Rabex-5在肝细胞癌组织中的表达及在预后中的临床意义

目的:探讨Rabex-5在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其对疾病的临床诊断价值。方法:采用实时定量PCR和Western blot方法检测HCC细胞和HCC患者临床样本中Rabex-5 m RNA和蛋白表达情况,通过免疫组织荧光染色检测50对HCC及癌旁组织中Rabex-5蛋白表达情况。结果:与人正常肝细胞系相比,HCC细胞中Rabex-5 m RNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)表达水平均显著升高;敲除HCC细胞系中Rabex-5表达后HCC细胞系的增殖能力收到抑制,细胞发生凋亡。与癌旁组织相比,HCC组织中Rabex-5 m RNA(P=0.001)和蛋白(P=0.031)表达显著上调。免疫组织荧光染色显示Rabex-5表达与HCC患者肿瘤包膜浸润(P=0.001)及临床TNM分期(P=0.021)密切相关。此外,Kaplan-Meier生存分析表明Rabex-5高表达HCC患者的总生存期显著低于Rabex-5低表达患者(P=0.025)。多重变量Cox回归分析结果证实Rabex-5表达是HCC预后的独立标志物(HR:1.958,95%CI:0.947~3.841,P=0.032)。结论:Rabex-5参与HCC发生和发展的调节,可以作为HCC治疗的新靶点,其过表达可作为HCC预后不良的新型标志物。

Rabex-5基因RNAi慢病毒表达载体的构建及其在MCF-7中对Rabex-5表达的影响

目的:构建Rabex-5 RNAi慢病毒表达载体,并转染人乳腺癌细胞株MCF-7,观察其对Rabex-5基因的沉默效应。方法:将设计合成的单链引物退火成双链oligo序列,连接入经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切线性化的pMAGic慢病毒质粒载体中,经转化DH5α感受态细胞并筛选出阳性克隆,测序鉴定。用293FT细胞包装产生慢病毒,感染MCF-7细胞,利用Real-time PCR和Western blot鉴定抑制Rabex-5表达的效果。结果:PCR与测序鉴定证实成功构建了Rabex-5 RNAi的慢病毒载体,转染MCF-7细胞后,与未干扰组和阴性对照组相比,Rabex-5的mRNA和蛋白表达下调,以RNAi3的沉默效应最佳。结论:成功构建了Rabex-5 RNAi慢病毒表达载体,其可使MCF-7细胞株Rabex-5表达下调,为进一步研究靶向Rabex-5 RNAi对乳腺癌细胞恶性生物学行为变化及基因治疗研究奠定了实验基础。

RRBP1与RABEX-5蛋白在结直肠癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的探讨核糖体结合蛋白1(RRBP1)与RABEX-5蛋白在结直肠癌组织中的表达与临床病理特征和预后的关系。方法2015年8月—2016年8月收集外科手术治疗的86例结直肠癌患者的癌组织标本及相对应的癌旁组织标本;采用免疫组化染色法检测所有研究对象RRBP1、RABEX-5蛋白的表达水平,分析RRBP1、RABEX-5蛋白表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系;并采用Cox比例风险模型分析影响结直肠癌患者预后的相关因素。结果结直肠癌癌组织中RRBP1、RABEX-5蛋白阳性表达率(65.12%和62.79%)明显高于结肠癌癌旁组织RRBP1、RABEX-5蛋白阳性表达率(38.37%和36.05%),差异有统计学意义(P<0.001);TNMⅢ~Ⅳ期、肿瘤低分化、出现淋巴转移时结直肠癌患者PRRBP1、RABEX-5阳性表达率均升高(P<0.05);RRBP1阳性表达和阴性表达的中位总生存期分别为30个月和20个月,RABEX-5阳性表达和阴性表达中位总生存期分别为31个月和19个月;经单因素与多因素分析结果显示,TNMⅢ~Ⅳ期、肿瘤低分化、淋巴转移、RRBP1阳性表达、RABEX-5阳性表达均为影响结直肠癌患者预后的独立因素(P<0.01)。结论RRBP1蛋白与RABEX-5蛋白在结直肠癌组织中的表达水平均升高,且与结直肠癌患者的TNM分期、淋巴转移呈正相关,与分化程度呈负相关,RRBP1蛋白阳性表达与RABEX-5蛋白阳性表达均是结直肠癌预后的危险因素,二者可能作为结直肠癌诊断和预后的有效生物标志物。

RABEX-5和RAB5在乳腺癌中的表达及意义

目的初步探讨RABEX-5和RAB5与乳腺癌的关系。方法采用免疫组织化学法、RT-PCR和Western blot法检测RABEX-5及RAB5 mRNA和蛋白在60例乳腺癌、15例乳腺纤维腺瘤和15例乳腺正常组织中的表达,并检测相关临床病理指标与RABEX-5及RAB5表达的关系。结果 RABEX-5和RAB5 mRNA及蛋白在乳腺癌组织中的表达高于乳腺正常组织及乳腺纤维腺瘤(P<0.05)。在乳腺癌患者中,肿瘤直径(T)>5 cm组中的表达高于T≤2 cm组和2 cm<T≤5 cm组(P<0.05),在腋窝淋巴结转移阳性者中表达高于阴性者(P<0.05),但与乳腺癌组织学分级、人表皮生长因子受体2(HER-2)、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达无关(P>0.05)。RABEX-5和RAB5 mRNA及蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论 RABEX-5可能与RAB5共同参与了乳腺癌的发生及发展。

乳腺癌细胞中下调RABEX-5对其化疗敏感性的影响

目的探讨RABEX-5下调表达后,乳腺癌细胞对蒽环类药物和紫杉类药物的敏感性变化。方法构建RABEX-5RNAi慢病毒表达载体,并感染人乳腺癌细胞株MCF-7,使细胞内RABEX-5基因表达沉默,Realtime PCR、Western blot方法检测沉默效应。应用CCK-8方法检测RABEX-5沉默后(MCF-7/RNAi),与其阴性对照人乳腺癌细胞株(MCF-7/vector)相比对化疗药物敏感性的变化情况。结果 RABEX-5RNAi慢病毒表达载体感染MCF-7后,与未干扰组(MCF-7)及阴性对照组(MCF-7/vector)相比,RABEX-5的mRNA和蛋白水平表达下调。与阴性对照组相比,RABEX-5下调表达后,对蒽环类药物表柔比星的化疗敏感性降低,半数致死浓度(IC50)分别为(3.590 0±0.228 69)μg/mL、(1.193 3±0.187 71)μg/mL,差异有统计学意义(P<0.05);而对紫杉类药物多西他赛的敏感性不变,半数致死浓度(IC50)分别为(11.162 7±0.210 26)μg/mL、(10.536 7±0.430 97)μg/mL,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RABEX-5下调表达使人乳腺癌细胞MCF-7对蒽环类药物表柔比星产生耐药,而对紫杉类药物多西他赛敏感,为进一步研究RABEX-5在乳腺癌个体化治疗中的作用提供理论基础。