鸭疫里氏杆菌广西分离株16S rRNA基因序列的测定和系统进化分析

选取3株不同血清型的鸭疫里氏杆菌广西分离株GXRA 01、GXRA 07和GXRA 09,利用细菌通用引物,通过PCR方法成功扩增出16S rRNA的部分基因片段,通过克隆、序列测定获得3个分离株16S rRNA基因的核苷酸序列,并与G enB ank中注册的一些菌株的16S rRNA基因序列进行比较、系统进化关系分析发现:3株RA分属两个基因群,I群(GXRA 01)与AY 871818和AY 871819的16S rRNA序列的同源性达99.9%,Ⅱ群(GXRA 07、GXRA 09)与G enB ank中16S rRNA序列的同源性达99.3%-99.6%,GXRA 07与GXRA 09之间的同源性为100%,表明这3株菌株应为鸭疫里氏杆菌。

联合检测胃粘膜组织P_(53)、P_(16)、K-ras对胃癌的诊断价值

目的 :探讨胃癌组织P53、P1 6 、K ras基因的协同突变情况 ,揭示P53、P1 6 、K ras基因突变与胃癌发生的关系。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)与单链构象多态性分析法 (SSCP)对 6 0例经病理切片诊断为胃癌组织和 2 0例正常胃粘膜组织进行P53、P1 6 、K ras基因突变分析。结果 :6 0例胃癌粘膜组织中 ,P53基因发生突变 5 3例 ,占 88 3% ;P1 6 基因发生突变 49例 ,占 81 7% ;K ras基因发生突变 5 6例 ,占 93 3% ;男女间突变率比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;而 2 0例正常胃粘膜组织无P53、P1 6 、K ras基因突变发生。结论 :P53、P1 6 、K ras基因突变是胃癌中常见的分子事件 ,用PCR—SSCP法联合检测胃粘膜组织P53、P1 6 、K ras基因的突变情况将有助于诊断胃癌 。

P21^(ras)、P16在大肠癌中的表达及临床意义

目的探讨癌基因P21^(ras)及抑癌基因P16与大肠癌的关系。方法应用免疫组化SP法分析、研究了P21^(ras)蛋白、P16蛋白在80例大肠癌、20例大肠腺瘤及20例正常大肠组织中的表达。结果①P21^(ras)在前二者中的阳性表达率分别为70.1％(57/80)和65％(13/20),明显高于在正常组织中的30％(6/20),其比较具有显著性差异(x^2=17.66、P<0.005;x^2=5.23、P<0.05);P16在大肠癌中的阳性表达率为36.3％(29/80)低于在腺瘤及正常组织中的65％(13/20)和75％(15/20),其比较亦具有显著性差异。②P21^(ras)、P16的阳性表达率在大肠癌患者的年龄、性别及肿瘤大小方面无显著性差异,而与肿瘤的临床Dukes分期(x^2=6.20、P<0.025;x^2=6.25、P<0.05)、有无淋巴结转移及术后5a生存率密切相关。③P21^(ras)在不同的大肠癌组织病理类型中,其表达率无显著性差异;P16的阳性表达率随着肿瘤浸润深度的增加有下降趋势,但无统计学意义。④在80例大肠癌患者中,P21^(ras)阳性而P16阴性者比率高于其他三者,而且这类大肠癌患者的术后5a生存率下降。结论大肠癌的发生、发展,是由包括癌基因、抑癌基因在内的多种因素作用的结果;在临床工作中联合检测P21^(ras)及P16蛋白在大肠癌中的表达水平,对我们估计患者的病情、推测其预后有指导性意义。

c-Myc、k-Ras、p16在胆囊癌细胞中的表达及临床意义

目的:探讨c-Myc、k-Ras、p16蛋白在胆囊癌细胞中的表达及临床意义。方法:收集20例胆囊癌、50例慢性胆囊炎和20例正常胆囊组织标本,用免疫组化法检测c-Myc、k-Ras、p16蛋白的表达,分析三种蛋白表达与胆囊癌的临床病理特征关系。结果:c-Myc、k-Ras蛋白定位于细胞质和细胞核中,在胆囊癌中的表达程度明显高于慢性胆囊炎和正常胆囊,差异有统计学意义(P<0.01)。p16定位于胞质,在胆囊癌中的表达程度明显低于正常胆囊和慢性胆囊炎,差异有统计学意义(P<0.01)。c-Myc表达程度与肿瘤大小、分化和淋巴结转移密切相关(P<0.05);k-Ras表达程度与肿瘤大小、侵犯深度和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:c-Myc、k-Ras、p16蛋白在胆囊癌细胞中呈异常表达,其表达与临床病理特征相关,可能在胆囊癌发生发展中起有重要作用。

