RAD51相关蛋白1在宫颈癌组织中的表达及通过TGF-β/Smad通路参与调控人宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨RAD51相关蛋白1(RAD51AP1)通过调节转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路对人宫颈癌细胞(SiHa)增殖和凋亡的影响。方法:收集2018年7月至2021年3月间南阳市中心医院51例宫颈癌组织与癌旁组织标本,免疫组织化学法检测宫颈癌组织RAD51AP1蛋白表达。筛选RAD51AP1高表达宫颈癌细胞系,体外培养SiHa细胞,分为对照组、si-RAD51AP1组(转染si-RAD51AP1质粒)、si-NC组(转染si-NC质粒)、抑制剂组(TGF-β/Smad通路抑制剂LY2109761)、si-RAD51AP1+激活剂组(转染si-RAD51AP1质粒+TGF-β/Smad通路激活剂人重组TGF-β1)。采用MTT法与平板克隆形成实验检测各组SiHa细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测细胞中RAD51AP1、TGF-β1 mRNA水平;免疫印迹检测细胞中RAD51AP1蛋白、TGF-β/Smad通路相关蛋白及增殖、凋亡相关蛋白表达。结果:RAD51AP1在宫颈癌组织与SiHa细胞系中均显著高表达;抑制RAD51AP1表达或抑制TGF-β/Smad通路后,细胞增殖活性、细胞克隆形成率及cyclin D1、TGF-β1、p-SMAD2、p-SMAD3蛋白表达水平显著减低,细胞凋亡率、Bax、caspase-3、cleaved caspase 3蛋白表达水平显著升高,而抑制RAD51AP1表达基础上使用TGF-β/Smad通路激活剂后,可部分逆转上述变化。结论:RAD51AP1在宫颈癌中表达上调,抑制RAD51AP1表达可通过抑制TGF-β/Smad通路而抑制宫颈癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

联合检测蛋白ERCC1、Rad51和P53的表达与预测晚期非小细胞肺癌铂类药物化疗疗效的相关性研究

目的：检测ERCC1、Rad51和P53在晚期非小细胞肺癌中的表达，探讨其临床意义和与铂类药物化疗疗效的相关性。方法选取我院2012年6月～2013年6月诊断为晚期非小细胞肺癌的68例患者病理学标本，采用免疫荧光组织化学染色法检测晚期非小细胞肺癌患者标本和外周淋巴血细胞中ERCC1、Rad51和P53的表达，观察ERCC1、Rad51和P53在晚期非小细胞肺癌患者标本和外周淋巴血细胞中表达的相关性；给予患者2～4个疗程铂类为基础的标准化疗方案，评价ERCC1、Rad51和P53蛋白的表达与化疗疗效相关性。结果晚期非小细胞肺癌患者标本和外周淋巴血细胞中ERCC1、Rad51和P53阳性率（分别为42.6%、35.3%和45.6%）和阴性表达率（分别为33.8%、27.9%和38.2%）相同，呈显著正相关（均P＜0.05）；ERCC1、Rad51和P53蛋白表达在患者年龄、性别、TNM分期、病理类型间无统计学意义（P＜0.05）；ERCC1阳性表达患者铂类药物化疗后总有效率为41.2%，显著低于阴性患者化疗后总有效率73.9%（P＜0.05）；Rad51阳性表达患者化疗后总有效率33.3%显著低于阴性表达患者化疗后总有效率63.2%（P＜0.05）；P53阳性表达患者铂类药物化疗后总有效率为29.0%，显著低于阴性患者化疗后总有效率53.8%（P＜0.05）。结论检测晚期非小细胞肺癌患者外周淋巴血细胞中ERCC1、Rad51和P53表达可很好反映其在癌组织中的表达情况；ERCC1、Rad51和P53表达较低的患者铂类药物治疗有效率更好，ERCC1、Rad51和P53对化疗疗效的预测为负相关。

CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白在食管胃结合部腺癌患者中差异表达及其机制探讨

目的探讨人类表皮生长因子受体2(CerbB-2)、细胞周期检验点激酶1(CHK1)及RAD51蛋白在食管胃结合部腺癌(AEG)患者中的表达意义。方法回顾性分析2020年1月至2022年1月在邯郸市第一医院确诊为AEG的180例患者资料,取癌变部位组织标本180份作为癌变组,取其远端正常胃黏膜组织180份作为对照组,选取同时期胃黏膜上皮内瘤变组织152份,并按照瘤变程度分为中低级别上皮内瘤变组(n=69)及高级别上皮内瘤变组(n=83)。采用蛋白质印迹法检测CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白在各组中的表达;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白联合检测对AEG的诊断价值;分析各蛋白与AEG患者临床病理特征的关系并探讨其相关机制。结果CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白在各组别之间的表达水平差异有统计学意义,且均为对照组<中低级别上皮内瘤变组<高级别上皮内瘤变组<癌变组(均P<0.05);ROC曲线显示CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白联合检测的曲线下面积高于单一检测,敏感度为90.30%,特异度为85.60%;CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白阳性表达均与分化程度、Lauren分型相关,但RAD51蛋白阳性表达还与淋巴结转移相关(均P<0.05);CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白阳性表达率均与分化程度、Lauren分型呈负相关,其中RAD51与淋巴结转移呈正相关(均P<0.05)。结论CerbB-2、CHK1、RAD51蛋白均在AEG患者中呈现高表达,且与疾病进程及病理特征相关,可通过检测其表达水平或阳性率诊断疾病发生及进展情况。

