长链非编码RNA RAB11B-AS1在胶质瘤中的表达及预后价值研究

目的:检测长链非编码RNA(lncRNA)RAB11B-AS1(RAB11B-AS1)在脑胶质瘤中的表达特征,分析其在不同临床病理特征中的表达差别,探讨其预后价值。方法:应用生信分析数据库(GEPIA)对RAB11B-AS1的表达特征(163例胶质瘤、207例正常脑组织)进行预测。选择68例确诊为脑胶质瘤并行手术治疗的患者作为研究对象,留取术后肿瘤组织,选择68例因脑出血行手术治疗后留取的边缘正常脑组织作为对照。选择人脑胶质瘤细胞株U87和T98G,选择人脑正常胶质细胞株HEB。应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测RAB11B-AS1的表达,应用免疫组化EnVision检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:GEPIA预测到RAB11B-AS1在胶质瘤中的表达可能升高。脑胶质瘤术后组织中RAB11B-AS1的表达明显高于正常脑组织(P=0.0001)。胶质瘤中RAB11B-AS1表达在不同肿瘤最大径、WHO分级、有无坏死方面比较差异有统计学意义(均P<0.05)。胶质瘤中RAB11B-AS1与PCNA具有正相关性(r=0.62,P=0.0341)。生存分析显示RAB11B-AS1的表达与术后生存时间有关(P=0.041)。胶质瘤细胞株U87和T98G中RAB11B-AS1的表达均明显高于HEB(均P<0.05)。结论:脑胶质瘤组织中RAB11B-AS1的表达升高,与PCNA的表达具有正相关性,术后检测RAB11B-AS1的表达对判断预后可能有一定价值。

lncRNA RAB11B-AS1上调miR-628-3p抑制人胃癌细胞系增殖和迁移

目的探讨lncRNA RAB11B-AS1对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的影响及分子机制。方法建立顺铂耐药胃癌细胞系(HGC-27/DDP),将其分为对照组、si-NC组和si-RAB11B-AS1组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RAB11B-AS1和miR-628-3p的表达;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测RAB11B-AS1和miR-628-3p的靶向关系。结果0.2、0.4 mg/L顺铂处理后HGC-27细胞存活率显著降低(P<0.05),而0~0.4 mg/L的顺铂处理后HGC-27/DDP细胞存活率无统计学意义。HGC-27和HGC-27/DDP细胞中RAB11B-AS1表达水平显著升高(P<0.05),且HGC-27/DDP细胞中RAB11B-AS1表达水平显著高于HGC-27细胞(P<0.05)。lncRNA RAB11B-AS1干扰表达,G0-G1期细胞所占比例显著升高,S期细胞所占比例显著降低(P<0.05);细胞存活率显著降低,迁移、侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。RAB11B-AS1靶向调控miR-628-3p。结论LncRNA RAB11B-AS1可通过上调miR-628-3p表达抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭,并提高癌细胞对顺铂的敏感性。

长链非编码RNA RAB11B-AS1在膀胱癌组织中的表达及与预后的关系

目的探讨长链非编码RNA RAB11B-AS1(lncRNA RAB11B-AS1)在膀胱癌组织中的表达及其与临床病理参数和预后的关系。方法收集2012年10月-2014年2月于云南省第二人民医院泌尿外科手术切除的83例膀胱癌组织及相应癌旁正常组织。采用qRT-PCR检测lncRNA RAB11B-AS1的表达并分析其与患者临床病理特征的关系,采用Cox回归分析lncRNA RAB11B-AS1表达水平与膀胱癌患者预后的关系。结果 lncRNA RAB11B-AS1在膀胱癌组织中的表达水平低于癌旁正常组织(1.17±0.32 vs 2.09±0.74,t=10.396,P<0.001);膀胱癌癌组织中lncRNA RAB11B-AS1的表达水平与患者TNM分期、组织学分级和淋巴结是否转移有关(P<0.05)。lncRNA RAB11B-AS1高表达患者5年总生存率高于低表达患者(62.22%vs 26.32%,χ^2=13.420,P<0.001);多因素Cox回归分析显示,lncRNA RAB11B-AS1低表达是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素(HR=1.126,95%CI:1.058~1.200,P<0.001)。结论 lncRNA RAB11B-AS1在膀胱癌组织中低表达,且低表达患者预后较差。