循环海水养殖系统硝化滤器中氨氧化微生物分析

研究循环水养殖硝化滤器载体上附着生物膜的微生物群落结构可以为提高其处理速率和效率,并为特异性工程菌构建提供依据。采用改良的AFLP方法分析了循环水养殖硝化滤器载体上附着的氨氧化细菌16S rRNA基因和氨单加氧酶amoA基因片段及其系统发育情况。结果表明:分析16S rRNA基因得到的序列片段比分析amoA基因片段得到了更多信息,准确度较高,可作为分析循环水养殖硝化滤器氨氧化菌群组成的有效方法。克隆测序所得序列与网上公布数据比对,可见存在于循环水养殖硝化滤器载体上的氨氧化细菌与Nitrosomonas cryotolerans、Nitrosomonas oligotropha、Nitrosospira tenuis、Nitrosomonas marina相似度达100%,与Nitrosomonas aestuarii相似度为87%。大部分属于亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas),仅少数序列属于亚硝化螺菌属(Nitrosospira)。采用16S rRNA基因和amoA片段分析方法得到的附着于封闭循环海水养殖硝化滤器载体上的氨氧化细菌主要为变形菌(Proteobacteria)的β-亚类的亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)和少量的亚硝化螺菌属(Nitrosospira)氨氧化细菌,以及一定数量的γ-亚类氨氧化细菌。

衣康酸在制革复鞣中的应用及其环境效益探讨

制革业一直以来为我国经济发展重要角色与主要创汇产业,然而在制革过程中需填充许多化工材料,也会产生大量制程废水,现国家对于制革业废水排污标准有着非常严格的管理。近年来,由于生活环境质量的恶化及绿色环保意识的觉醒使得国内各界对工业污染防治工作的要求日益严格,其中制革及毛皮加工工业水污染排放标准的制定实施,都有更严格的倾向。由于制革废水的浓度相当高,且部分有机污染成分难以被微生物所分解,制程减废及低污染性制程原料的替代,不但能使产品质量及功能提升,更可兼顾污染量的大幅降低,提升环境效益。本研究针对制革过程中具有较高污染的传统试剂,以新开发之绿色产品Jintan RA-16(皮革丰满型聚合物单宁)进行替代,探讨所研发的产品对成品革质量提升、产出污染物降低及污染处理成本降低等环境效益。

循环水养殖系统微滤机过滤对调节水体细菌群落结构的影响

为研究微滤机过滤对循环水养殖系统水体细菌群落结构的影响,分别在试验第1天、第30天和第60天对无微滤机的池A及微滤机过滤的池B两个养殖红鳍东方鲀( Takifugu rubripes )的循环水养殖系统采集水样,平板计数法测定养殖水体弧菌、异养细菌总数后,以荧光原位杂交法(FISH)检测养殖水体弧菌属( Vibrio )、红细菌科(Rhodobacteraceae)的空间分布。同时,采用16S rDNA扩增子测序对养殖水体细菌群落组成进行分析。计数结果显示,池A养殖水体弧菌总数均高于池B。除试验第1天外,池A养殖水体异养细菌总数亦均高于池B;FISH检测结果显示,随养殖时间的推移,弧菌数量增长迅速,池A养殖水体中弧菌属聚集成点状,而红细菌科依然较均匀地分布于养殖水体中,池B养殖水体中弧菌属、红细菌科均较均匀地分布于养殖水体中;16S rDNA扩增子测序结果显示,池A和池B养殖水体的细菌组成存在差异,池A养殖水体的弧菌属所占细菌总量的比例均显著高于池B;除试验第30天存在波动外,池A养殖水体的红细菌科所占细菌总量的比例显著低于池B;除试验第1天外,池A与池B养殖水体细菌丰度和多样性均无显著变化。同时初步研究表明系统运行至60 d左右,建议对微滤机滤膜进行更换或清洗。本研究初步揭示了微滤机使用与否对循环水养殖系统微生物种群结构的影响,可对循环水养殖系统的病害防控提供理论参考。