RAD51AP1沉默通过调控有丝分裂基因抑制肝癌细胞增殖

目的分析沉默RAD51AP1基因对肝癌细胞增殖的影响,并初步探索其作用机制。方法利用qPCR检测RAD51AP1在不同肝癌细胞系中的表达;制备shRAD51AP1慢病毒并转导HepG2和Huh7细胞来沉默RAD51AP1,采用qPCR检测RAD51AP1的沉默效率;MTS法和克隆形成实验检测RAD51AP1沉默对细胞增殖和克隆形成能力的影响;根据转录组测序结果筛选出差异表达基因,并作进一步的检测分析;通过裸鼠体内成瘤实验研究RAD51AP1沉默对肝癌细胞增殖的影响。结果MTS结果显示,HepG2和Huh7细胞中RAD51AP1沉默组的增殖能力均显著低于对照组(P<0.01);克隆形成实验显示,RAD51AP1沉默组克隆形成数明显少于对照组(P<0.01);通过转录测序筛选出差异表达基因TACC1、NEK7,并从蛋白水平进行了验证。结论RAD51AP1基因沉默能够有效抑制肝癌细胞增殖,有望成为预防或治疗肝癌的新靶点。

老年宫颈鳞癌患者癌组织中细胞周期检测点激酶1、2和DNA双链断裂修复蛋白51的表达及意义

目的检测老年宫颈鳞癌患者癌组织中细胞周期检测点激酶(CHK)1、2和DNA双链断裂修复蛋白(RAD)51的表达特征,关注其在不同临床特征中的表达差别及相关性。方法 121例老年宫颈鳞癌患者作为观察组,以70例慢性宫颈炎组织作为对照组,采用免疫组织化学方法检测CHK1、2和RAD51表达及在不同临床病理特征中的表达差别及相关性。结果观察组CHK1、2和RAD51表达阳性率明显高于对照组,观察组CHK1、2和RAD51表达阳性率与肿瘤最大径、淋巴结转移、脉管浸润、累及宫颈管深度和Ki67表达密切相关。观察组CHK1和2、CHK1和RAD51、CHK2和RAD51的表达均呈正相关性。结论老年宫颈鳞癌患者癌组织中CHK1、2和RAD51高表达且具有协同作用,不仅可以加速肿瘤发生和进展,也可能对判断肿瘤生物学行为有重要意义。

胃癌组织中RAD51及CHK1的表达及意义

目的探讨RAD51及细胞周期检测点激酶1(cell cycle checkpointkinase 1,CHK1)在胃癌中的表达及意义。方法采用免疫组化EnVision两步法检测67例胃癌组织和21例正常胃黏膜组织中RAD51及CHK1蛋白表达,并分析其与胃癌临床病理征特的关系。结果胃癌组织中RAD51及CHK1蛋白表达明显高于正常胃黏膜组织(P<0.05)。RAD51蛋白表达与胃癌的病理分化程度、侵犯深度、有无淋巴结转移有关(P<0.05)。CHK1蛋白表达与胃癌病理分化程度有关(P<0.05)。胃癌组织中RAD51和CHK1蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论 RAD51及CHK1蛋白在胃癌组织中呈高表达,二者在胃癌发生、发展及生物学行为中可能起到重要作用。

胃腺癌中细胞周期检测点激酶1、2和DNA双链断裂修复蛋白51的表达及意义

目的检测胃腺癌中细胞周期检测点激酶(CHK)1、2和DNA双链断裂修复蛋白(RAD)51的表达,分析三者在不同临床特征中的表达意义及相关性。方法以97例胃腺癌术后组织为观察组,以切端经病理证实为正常胃黏膜组织80例为对照组,应用免疫组化方法检测两组CHK1、CHK2和RAD51表达,分析其表达的特征及相关性。结果观察组CHK1、CHK2和RAD51表达的阳性率明显高于对照组,观察组CHK1、CHK2和RAD51表达与肿瘤的分化程度、浸润深度和临床分期相关,而与淋巴结转移无关。CHK1和RAD51、CHK2和RAD51的表达具有正相关性。结论 CHK1、CHK2和RAD51高表达可以有效促进胃腺癌发生和进展,CHK1、CHK2和RAD51具有一定协同作用。

