RNA干涉下调RACK1基因表达增强水稻抗旱能力

RACK1是一种多功能支架蛋白,广泛参与植物生长发育过程的调节。利用RNA干涉技术抑制水稻RACK1基因的表达,分析了RACK1基因在响应干旱胁迫中的功能。实时定量PCR对获得的转基因植株的RACK1基因表达分析结果表明,转基因水稻RACK1基因表达受抑制程度达50%左右。与非转基因水稻(对照)相比,转基因水稻耐干旱能力显著强于对照,其膜的过氧化酶和丙二醛的产生显著低于对照,而超氧化物歧化酶活性极显著高于对照。表明RACK1蛋白质调节水稻对干旱胁迫的耐性,并且这种调节在很大程度上与植株体内的氧化还原系统有关。

转反义OsRACK1基因增强水稻抗旱能力

RACK1是一种多功能支架蛋白,广泛参与植物生长发育过程的调节。利用反义RNA技术抑制水稻(Oryza sativa)RACK1基因的表达,分析了RACK1基因在响应干旱胁迫中的功能。采用实时定量PCR对获得的转基因植株的RACK1基因表达进行分析,结果表明转基因水稻RACK1基因表达受抑制程度达到50%左右。与非转基因水稻(对照)相比,转基因水稻耐干旱能力强,膜脂过氧化程度低且丙二醛的含量少,SOD活性高。这些结果表明,RACK1蛋白负调节水稻对干旱胁迫的耐受过程,并且这种调节作用在很大程度上与植株体内的氧化还原系统有关。

紫花苜蓿RACK1基因的遗传转化在草学本科遗传学教学中的应用

遗传学是草学本科的专业基础课程之一,而当前遗传学教材中遗传案例主要以作物和动物为主,实验教学中仍然是以模式植物为对象的示范性与验证性实验,缺少与草类植物前沿研究紧密结合的综合性、研究性、设计性实验。为使草学遗传研究前沿与遗传学教学结合,培养学生创新思维、强化学生实验操作技能,激发学生的积极性与创造性,将优质牧草紫花苜蓿(Medicago sativa)转基因技术与草学遗传学教学相结合,取得了显著的教学效果。通过基因克隆、载体构建、遗传转化和组织培养等试验,进一步强化基因工程相关理论知识与技术的教学。在要求学生掌握紫花苜蓿无菌苗培养、DNA提取、PCR扩增、质粒提取、琼脂糖电泳、培养基制作的原理和技能的同时,增加基因工程研究的理论和方法学习,通过紫花苜蓿蛋白激酶C受体(RACK1)基因及其对应蛋白质特性的深入了解和转基因操作实践,从而使学生在实验过程中深入学习和理解遗传学知识,掌握紫花苜蓿转基因技术,并初步达到借助转基因技术研究科学问题的目的。

靶向沉默RACK1基因对肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的：研究沉默RACK1基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法：使用人肺腺癌细胞株A549建立裸鼠皮下移植瘤模型。待肿瘤直径为0.3~0.5 cm时将荷瘤裸鼠随机分成3组,每组6只,分别于瘤内注射生理盐水（空白组）、空载质粒-脂质体复合物（空载组）及shRNARACK1质粒-脂质体复合物（实验组）。观察三组裸鼠的皮下移植瘤体积变化,绘制肿瘤生长曲线,并用Western blot检测各组肿瘤组织中RACK1蛋白的表达。结果：移植瘤形成后第28天,与空白组和空载组比较,实验组移植瘤生长速率、肿瘤体积和重量均明显降低（P〈0.05）。转染干扰载体RACK1-shRNA对裸鼠肺腺癌移植瘤的的抑瘤率为39%。Western blot结果显示,实验组移植瘤组织中RACK1蛋白的表达明显低于空白组和空载组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：沉默RACK1基因对肺腺癌裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用。

