高总苷兼高RA苷甜菊新品种‘中山6号’的选育

‘中山6号’是由高RA苷含量品种‘中山4号’(♀)和高总苷含量品种‘中山3号’(♂)杂交优选单株扦插繁殖获得的高总苷、高RA苷含量优良新品种。‘中山6号’的株高平均92.7cm,叶绿色,柳叶形,叶缘锯齿宽且深裂;自然分枝能力良好。该品种始蕾期8月初,干叶收割期在植株始蕾期前一周。干叶原料生产种植平均栽培密度约9000株/667m2,干叶平均产量为220kg/667m2,植株有效成分糖苷总含量(2015检测结果)为21.81%,RA苷含量为13.99%。

甜叶菊RA苷合成关键基因SrUGT76G1对水分胁迫响应分析

RA苷是甜叶菊叶片中最主要的组分之一,其合成受到水分胁迫的影响。为了探究其调控的分子机制,本研究首先分析了RA苷合成关键基因SrUGT76G1在水分胁迫下的表达模式,并对SrUGT76G1瞬时转化烟草和转基因拟南芥进行干旱处理及GUS染色,多方面阐释其对水分胁迫的响应。研究结果表明,一定程度的水分胁迫可以促进SrUGT76G1的表达。此外,对SrUGT76G1的启动子序列进行分析,发现存在多个茉莉酸响应元件及MYB转录因子结合位点。本研究不但为后续深入开展甜叶菊栽培的高效水分利用与管理措施提供理论支持,也为进一步寻找RA苷上游水分胁迫响应调控因子并通过转基因手段提高RA苷含量奠定基础。

高RA苷甜叶菊新品系GTJ-101的选育

为选育适合当地生产需要并拥有自主知识产权的甜叶菊品种(系),由综合性状较好的‘甘引1号’和‘甘引4号’杂交选育出高RA苷甜叶菊新品系‘GTJ-101’。2017—2019年品种比较试验结果表明,‘GTJ-101’干叶平均产量达6241.24 kg/hm2,RA苷含量为12.17%,分别较对照‘谱星1号’平均增产5.69%、增加3.15个百分点;总苷含量为19.22%,RA苷/总苷含量为63.32%,分别较对照‘谱星1号’增加4.14和3.51个百分点,品质及农艺性状均较稳定。‘GTJ-101’适宜于甘肃省河西地区推广种植。

不同干燥工艺对高RA型甜叶菊糖苷含量的影响

为提高甜叶菊加工效率,提升甜叶菊糖苷品质,采用45、60、80、100℃温度梯度,按杀青和未杀青,以及未杀青25℃阴干处理对大田种植采收的高莱鲍迪苷A(rebaudioside A,RA)型甜叶菊GP品系的蕾期叶片进行干燥,利用高效液相色谱测定其糖苷含量,研究干燥工艺对甜叶菊糖苷含量的影响。结果表明,阴干处理至恒重时间为48 h,明显长于其他干燥处理至恒重时间。但在阴干条件下GP叶片RA含量为11.37%,为所有干燥工艺中含量最高。其次为未杀青45℃干燥,RA含量为10.53%。而未杀青60℃烘干条件下,RA型甜叶菊叶片中RA含量与甜菊苷(stevioside,ST)含量比值(RA/ST)最高,减少了后苦味。因此直接食用可采用未杀青60℃烘干方式。作为RA提取原料,则采收后直接薄摊阴干或晒干,如大面积种植或遇阴雨季节或天气,宜采用未杀青45℃干燥。此外,该品系莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)含量以未杀青100℃处理最高,且明显高于其他干燥处理RD含量,因此RD类型甜叶菊叶片干燥则应以未杀青100℃处理为宜。