散发性大肠腺瘤癌变过程中Rad51和Chk1的表达及意义

目的探讨Rad51和Chk1在散发性大肠腺瘤癌变中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测71例大肠黏膜、66例散发性大肠腺瘤伴上皮不典型增生和98例大肠腺瘤癌变中,Rad51和Chk1的表达,并分析其与大肠癌临床病理特征的关系。结果①在大肠黏膜组、腺瘤组和癌变组中,Rad51和Chk1的表达水平逐渐升高。②在腺瘤癌变组中,Rad51的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),Chk1的表达与肿瘤的分化程度有关。③在腺瘤组中,中重度不典型增生者Rad51和Chk1的阳性表达高于轻度不典型增生者。结论 Chk1和Rad51在大肠腺瘤癌变的发生、发展过程中起重要作用。

BRCA1、BRCA2、RAD51和FANCD2在上皮性卵巢癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的:探讨DNA双链断裂的同源重组修复相关的蛋白乳腺癌易感1(BRCA1)、乳腺癌易感2(BRCA2)、DNA修复蛋白RAD51和范可尼贫血D2蛋白(FANCD2)在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:收集上皮性卵巢癌(EOC)患者的临床癌组织样本共84例和正常卵巢组织6例,采用免疫组化法检测BRCA1、BRCA2、RAD51、FANCD2蛋白的表达。通过GEPIA分析TCGA数据库中4种基因在EOC组织中的表达以及它们之间的相关性。使用Ualcan分析TCGA数据库中4种基因在EOC组织中的表达水平与临床病理特征的关系。结果:免疫组化检测结果表明,BRCA2、RAD51和FANCD2蛋白在EOC组织中的阳性表达率显著高于正常卵巢组织(均P<0.05)。经GEPIA对TCGA数据库分析,BRCA1、BRCA2、RAD51和FANCD2的mRNA表达在EOC组织中显著上升,且两两之间均呈明显正相关。经Ualcan对TCGA数据库分析,BRCA1 mRNA在41岁以上的患者中表达显著增高;且4种基因在2级(肿瘤组织学分级)以上的肿瘤中均表达较高,RAD51 mRNA在3级肿瘤中的表达明显高于2级肿瘤;FANCD2 mRNA在非洲裔人种中的表达显著高于白种人;TP53突变EOC组织中BRCA1、RAD51和FANCD2的mRNA表达显著高于未突变EOC组织。结论:EOC组织中BRCA2、FANCD2和RAD51等蛋白和mRNA表达显著升高,有可能成为卵巢癌诊疗的生物标志物。

ATR抑制剂联合卡铂对裸鼠乳腺癌移植瘤的作用及其对组织BRG1、RAD51、PALB2的影响

目的 探究ATR抑制剂联合卡铂对裸鼠乳腺癌移植瘤的作用及其对组织BRG1、RAD51、PALB2的影响.方法 将40只乳腺癌移植瘤模型裸鼠随机分为对照组、卡铂组、ATR抑制剂M6620组和卡铂+M6620组(n=10).记录肿瘤体积和质量,RT-qPCR和Western印迹检测肿瘤组织中Ki67、MMP2、N-cad-herin、E-cadherin mRNA和蛋白表达量,免疫组化检测Brahma相关基因1(Brahma related gene 1,BRG1)、重组酶51(recombinase 51,RAD51)、乳腺癌易感基因2定位协作蛋白(breast cancer susceptibility gene 2 localization collaboration protein,PALB2)蛋白水平.结果 卡铂组和M6620组的肿瘤质量、体积、Ki67、MMP2、N-cadherin mRNA和蛋白水平,以及BRG1、RAD51、PALB2蛋白水平显著低于对照组,E-cadherin-mRNA和蛋白显著高于对照组(P<0.05).卡铂+M6620组的肿瘤质量、体积、Ki67、MMP2、N-cadherin mRNA和蛋白水平,以及BRG1、RAD51、PALB2蛋白水平显著低于卡铂组和M6620组,而E-cadherin mR-NA和蛋白显著高于卡铂组和M6620组(P<0.05).结论 ATR抑制剂联合卡铂可抑制裸鼠乳腺癌移植瘤的生长和组织中BRG1、RAD51、PALB2的表达.

