Ki-67及IDH1-R132H在神经胶质瘤中的表达水平及临床意义

目的检测Ki-67及异柠檬酸脱氢酶-R132H(IDH1-R132H)在中枢神经系统胶质瘤细胞中的表达情况,进一步探讨其临床价值。方法收集手术切除并经病理确诊的脑胶质瘤患者41例为研究对象,取同期因颅脑外伤及自发性颅内出血行血肿清除开颅手术而获取的正常脑组织13例作空白对照。免疫组化法检测并比较Ki-67及IDH1-R132H在神经胶质瘤及对照组中蛋白表达情况。结果Ki-67在Ⅲ~Ⅳ级中的阳性率(93.7%)明显高于Ⅰ~Ⅱ级肿瘤组织(45.4%),两组差异有统计学意义(χ^(2)=11.748,P<0.05),在正常脑组织中表达为阴性;IDH1-R132H在Ⅱ和Ⅲ级中的阳性率(83.3%)明显高于Ⅰ和Ⅳ级肿瘤组织(47.0%),两组差异有统计学意义(χ^(2)=6.047,P<0.05),在正常脑组织中表达为阴性;IDH1-R132H阴性表达和阳性表达组中,Ki-67蛋白阳性表达率,两组差异有统计学意义(χ^(2)=4.055,P<0.05),进一步行相关性分析,差异有统计学意义(r=-0.314,P<0.05)。结论Ki-67和IDH1-R132H蛋白表达水平可指导脑胶质瘤患者临床实践,提供一定的参考依据。

异柠檬酸脱氢酶1 R132H突变型胶质细胞瘤及其维持端粒的代偿机制

异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)R132H是II-III级胶质瘤和少突胶质细胞瘤中最常见的突变基因。绝大多数IDH1^(R132H)突变型胶质细胞瘤并没有通过端粒酶的激活(在端粒酶逆转录酶TERT的介导下以RNA为模板延伸端粒长度)作为其端粒维持机制,而是通过一种依赖于同源重组(homologous recombination,HR)的代偿机制来维持端粒长度,该机制被称为端粒延长替代(alterative lengthening of telomere,ALT),目前关于ALT形成的机制尚不完全清楚。最近的研究表明,端粒Shelterin复合物组分RAP1和非同源DNA末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)修复因子XRCC1的表达在IDH1^(R132H)突变的胶质细胞瘤中均一致下调,导致端粒功能障碍并促进HR。同时,IDH1^(R132H)突变通过下调去甲基化酶KDM4B的活性水平,与α地中海贫血伴智力低下综合征X连锁(alpha thalassemia/mental retardation syndrome X-linked,ATRX)基因缺失协同作用促进ALT途径。基于这些研究,本文就突变IDH1^(R132H)的表达如何引发端粒功能障碍并改变端粒处的DNA修复途径偏好,进而与ATRX丢失协同作用促进ALT发生的机制进行综述。为临床靶向治疗IDH1^(R132H)突变型胶质细胞瘤提供参考。

IDH1 R132H突变对U87MG细胞增殖抑制作用的体内外研究

目的探讨IDH1 mut(R132H)对U87MG胶质母细胞瘤细胞增殖的影响。方法通过表达IDH1 mut(R132H)的慢病毒浸染胶质瘤细胞,利用RT-PCR验证转染效率并通过细胞计数验证其对细胞增殖的影响;通过人为加入IDH1 mut(R132H)代谢产物2-HG,细胞计数方法验证其对细胞增殖的影响;表达IDH1 mut(R132H)的慢病毒浸染胶质瘤细胞后,NOD/SCID小鼠皮下注射建立动物模型,观察肿瘤生长情况,测量并记录,提取肿瘤组织RNA验证IDH1 mut(R132H)在肿瘤组织中的表达,并利用免疫组织化学染色法对肿瘤组织中Ki-67蛋白的表达进行检测。结果 RT-PCR验证IDH1 mut(R132H)和IDH1 wt表达于U87MG胶质瘤细胞中;其细胞增殖速度慢于IDH1 wt和空白对照组;2-HG能抑制细胞的增长;动物体内实验再次证实,表达IDH1 mut(R132H)的肿瘤生长速度慢于IDH1 wt,并且Ki-67的表达在IDH1 mut(R132H)肿瘤少于IDH1 wt。结论 IDH1 R132H突变对U87MG胶质母细胞瘤细胞增殖起到抑制作用。