LncRNA RAB11B-AS1在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码(LncRNA)RAB11B-AS1在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法通过实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测LncRNA RAB11B-AS1在83例胃癌组织及正常胃组织标本中的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果 LncRNA RAB11B-AS1在胃癌组织中的相对表达量为6.954±1.080,高于正常胃组织的1.061±0.090,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA RAB11B-AS1表达与性别、年龄及肿瘤部位无关(P>0.05);而与临床分期、淋巴结转移、远处转移、分化程度及生存状态有关(P<0.05)。LncRNA RAB11B-AS1高表达者的中位无进展生存期(PFS)和中位总生存期(OS)分别为19.0个月和29.0个月,低于低表达者的32.0个月和43.0个月,差异均有统计学意义(P<0.05)。Cox多因素回归分析提示,LncRNA RAB11B-AS1表达、远处转移及临床分期是胃癌独立的预后因素(P<0.05)。结论LncRNA RAB11B-AS1参与调节胃癌的发生发展,可作为胃癌诊断和预后评估的潜在分子标志物。

重症脑炎中上调表达的lncRNA RAB11B-AS1通过靶向miR-30d-5p调控小神经胶质细胞激活及炎症反应的作用及机制

目的 评估长链非编码RNA(long noncoding RNAs, lncRNAs)RAB11B-AS1(lncRNA RAB11B-AS1)对小神经胶质细胞激活及炎症反应的作用及其潜在机制。方法 纳入78例重症脑炎患者(重症脑炎组)及56名健康志愿者(对照组)作为研究对象,通过PCR分析两组血清中RAB11B-AS1的表达水平,验证其差异表达。选用小鼠BV2小神经胶质细胞,LPS与ATP处理激活小神经胶质细胞,通过亚硝酸盐水平评估RAB11B-AS1对小神经胶质细胞激活的影响。通过促炎因子(IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-12及IL-8)及抗炎因子(IL-10)的水平评估RAB11B-AS1对小神经胶质细胞炎症反应的影响。通过双荧光素酶报告验证RAB11B-AS1与微小RNA-30d-5p(miR-30d-5p)的相互作用,并评估两者在小神经胶质细胞激活及炎症反应中的作用。结果 与健康对照组相比,RAB11B-AS1在重症脑炎患者血清中显著上调表达。LPS+ATP能够促进小神经胶质细胞亚硝酸盐的产生及细胞炎症反应,且促进RAB11B-AS1的上调表达及miR-30d-5p的下调表达。RAB11B-AS1的敲低显著抑制了小神经胶质细胞的激活,能够抑制LPS+ATP引起的促炎因子的升高,且能够促进抗炎因子的表达。miR-30d-5p能够负调控RAB11B-AS1的荧光素酶强度,且能够逆转RAB11B-AS1对小神经胶质细胞激活及炎症反应的抑制作用。结论 重症脑炎中上调表达的RAB11B-AS1通过吸附miR-30d-5p,调控小神经胶质细胞的激活及炎症反应。

lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的探讨lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测34例结直肠癌组织及相应的癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中lncRNA RAB11B-AS1的表达水平。构建稳定过表达RAB11B-AS1的SW480细胞系,MTT方法检测SW480细胞的增殖能力变化;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率;Transwell检测SW480细胞侵袭能力变化,划痕实验检测SW480细胞迁移能力变化;Western blot检测SW480细胞中细胞周期蛋白1(cyclin D1)和CDK6的表达水平。结果 RAB11B-AS1在结直肠癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.01);在SW480中的表达显著低于NCM460细胞(P<0.01)。RAB11B-AS1过表达后,SW480细胞的增殖、侵袭与迁移能力显著降低,凋亡率显著升高,cyclin D1与CDK6的蛋白表达降低(P<0.01)。结论 lncRNA RAB11B-AS1在结直肠癌组织中表达降低,过表达RAB11B-AS1能够抑制SW480细胞的增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。