Poly(Ba-co-EGDMA)-g-APBA大孔树脂的制备及对甜菊糖苷分离性能的研究

研究丙烯酸丁酯(Ba)为单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)为交联剂,乙酸丁酯为致孔剂,采用悬浮聚合法合成了Poly(Ba-co-EGDMA)大孔树脂,通过碱水解处理使大孔树脂表面形成羧基,然后采用EDC-NHS化学偶联法将硼酸功能化单体3-氨基苯硼酸(APBA)成功接枝到羧基化树脂表面,得到Poly(Ba-co-EGDMA)-g-APBA大孔树脂并研究其对甜菊糖苷分离性能。实验结果表明,当单体比n(Ba)∶n(EGDMA)=1∶1、NaOH水解溶液的浓度为20%(质量分数)并且水解时间为24 h时,树脂显示出均一、规则的球形,硼元素含量为1.66%,对甜菊糖中STV和RA的选择性达到为10.29,总吸附量为43.14 mg/g,显示出较好的分离性能。

四川引种甜叶菊的糖苷含量变异及优良单株筛选

采用高效液相色谱法(HPLC)对引种至四川的经无性繁殖的46个甜叶菊单株(按表型特征可分为6种类型)的Rebaudioside(RA苷)和Stevioside(St苷)含量进行了测定,试图筛选出高RA苷含量、高RA/St比例的糖用型或高St苷含量的药用型甜叶菊单株,并基于RA和St糖苷含量对46个甜叶菊单株进行聚类分析,以探讨糖苷含量与植株的田间表型特征的关联。结果表明:46个甜叶菊单株的RA苷含量变幅为0～10.56%,St苷含量变幅为2.90%～20.97%,基于RA和St苷含量进行聚类可分为9类,与根据田间表型特征的分类不尽相同。共筛选出3个高RA糖苷(9.55%～10.56%)、高RA/St比例(2.0～3.1)的RA型优良单株SR2-1、SR2-2、SR25和2个只含St糖苷的甜叶菊单株SR5和SR6,为不同用途甜叶菊良种的选育奠定了基础。

甜叶菊新品系的主要农艺性状及糖苷含量比较

[目的]对4个甜叶菊品系的主要农艺性状、茎叶产量及糖苷含量进行比较,为不同用途的甜叶菊育种提供一定的依据。[方法]对SR-1,SR-2,SR-3和SR-5共4个甜叶菊品系的株高、茎节长、一级分枝数、叶长、叶宽、叶长宽比和茎叶干重等进行考察,采用HPLC法测定其干叶ST和RA糖苷含量,并分析了各性状间相关关系。[结果]4个品系间植株形态、茎叶产量及糖苷品质均存在显著差异,ST苷含量和茎叶产量最高的品系为SR-5,RA苷含量和RA/ST值最高的品系为SR-2,综合RA苷含量和茎叶产量考虑,RA苷总量最高的为SR-3。茎叶产量同株高、茎节长、叶宽间相关显著。RA苷含量与干叶产量、干茎产量及茎叶总产量等呈显著负相关。ST苷含量则与各农艺性状间相关均不显著。[结论]提高甜菊的产量会一定程度影响甜叶菊的品质,但仍有可能选出既高产,品质又符合生产所需的优良甜叶菊新品种。SR-5品系可作为较好的药用型甜叶菊品系,SR-2可用作糖用型甜叶菊育种材料。

赤霉素对不同甜叶菊品系主要农艺性状、糖苷含量及产量的影响

喷施不同浓度的赤霉素(GA)于4种不同类型的甜叶菊品系叶表面,考察外源激素处理对其主要农艺性状、糖苷含量及糖苷产量的影响。结果表明:(1)赤霉素处理组同对照组相比,处理后株高、节长显著增长,且节间伸长效果主要集中在茎秆中部,叶长显著变短、叶宽显著变窄,叶长宽比值增大,单株干叶产量下降;赤霉素处理间,表现出一定的浓度效应,即随着赤霉素处理浓度增大,表现出一定的株高增加,叶长、叶宽减小的趋势。(2)就提高植株糖苷含量而言,100 mg/L的GA处理(A1)提高了SR1型甜叶菊的RA苷的含量,100 mg/L和300 mg/L GA提高了SR3品系ST苷含量,300 mg/L GA提高了SR2品系ST苷含量。(3)就糖苷产量而言,由于各处理下其干叶产量均显著下降,最终导致所有GA处理中,除300mg/L的GA处理显著提高了SR2的ST苷产量外,其余GA处理均不利于甜叶菊RA或ST糖苷产量的提高。