IDH1 R132H突变对不同级别胶质瘤的影响及相关因素分析

目的检测人脑不同级别胶质瘤组织中IDH1 R132H突变及胶质瘤细胞系IDH1表达情况,探讨IDH1 R132H突变对不同级别胶质瘤的影响。方法采用q-PCR法检测U87、U251、LN-229、HS683、U118等胶质瘤细胞系中IDH1表达情况,回顾性收集70例经手术切除、病理确诊的胶质瘤组织标本(实验组)及同期因脑外伤行颅内减压术留取的脑组织标本20例(对照组),采用免疫组化法、Western blot法检测IDH1 R132H突变情况,所得数据采用SNK法或K-W检验,分类变量采用χ^(2)检验,生存分析比较预后情况。结果IDH1在U87、HS683中相对表达较高,在U251、U118、LN-229中相对低表达;70例人脑胶质瘤组织标本中36例(51.4%)突变,突变主要发生在Ⅱ(51.7%)、Ⅲ(79.2%)级胶质瘤及星形胶质细胞瘤中(80.0%),差异有统计学意义(P<0.05);胶质瘤组织IDH1 R132H突变与患者年龄、癫痫发作、病理级别、Ki-67表达有关(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ胶质瘤患者中IDH1 R132H的预后较好(P<0.05),Ⅳ级胶质瘤患者中IDH1 R132H与预后无明显相关性(P=0.72)。结论IDH1在U87、HS683细胞系中相对高表达,为胶质瘤发生机制的研究提供了较好的细胞模型。IDH1 R132H突变多发生在Ⅱ、Ⅲ级星形胶质细胞瘤患者中,且突变与患者年龄、癫痫发作、病理级别、Ki-67表达有关;IDH1 R132H突变的Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤患者预后好于未突变的患者。

异柠檬酸脱氢酶1基因R132H突变与胶质瘤相关性癫痫患者术后痫性再发的关系

目的检测胶质瘤相关性癫痫患者肿瘤组织中异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)R132H基因突变情况,并探讨该突变与患者术后痫性再发的关系。方法应用免疫组化法检测90例患者肿瘤组织IDH1R132H突变,建立Cox多因素回归模型分析该突变与患者术后痫性再发的关系。结果 90例患者有32例突变,突变率为35.6%;突变主要发生在Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤中;肿瘤组织病理分型中突变以弥漫性星形细胞瘤和间变性星形细胞瘤居多;该突变在胶质瘤术后复发患者及术后服用较多数量抗癫痫药患者中所占比例大,且差异均有统计学意义(P <0.05)。患者术后1年内痫性再发率为42.2%(38/90),突变在术后痫性再发组与未发组间差异有统计学意义(χ^2=21.869,P <0.001)。Cox多因素回归提示肿瘤位于颞叶(HR=3.197,95%CI:1.527~6.693)、肿瘤术后复发(HR=10.328,95%CI:3.636~29.339)以及IDH1 R132H突变(HR=3.169,95%CI:1.234~8.412)是患者术后痫性再发的独立危险因素(均P <0.05)。结论 IDH1R132H突变对胶质瘤相关性癫痫患者术后1年内癫痫再发的控制可能有不利影响。对此类患者需采取更为严格的综合治疗措施以减少术后痫性发作,提高其生存质量。

异柠檬酸脱氢酶1R132H与同源框C10在脑胶质瘤组织的表达及其临床意义

目的探讨分析异柠檬酸脱氢酶1R132H与同源框C10在脑胶质瘤组织的表达及其临床意义。方法选取2018年10月至2020年10月保定市第七医院收治的手术切除的128例脑胶质瘤患者,取其胶质瘤组织标本128份。采用免疫组织化学法检测胶质瘤组织中和正常脑组织中异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenase,IDH1)R132H与同源框C10(Homeobox C10,HOXC10)表达情况。分析IDH1R132H、HOXC10表达与脑胶质瘤临床病理特征及预后的关系。结果IDH1R132H在低级别脑胶质瘤中阳性率为63.46%,在高级别脑胶质瘤中阳性率为14.47%,高级别脑胶质瘤中阳性率低于低级别脑胶质瘤;HOXC10在低级别脑胶质瘤中阳性率为46.15%,在高级别脑胶质瘤中阳性率为77.63%,高级别脑胶质瘤中阳性率高于低级别脑胶质瘤,IDH1R132H、HOXC10表达与脑胶质瘤病理级别有关(P<0.05)。Spearman等级相关分析结果显示,脑胶质瘤中IDH1R132H表达与HOXC10表达呈负相关关系(r=-0.457,P<0.05)。年龄、病理级别、术前卡氏功能评分、术后放化疗、IDH1R132H表达和HOXC10表达与脑胶质瘤患者预后有关(P<0.05);年龄≤45、病理级别低级别、术前卡氏功能评分高、术后放化疗、IDH1R132H阳性患者预后较好(P<0.05),HOXC10阳性患者预后较差(P<0.05)。将有统计学意义的因素纳入多因素Cox回归分析,结果显示,病理级别(HR=5.249,95%CI:2.041~13.500)、术后放化疗(HR=4.899,95%CI:2.482~9.671)、HOXC10阳性(HR=2.593,95%CI:1.592~4.225)是影响脑胶质瘤患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织中IDH1R132H呈较低表达,HOXC10呈较高表达,二者在脑胶质瘤中表达呈负相关,其表达与患者预后密切相关,可作为预后评估的重要参考指标。