棉铃虫活化的蛋白激酶C受体1(RACK1)基因的分子鉴定

活化的蛋白激酶C受体l(receptor for activated C kinase1,RACKl)广泛分布于真核生物和原核生物中,在生物体内具有极其重要的调节功能。本实验利用RT-PCR和RACE的方法扩增获得了棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner)RACK1基因全序列,序列分析结果表明,该基因开放阅读框为957bp,编码319个氨基酸残基。5'端非编码区长为36bp,3'端非编码区长为112bp。发育时相表达发现RACK1基因在棉铃虫的蜕皮时期大量表达,进一步的激素处理实验发现,蜕皮激素诱导RACK1基因表达,保幼激素和饥饿抑制RACK1基因表达。这些研究结果为进一步研究RACK1基因的功能奠定基础。

活化的蛋白激酶C受体1基因沉默对肺腺癌A549细胞化疗敏感性的影响

目的 探讨靶向沉默活化的蛋白激酶C受体1（RACK1）基因对肺腺癌A549细胞化疗药物敏感性的影响及其可能作用机制.方法 构建靶向沉默RACK1基因的重组质粒,并转染至A549细胞,设RACK1基因沉默组（RACK1-shRNA组）、空载质粒组（Vector-shRNA组）、空白对照组,运用Western blot检测转染后RACK1蛋白的表达水平.MTT法检测转染后A549细胞对顺铂、吉西他滨、培美曲塞和紫杉醇4种化疗药物敏感性的变化.Western blot检测转染后肺耐药蛋白（LRP）和多药耐药蛋白（MRP）的表达.结果 转染24 h后,RACK1-shRNA组RACK1蛋白的相对表达量为0.267±0.470,低于Vector-shRNA组的0.821±0.109及空白对照组的0.842±0.060,差异有统计学意义（F=54.438,P＜ 0.05）.RACK1-shRNA组细胞生长明显受到抑制,该组A549细胞对顺铂、紫杉醇的敏感性增加（作用36 h RACK1-shRNA组A549细胞增殖的抑制率与Vector-shRNA组、空白对照组相比,均P＜0.05）.RACK1-shRNA组中LRP、MRP蛋白相对表达量分别为0.163±0.056、0.246±0.050,与Vector-shRNA组（0.420±0.080、0.644±0.057）及空白对照组（0.444±0.041、0.617±0.031）相比均下降,差异有统计学意义（FLRP=19.430、FMRP=61.548,均P＜0.05）.结论 靶向沉默RACK1基因可提高A549细胞对铂类、紫杉醇类化疗药物的敏感性,其作用可能是通过下调LRP及MRP的表达而实现的.

shRNA干扰RACK1表达增强口腔鳞癌细胞放射敏感性的研究

目的探讨下调RACK1基因表达对口腔鳞癌细胞生长及放射敏感性的影响。方法构建RACK1基因的shRNA载体,通过脂质体转染技术将其转入口腔鳞癌HSC-3细胞,G418筛选得到稳定转染细胞。荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测细胞中RACK1mRNA和RACK1蛋白表达水平;CCK8实验检测细胞生长能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;克隆形成实验检测下调RACK1表达联合X射线照射对细胞增殖能力的影响。构建裸鼠移植瘤模型,观察下调RACK1基因表达联合X射线照射对口腔鳞癌的生长抑制作用。结果RT-PCR和Western blot结果显示转染后HSC-3细胞RACK1mRNA相对表达量明显降低(P<0.05),RACK1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。CCK8实验结果显示下调RACK1表达可抑制HSC-3细胞生长(P<0.05),联合X射线照射使细胞凋亡率明显升高(P<0.05),外侵袭穿透细胞数显著减少(P<0.05)。克隆形成实验结果显示shRACK1组的存活分数低于对照组,放射增敏比为1.37(D0值比)。裸鼠移植瘤实验显示shRACK1组照射后瘤体生长缓慢,瘤体体积减小幅度低于对照组(P<0.05),瘤体质量低于对照组(P<0.05)。结论下调RACK1表达可以增强口腔鳞癌细胞的放射敏感性,为提高口腔鳞癌放射敏感性研究提供新思路。