麦冬药材中6种麦冬皂苷的质量分数测定

建立HPLC法同时测定麦冬药材中penogenin-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1-2)-β-D-葡萄糖苷、去木糖-14-hydro sprengerinin C、麦冬皂苷Ra、penogenin-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1-2)-β-吡喃木糖(1-4)-β-D-葡萄糖苷、14-hydro sprengerinin C和慈溪麦冬皂苷A 6种麦冬皂苷的质量分数。色谱条件为lunna NH2色谱柱(4. 6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-水(90∶10),流速1. 0m L/min,检测波长208 nm,柱温为室温。该条件下上述6种麦冬皂苷线性范围分别为0. 96~9. 60μg/m L,0. 92~9. 20μg/m L,0. 97~9. 70μg/m L,0. 94~9. 40μg/m L,1. 04~10. 40μg/m L,0. 92~9. 20μg/m L。在相应线性范围内线性相关系数均大于0. 999 1;方法回收率为98. 59%~101. 77%,RSD为1. 15%~1. 98%。所建方法可用于麦冬药材及相关制剂中麦冬皂苷的测定。

HPLC法同时测定麦冬药材中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定麦冬药材中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A含量的方法。方法:色谱柱为Waters C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(35∶65),流速为1.0mL·min-1,检测波长为208nm,柱温为室温。结果:麦冬皂苷Ra、慈溪麦冬皂苷A的进样量分别在1.88～9.40μg(r=0.9996)、1.96～9.80μg(r=0.9995)范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系;平均回收率分别为100.2%、99.7%,RSD均为1.7%(n=6)。结论:本方法简便、快速、准确,可用于麦冬药材的质量控制。

麦冬须根与麦冬块根中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A含量比较

目的：比较麦冬须根与麦冬块根中麦冬皂苷Ra（ophiogenin-3-O-α-L-鼠李糖-β-D-葡萄糖）和慈溪麦冬皂苷A含量。方法：采用WatersC18色谱柱（4．6mm×150mm，5μm）；流动相为乙腈-水（35：65），流速1．0mL·min^-1，检测波长208nm，柱温室温。结果：麦冬皂苷Ra线性范围0．94～4．70μg，r=0．9995，平均回收率与RSD分别为100．2％，1．6％；慈溪麦冬皂苷A线性范围0．98～4．90μg，r=0．9996，平均回收率与RSD分别为99．6％，1．7％。结论：麦冬须根和块根中麦冬皂苷Ra和慈溪麦冬皂苷A差异不明显。

不同材质及孔径超滤膜对麦冬皂苷类成分的影响

目的考查不同材质及不同孔径的超滤膜对5种麦冬皂苷类成分的影响。方法以麦冬皂苷C、麦冬皂苷D、麦冬皂苷D'、麦冬皂苷Ra、龙血苷F为考察指标,利用HPLC-UV法测定其超滤前后变化,考察不同材质及孔径的超滤膜对5种麦冬皂苷收率的影响以及各超滤阶段对麦冬皂苷类成分截留率的变化情况。结果不同材质及不同孔径的超滤膜处理下,麦冬皂苷类成分的收率不同;聚醚砜材质超滤膜对各超滤阶段的麦冬皂苷类成分截留率变化趋势与纤维素材质是一致的。结论采用100 k Da的聚醚砜超滤膜,可以使麦冬皂苷类成分的收率达到最高,用50%乙醇进行等体积透析,会对麦冬皂苷的收率有较大的改善。