体外IDH1^(R132H)突变模型建立与生物学表型研究

目的研究体外异柠檬酸脱氢酶1(IDH1^(R132H))突变对胶质瘤细胞的影响。方法首先挖掘数据库信息,分析IDH1^(R132H)突变胶质瘤患者的临床预后生存情况。之后利用慢病毒转染技术,构建两株胶质瘤细胞SF295和A172体外IDH1^(R132H)突变细胞模型,包括IDH1^(R132H)突变组(IDH1 Mut组)和对照组(IDH1 NC组)。通过对胶质瘤细胞基因突变位点测序,Western blot实验检测突变基因表达的蛋白和IDH1^(R132H)突变代谢产物2-羟基戊二酸(D2HG)。比较两株胶质瘤细胞IDH1 Mut组和IDH1 NC组细胞的增殖情况,Transwell实验检测两组细胞的侵袭能力,细胞划痕实验分析两组细胞的迁移能力。结果首先成功构建了两株IDH1^(R132H)突变胶质瘤细胞模型SF295和A172,测序结果显示两株胶质瘤细胞中IDH1 Mut组的IDH1基因位点突变成功,并且成功检测到突变基因蛋白IDH1的表达和突变代谢产物D2HG。之后细胞表型实验显示,与IDH1 NC组比较,IDH1 Mut组细胞增殖速度明显变慢,细胞侵袭能力下降,细胞迁移能力显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论体外实验表明,IDH1^(R132H)突变能够抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移表型,显示出IDH1^(R132H)突变在胶质瘤分子治疗中的潜力。

IDH1-R132H突变体通过miR-191-5p/p53轴调控U87MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及凋亡

目的 探索IDH1-R132H突变抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。方法 (1)以U87 MG细胞为研究对象,采用慢病毒转染构建IDH 1-R132H突变型及野生型细胞株,并诱导为胶质母细胞瘤干细胞,观察细胞球形成情况;流式细胞术检测肿瘤干细胞标志物CD133表达水平;CCK-8法检测细胞增殖情况和PI/Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡情况;qRCP和Western blot法分别检测IDH1、miR-191-5p及p53表达水平。(2)以NOD/SCID荷瘤小鼠作为研究对象,在体内水平考察miR-191-5p、p53表达及肿瘤生长情况。结果IDH1-R132H突变能够在体内外抑制U87 MG胶质母细胞瘤干细胞增殖(P<0.01)及分化(P<0.05),诱导其凋亡(P<0.01),下调miR-191-5p表达(体内P<0.05,体外P<0.001),上调p53(P<0.001)及其编码基因TP53(体内P<0.01,体外P<0.000 1)表达。结论 IDH1-R132H突变引起的U87 MG胶质瘤干细胞增殖及凋亡的调控可能与其作用于mi R-191-5p/p53轴,抑制胶质瘤细胞活性密切相关。

3-(吲哚-3-基)-4-(吡唑并[3,4-c]哒嗪-3-基)马来酰亚胺脱氢类异柠檬酸酶-1突变体高效抑制剂的合成与评价

合成了一系列新型的3-(吲哚-3-基)-4-(吡唑并[3,4-c]哒嗪-3-基)马来酰亚胺,并评价了其对异柠檬酸脱氢酶1突变体(R132H)的抑制活性.大多数化合物对IDH1-R132H表现出较强的活性.其中化合物3-(1-(3-(1-(1H-咪唑-1-基)丙基)-6-溴-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-c]哒嗪-3-基)-1H-吡咯-2,5-二酮(9b)是最有前途的IDH1-R132H抑制剂,IC50值为31 nmol/L,并能显著抑制异柠檬酸脱氢酶1突变(R132H)型人脑星形胶质母细胞瘤细胞中2-HG的产生.根据实验数据进行了初步的构效关系讨论和分子模拟研究.