下调Rab11基因对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭迁移的影响及机制探讨

背景与目的:Rab11基因在宫颈癌细胞中高表达,可能与细胞恶性转化相关。本研究采用RNA干扰技术下调Rab11基因表达,并探讨其对宫颈癌HeLa/SiHa细胞侵袭迁移的影响及可能的相关机制。方法:将HeLa/SiHa细胞分为2组:阴性对照组(转染阴性对照的小干扰RNA)和Rab11 siRNA干扰组(转染小干扰Rab11siRNA)。蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Rab11干扰效果,检测转染Rab11 si RNA后,侵袭相关蛋白Rac1、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9表达的变化;细胞划痕损伤实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;细胞免疫荧光实验从形态学角度探索在小干扰Rab11后Rac1蛋白在细胞膜上聚集位置的变化。结果:转染小干扰Rab11siRNA到He La/SiHa细胞后,Rab11蛋白表达受到高效抑制(P<0.01);细胞迁移、侵袭能力受到抑制(P<0.05),Rac1蛋白表达明显下调(P<0.01),MMP2、MMP9蛋白表达下调(P<0.05),Rab11 siRNA处理组细胞运动前端细胞膜下Rac1蛋白聚集量减少。结论:Rab11基因表达下调可以抑制HeLa/SiHa细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Rac1、MMP2和MMP9蛋白表达量下降及Rac1定位的改变有关。

Rab11-FIP4通过IGF1R调控结直肠癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨Rab11家族相互作用蛋白4(Rab11-FIP4)在结直肠癌发生发展中的作用、临床意义及相关机制。方法:通过免疫组化、Western blot及RT-qPCR比较结直肠癌组织与相应的癌旁组织中、正常环境及缺氧条件下直肠癌细胞中Rab11-FIP4的表达水平;应用免疫组化染色评分将临床病例分为Rab11-FIP4高表达组(n=61)和Rab11-FIP4低表达组(n=39),通过Kaplan-Meier生存分析比较两组的总生存时间与复发时间;构建Rab11-FIP4过表达慢病毒,感染结直肠癌细胞株HCT116和LoVo,采用CCK-8法、集落形成实验和Transwell实验检测Rab11-FIP4过表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响。免疫共沉淀实验检测Rab11-FIP4与胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)的相关性;人类磷酸激酶抗体阵列测定探讨Rab11-FIP4高表达的结直肠癌细胞中受IGF1R影响的信号通路;组织微阵列及双萤光素酶报告基因分析Rab11-FIP4与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的关系。结果:Rab11-FIP4在结直肠癌组织中高表达(P<0.01),且Rab11-FIP4过表达与结直肠癌患者的预后不良有关(P<0.05)。Rab11-FIP4的过表达促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。Rab11-FIP4的过表达通过IGF1R调节ERK1/2和AKT信号通路(P<0.05)。缺氧促使Rab11-FIP4启动子上的HIF-1α活化,从而上调Rab11-FIP4的表达(P<0.05)。结论:Rab11-FIP4可能作为促癌基因通过IGF1R调控结直肠癌细胞的迁移和侵袭。