口腔癌中人乳头瘤病毒16型和Ha-ras癌基因点突变的研究

目的 检测口腔癌中的人乳头瘤病毒 ( HPV) 16型 DNA和 Ha- rar癌基因的点突变 ,探讨HPV16型和 Ha- ras癌基因的点突变与口腔癌之间的关系。方法 应用多聚酶链反应 ( PCR)技术扩增HPV16DNA和 Ha- ras癌基因相关片段 ,分别采用 2 %琼脂糖凝胶电泳和限制性片段长度多态性分析( RFL P) ,检测口腔癌中的 HPV16DNA和 Ha- ras癌基因第 12位密码子的点突变。结果 在 17例口腔癌组织中 ,6例 ( 35 .5 % )组织 HPV16DNA阳性 ,5例 ( 2 9.4% )组织 Ha— ras癌基因发生点突变 ,其中 2例组织 HPV16DNA和 Ha- ras癌基因点突变的检测均为阳性。结论 口腔癌的发生可能与 HPV16和Ha— ras癌基因的点突变有一定的关系。

hsa_circ_0001859靶向miR-16抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和转移的机制研究

目的探讨hsa_circ_0001859靶向miR-16抑制类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(RASFs)增殖和转移的机制研究。方法选取2019年6月-2020年7月于成都八一骨科医院进行治疗的RA患者40例为RA组,同时选取本院体检中心健康志愿者40例为对照组。培养RASFs细胞,将si-NC、si-hsa_circ_0001859、pcDNA-NC、pcDNA-hsa_circ_0001859、miR-NC、miR-16 mimics、si-hsa_circ_0001859+anti-miR-NC、si-hsa_circ_0001859+anti-miR-16分别转染至RASFs,记为si-NC组、si-hsa_circ_0001859组、pcDNA-NC组、pcDNA-hsa_circ_0001859组、miR-NC组、miR-16组、si-hsa_circ_0001859+anti-miR-NC组、si-hsa_circ_0001859+anti-miR-16组。RT-qPCR检测hsa_circ_0001859、miR-16表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞增殖、迁移和侵袭;Western blot法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测hsa_circ_0001859和miR-16的靶向关系。结果RA组织中hsa_circ_0001859表达水平(2.66±0.36)较对照组(1.00±0.13)明显升高,miR-16表达水平(0.40±0.04)较对照组(1.00±0.15)明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。si-hsa_circ_0001859组hsa_circ_0001859表达水平、细胞存活率、细胞迁移和侵袭数量、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达[(0.38±0.03)、(46.93±6.39)%、(109.38±17.39)个、(138.95±35.73)个、(0.37±0.03)、(0.40±0.04)、(0.38±0.03)]较si-NC组[(1.00±0.10)、(98.54±9.35)%、(247.98±35.73)个、(223.94±22.48)个、(0.90±0.09)、(0.90±0.08)、(0.89±0.08)]降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。miR-16组miR-16表达水平[(2.57±0.25)]较miR-NC组[(1.02±0.11)]升高,细胞存活率、细胞迁移及侵袭数量、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达[(48.48±5.11)%、(126.94±11.14)个、(118.40±12.23)个、(0.35±0.05)、(0.41±0.04)、(0.38±0.03)]较miR-NC组[(99.98±10.56)%、(284.59±33.68)个、(249.47±25.78)个、(0.89±0.08)、(0.92±0.09)、(0.89±0.08)]降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。miR-16 mimics组WT-hsa_circ_0001859的相对荧光素酶活性[(0.40±0.04)]较miR-NC组[(1.00±0.10)]降低,差异有统计学意义(P<0.05)。si-hsa_circ_0001859组miR-16表达水平[(2.75±0.31)]较si-NC组[(1.00±0.10)]升高,pcDNA-hsa_circ_0001859组miR-16表达水平[(0.39±0.03)]较pcDNA-NC组[(1.00±0.09)]降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。si-hsa_circ_0001859+anti-miR-16组miR-16表达水平[(0.36±0.04)]较si-hsa_circ_0001859+anti-miR-NC组[(1.01±0.11)]降低,细胞存活率、细胞迁移和侵袭数量、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达[(98.32±9.11)%、(255.76±30.03)、(279.74±33.92)、(0.90±0.09)、(0.91±0.08)、(0.88±0.08)]较si-hsa_circ_0001859+anti-miR-NC组[(44.87±5.39)%、(98.58±8.21)、(102.46±14.79)、(0.37±0.03)、(0.39±0.03)、(0.35±0.03)]升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论抑制hsa_circ_0001859靶向提高miR-16表达,抑制RASFs增殖和转移。