酰乙酸乙酯转化为-R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的反应,发现利用基因重组技术构建的大肠杆菌,可使醛基还原酶和葡萄糖脱氢酶共同表达,实现辅酶再生,提高产物对映体过量值。在转化反应过程中,随着温度升高,产物收率先增加;当转化温度在32℃以上,收率反而会下降。底物对反应有抑制作用,采用分批加入底物的方式可以减少抑制作用,提高产物收率。

3′R,4′R-二取代角型吡喃香豆素的不对称合成(英文)

目的:寻找具有钙离子拮抗作用和乙酰胆碱酯酶抑制活性双重作用机制的早老性痴呆(Alzheimer′sDisease,AD)新型抑制剂。方法:间二苯酚为底物,AD-mix-β作不对称双羟基化试剂进行凯林内酯类香豆素的全合成;所有产物进行乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制活性测试。结论:立体选择性地合成cis3′-R,4′R-二取代角型二氢吡喃香豆素,但AchE抑制活性明显低于cis3′-R,4′R-二取代线型二氢吡喃香豆素。

CBS催化合成R-3-奎宁醇

探讨R-3-奎宁醇的合成工艺。通过手性合成的方法,以3-奎宁酮盐酸盐为原料,经CBS催化剂催化还原得R-3-奎宁醇。收率可达到92%以上,ee值可达98%以上。该合成路线操作步骤简单、收率高,具有工业应用价值。

双酚A对前列腺癌PC-3细胞增殖和miR-19表达的影响

目的 ：探讨双酚A（bisphenol A,BPA）对人前列腺癌PC-3细胞增殖和mi R-19表达的影响。方法 ：不同浓度BPA处理人前列腺癌PC-3细胞,以雌二醇（E2）作为阳性对照,6 d后采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法和Hoechst 33258荧光染色法测定BPA对PC-3细胞增殖的影响,real-time PCR检测mi R-19a和mi R-9b表达水平的变化,Western blot检测细胞中mi R-19的靶基因PTEN及细胞增殖相关基因p-AKT、AKT、PCNA和Cyclin D1的蛋白表达变化。结果：5×10^-6-5×10^-5 mol/L BPA显著促进PC-3细胞增殖,增加PC-3细胞中mi R 19a和mi R 19b的表达水平,降低PTEN表达并上调p-AKT、PCNA和Cyclin D1表达水平。结论：BPA可促进前列腺癌PC-3细胞增殖,其机制可能与BPA引起mi R-19表达上调有关。

高糖通过下调miR-23b促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移

目的高糖诱导血管平滑肌的增殖和迁移是糖尿病引起动脉粥样硬化的关键病理环节。小分子RNA在糖尿病血管并发症中的作用日益受到重视,本项目将对微小RNA-23b(miR-23b)在高糖诱导血管平滑肌的增殖和迁移中的作用进行研究。方法首先,将血管平滑肌细胞株(VSMCs)与高糖(HG,40 m M)共同孵育24 h,q PCR检测高糖对VSMCs增殖及miR-23b的表达的影响。为了进一步证实miR-23b在高糖诱导VSMC增殖及迁移中的作用,转染过表达miR-23b载体及对照载体,构建过表达VSMCs(VSMC^(miR-23b))及对照细胞(VSMCNC),将HG分别与VSMC^(miR-23b)及VSMCNC孵育24 h,CCK-8检测VSMCs的增殖,Transwell检测VSMCs迁移,q PCR检测miR-23b及其靶基因的PI3KR1、Smad3表达。结果 HG能浓度依赖性的促进VSMCs的增殖并抑制miR-23b的表达,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。VSMC^(miR-23b)组的细胞活力及迁移率均显著低于VSMCNC组(P<0.05)。HG能升高VSMCNC及VSMC^(miR-23b)的细胞活力及迁移率,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),VSMC^(miR-23b)+高糖组的细胞活力及迁移率均显著低于VSMCNC+高糖组(P<0.05)。VSMC^(miR-23b)组的PI3KR1、Smad3的表达显著低于VSMCNC组(P<0.05)。高糖能升高VSMCNC及VSMC^(miR-23b)的PI3KR1、Smad3的表达。VSMC^(miR-23b)+高糖组的PI3KR1、Smad3的表达均显著低于VSMCNC+高糖组(P<0.05)。结论 miR-23b可能通过调控靶基因Smad3、PI3KR1参与HG诱导的血管平滑肌增殖及迁移。

2R-1P3R双臂雕刻机器人操作手雅可比矩阵的建立

在异形曲面加工中采用 2R - 1P3R型双臂机器人结构 ,建立了该机器人各机械臂的雅可比矩阵 ,从而实现由各关节运动和力到操作手末端运动和力的传递。

气相色谱法测定R-3,5-(三氟二甲基)苯乙醇合成反应液中的相关物质

采用气相色谱法测定合成R-3，5-（三氟二甲基）苯乙醇的反应液中的相关物质，即3，5-（三氟二甲基）苯乙酮和左及右旋3，5-（三氟二甲基）苯乙醇。采用cp—chirasil—DexCB手性毛细管色谱柱（25m×0．25mm，0．25μm），在100℃～140℃温度区间用程序升温方式进行分离，气相色谱分析中，用火焰离子化检测。以对氟苯乙酮为内标物，3种相关物质的Ai／As比值与其相关质量浓度在一定的范围内呈线性关系，检出限（3S／N）在0．1～0．2mg·L-1之间。用标准加入法测得3种相关物质的回收率在94．2％～104％之间，测定值的相对标准偏差（n=7）在2．1％～3．5％之间。

3R-2,2-二氟-3-羟基-3-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环基)戊酸乙酯的合成与表征

以2,3-O-异丙亚基-D-甘油醛为原料合成抗肿瘤药物中间体3R-2,2-二氟-3-羟基-3-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环基)戊酸乙酯,在锌粉的催化下加入了三甲基氯硅烷使需要得到的R结构产物的比例提高,反应温度为45℃,反应时间3h,收率为72.1%以上。用IR与1HNMR对其结构进行了表征。

Bta-miR-142-3p对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

为研究Bta-mi R-142-3P对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的调节作用,采用脂质体转染技术改变Bta-mi R-142-3P在奶牛乳腺上皮细胞中的表达量,甘油三酯酶法测定试剂盒、Lacto-se/D-Glucose(Rapid)Assay Kit、western blotting技术、流式细胞仪检测mi R-142-3p对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响。结果显示Bta-mi R-142-3p沉寂后,细胞周期发生改变,β-酪蛋白表达增加,甘油三酯分泌增加,乳糖分泌量未见明显改变。研究表明,Bta-mi R-142-3P可通过抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖能力影响泌乳功能。

M_3(R)中的极大R-子代数

李立斌等人证明了随机矩阵全体构成M3(R)的一个极大R 子代数 ,因此研究Mn(R)中的极大R 子代数就变得非常重要了。在此背景下 ,构造出M3(R)中的所有极大R 子代数。