非小细胞肺癌中反义长链非编码RNA RAB11B⁃AS1的表达及临床意义

目的探究非小细胞肺癌(NSCLC)病人癌组织中反义长链非编码RNA RAB11B⁃AS1(lncRNA RAB11B⁃AS1)的表达水平及其临床意义。方法选取2014年9月至2017年3月在湖南省直中医医院进行手术切除的97例NSCLC病人作为研究对象,将术中所得癌组织作为试验组,并取癌旁(距肿瘤边缘>2 cm)组织作为对照组。采用实时荧光定量逆转录PCR(RT⁃qP⁃CR)检测lncRNARAB11B⁃AS1表达情况;分析lncRNARAB11B⁃AS1与NSCLC病理参数的关系;Cox回归分析影响NSCLC的预后因素;分析lncRNARAB11B⁃AS1表达情况对NSCLC病人生存情况的影响。结果试验组lncRNA RAB11B⁃AS1表达(2.61±0.74)明显高于对照组(1.35±0.41)(P<0.001);NSCLC病人癌组织中lncRNA RAB11B⁃AS1表达水平与病理类型、分化程度、淋巴结转移、远处转移和疾病分期有关(P<0.05);Cox回归分析显示,lncRNA RAB11B⁃AS1表达、远处转移和疾病分期均是影响NSCLC预后的独立危险因素(HR=2.69、2.70、2.93,95%CI:1.83~3.96、1.58~4.62、1.67~5.13,均P<0.05);lncRNA RAB11B⁃AS1高表达病人术后24个月的总生存率(28.30%)明显低于低表达病人(59.09%)(P<0.05)。结论lncRNA RAB11B⁃AS1在NSCLC病人癌组织中表达上调,其表达水平与病人临床病理特征有关,且与病人的预后状况密切相关,可为NSCLC的治疗提供参考。

非小细胞肺癌手术前后长链非编码RNA水平变化及其与预后的关系

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者手术前后长链非编码RNA(LncRNAs)水平变化及其与预后的相关性。方法选取2017年4月至2018年5月我院收治的NSCLC患者90例(恶性组)、肺良性肿瘤者54例(良性组)、健康体检者30例(对照组),比较三组血清LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平,分析NSCLC患者手术前后上述指标变化及与预后的关系。结果恶性组血清LncRNA MEG3水平低于良性组及对照组,LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平高于良性组及对照组(P<0.05);NSCLC患者术后血清LncRNA MEG3水平高于术前,血清LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平低于术前(P<0.05);LncRNA MEG3高表达组总生存时间(OS)较LncRNA MEG3低表达组延长,LncRNA RAB11B-AS1高表达组OS较LncRNA RAB11B-AS1低表达组缩短,LncRNA H19高表达组OS较LncRNA H19低表达组缩短(P<0.05);肿瘤大小、远处转移、TNM分期、LncRNA MEG3低表达、LncRNA RAB11B-AS1高表达、LncRNA H19高表达均为影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论NSCLC患者手术前后LncRNA MEG3、LncRNA RAB11B-AS1、LncRNA H19水平发生变化,且其与预后均有密切关系,有望成为其分子标志物。

运用双向电泳技术探索恶性胸膜间皮瘤潜在的肿瘤标志物研究

目的：利用双向凝胶电泳技术通过对恶性胸膜间皮瘤细胞株 H2052和肺腺癌细胞株 PC9胞浆内蛋白质进行差异蛋白质组学分析，为恶性胸膜间皮瘤与肺腺癌的鉴别诊断提供候选肿瘤标志物。方法利用双向凝胶电泳技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）技术筛选鉴定出恶性胸膜间皮瘤细胞株 H2052和肺腺癌细胞株 PC9胞浆内的差异蛋白质，再运用免疫组化染色方法验证被标识的差异蛋白质在12例恶性胸膜间皮瘤组织标本及19例低分化腺癌组织标本的表达情况。结果运用蛋白质组学技术标识并筛选出15种差异蛋白，经过免疫组化染色方法验证，结果有3种蛋白质在恶性胸膜间皮瘤中高表达且有统计学意义。结论 Rab GDP Dissociation Inhibitorβ、Septin11、UCHL1可能成为鉴别恶性胸膜间皮瘤与低分化肺腺癌细胞的新的靶点，它们在间皮瘤细胞分化、增殖中起到关键的作用，进一步的研究可能为将来的靶向治疗提供新的靶点。