腺病毒介导RA538基因转移及其诱导肿瘤细胞凋亡的研究

RA538是从维甲酸诱导终末分化的人食管癌细胞系中分离出的一个与分化相关的基因。通过重组体腺病毒将RA538基因成功地转导到人肺腺癌细胞系 (GLC - 82 )中 ,经X -gal染色证实转导效率达 10 0 % (MOI为 2 5) ,转导RA538基因后的GLC - 82肿瘤细胞生长受到明显的抑制 ,抑制率为 77 2 %。经流式细胞计数 (FCM)及TUNEL检测证实RA538可诱导肿瘤细胞发生凋亡 ,凋亡率为 59 4%。利用Westernblot法检测转导了RA538基因GLC - 82肿瘤细胞中癌基因蛋白发现 ,c -myc基因蛋白表达下调。结果提示 :RA538作为抑癌基因将有可能应用于肿瘤基因治疗。

腺病毒介导的RA538基因转移及其对人结肠癌细胞HCT的抑瘤作用

目的 进一步研究ＲＡ５３８ 对人结肠癌细胞系的生物学效应，选用介导ＲＡ５３８ 重组体腺病毒，观察其对人结肠癌细胞系ＨＣＴ 的作用。方法 通过重组体腺病毒将ＲＡ５３８ 基因转导到人结肠癌细胞系ＨＣＴ 中，观察转染ＲＡ５３８ 基因后的肿瘤细胞生长情况。经流式细胞仪、ＤＮＡ 片段化分析及ＴＵＮＥＬ 检测分析抑瘤机制。结果 由重组体腺病毒ＡｄＲＡ５３８ 介导基因ＲＡ５３８ 转导在ＨＣＴ 获得较高的转导效率， ＭＯＩ 为１００ 时可使８０ ％ 细胞转染，并显示对肿瘤细胞生长有明显的抑制作用，抑制率为７４ ％ 。裸鼠皮下注射ＲＡ５３８ 处理的ＨＣＴ 细胞肿瘤形成能力为２０ ％ 。ＤＮＡ 片段化分析、ＴＵＮＥＬ 和流式细胞仪检测，结果证明ＲＡ５３８诱导肿瘤细胞发生凋亡。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析表明，ＲＡ５３８ 具有明显下调ｃｍ ｙｃ 基因表达的作用。结论 ＲＡ５３８ 对人结肠肿瘤细胞有抑制生长和诱导凋亡的作用，可以作为结肠肿瘤基因治疗的１ 种新的治疗基因。

腺病毒介导的分化基因RA-538诱导肝癌细胞增殖抑制和凋亡的研究

目的 研究携带分化基因RA 53 8的重组腺病毒 (Ad RA53 8)对人肝癌细胞的抑制作用及机制。方法 Ad RA53 8感染人肝癌细胞系BEL 740 2和QSG 770 1 ,绘制生长曲线 ,克隆形成实验评价Ad RA53 8对肝癌细胞增殖的抑制作用 ,应用流式细胞术、DNA原位末端标记、梯形DNA研究细胞周期及细胞凋亡情况 ,逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)和免疫印迹法 (Westernblot)检测相关基因的表达。结果 感染Ad RA53 8后 ,RA53 8在肝癌细胞内获得了表达 ,并且降低了c myc的表达。肿瘤细胞的增殖受到明显抑制 ,感染Ad RA53 85d后 ,BEL 740 2的活细胞数为(1 0 .0± 3 .7)× 1 0 4,对照组为 (1 72 .7± 1 1 .9)× 1 0 4(P <0 .0 0 1 ) ;QSG 770 1感染Ad RA53 83d后的活细胞数为 (2 3 .0± 4.3 )× 1 0 4,对照组为 (91 .7± 7.2 )× 1 0 4(P <0 .0 0 1 ) ;感染Ad RA53 8后BEL 740 2和QSG 770 1形成的克隆数分别为 1 3± 4和 1 5± 2 ,明显少于对照组的 1 88± 9和 1 75± 9(P <0 .0 0 1 ) ,而且还出现了细胞周期的阻滞和凋亡。结论 Ad RA53 8对肝癌细胞具有明显的抑制作用 。