RAD51AP1通过CDK1/PI3K/AKT通路影响卵巢癌细胞增殖、细胞周期和凋亡

目的探讨RAD51相关蛋白1(RAD51AP1)通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对卵巢癌细胞(OVCAR3)增殖、细胞周期和凋亡的影响及其分子机制。方法通过生信数据库筛选差异表达基因,及对RAD51AP1在卵巢癌患者中的表达和总生存期进行分析,qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌细胞系中RAD51AP1表达;体外培养OVCAR3细胞,分为Ctrl组、NC组、RAD51AP1-KD组、RAD51AP1-KD+CDK1组,qRT-PCR和Westernblot检测RAD51AP1、CDK1和PI3K/AKT通路相关蛋白表达,CCK8和平板克隆形成实验检测细胞增殖,细胞周期和凋亡由流式细胞术测定。结果差异表达基因RAD51AP1在卵巢癌组织和细胞系中显著上调(P<0.05),且其高表达患者的总生存期时间短(P<0.05);敲低RAD51AP1显著降低了OVCAR3细胞活力和克隆形成能力,阻滞细胞在G0/G1期,促进凋亡,下调CDK1、PI3K和P-AKT的表达(P<0.05),过表达CDK1则部分逆转上述指标(P<0.05)。结论RAD51AP1在卵巢癌细胞中高表达,敲低RAD51AP1可通过调节CDK1/PI3K/AKT通路抑制卵巢癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡。

IGF-1介导TDAG51对抑郁模型大鼠海马PI3K/Akt/FoxO3a信号通路的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导T细胞死亡相关蛋白51(TDAG51)对抑郁模型大鼠海马磷脂酰肌苷3激酶/蛋白激酶B/叉头状转录因子O亚族3a(PI3K/Akt/FoxO3a)信号通路的影响。方法:将50只大鼠按分层随机法分为空白对照组、CUMS组、CUMS+IGF-1组、CUMS+LV-TDAG51-shRNA组、CUMS+IGF-1+LV-TDAG51-shRNA组,每组10只。慢性不可预测轻度应激(CUMS)诱导产生抑郁症大鼠模型。CUMS+IGF-1组大鼠注射5 mL IGF-1(5 mg/mL)和300μL LV-NC慢病毒;CUMS+LV-TDAG51-shRNA组大鼠注射5 mL生理盐水和300μL LV-TDAG51-shRNA慢病毒;CUMS+IGF-1+LVTDAG51-shRNA组大鼠注射5 mL IGF-1(5 mg/mL)和LV-TDAG51-shRNA慢病毒。空白对照组及CUMS组大鼠注射5 mL生理盐水和300μL LV-NC慢病毒。检测大鼠体重和蔗糖消耗量的变化;旷场实验检测大鼠自主行为;实时荧光定量PCR检测大鼠海马TDAG51、PI3K/Akt/FoxO3a信号通路相关因子的mRNA表达;Western blot检测TDAG51蛋白表达及PI3K/Akt/FoxO3a信号通路相关因子的磷酸化水平。结果:与空白对照组相比,CUMS组大鼠体重、蔗糖消耗量、水平交叉数、垂直时间和PI3K、Akt、FoxO3amRNA表达及磷酸化水平显著降低(P<0.05);与CUMS组相比,CUMS+IGF-1组和CUMS+IGF-1+LVTDAG51-shRNA组大鼠海马TDAG51 mRNA和蛋白表达、PI3K、Akt、FoxO3a mRNA表达和磷酸化水平显著升高(P<0.05),体重、蔗糖消耗量、水平交叉数和垂直时间显著升高(P<0.05),CUMS+LV-TDAG51-shRNA组则低于CUMS组;与CUMS+IGF-1组相比,CUMS+IGF-1+LV-TDAG51-shRNA组大鼠海马TDAG51 mRNA和蛋白表达、PI3K、Akt、FoxO3a mRNA表达和磷酸化水平显著降低(P<0.05),体重、蔗糖消耗量、水平交叉数和垂直时间显著降低(P<0.05)。结论:IGF-1可能通过介导TDAG51活化抑郁症模型大鼠海马PI3K/Akt/FoxO3a信号通路,改善抑郁症症状。

sCTLA-4、RAD51C蛋白对宫颈癌患者介入治疗术后复发的预测价值

目的分析可溶性细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(sCTLA-4)、RAD51旁系同源基因C(RAD51C)蛋白对宫颈癌患者介入治疗术后复发的预测价值。方法选取2015年5月至2019年4月河南省人民医院宫颈癌患者107例为观察组,均经介入手术治疗,统计术后复发情况,另选取同期良性宫颈疾病患者107例为对照组。比较观察组、对照组及是否复发患者sCTLA-4、RAD51C蛋白表达,采用Logistic回归分析宫颈癌患者术后复发的影响因素,构建宫颈癌患者术后复发的列线图模型并采用校准曲线验证,绘制决策曲线分析sCTLA-4、RAD51C蛋白预测宫颈癌患者术后复发的价值,并统计不同sCTLA-4、RAD51C蛋白表达患者的复发率。结果观察组sCTLA-4水平、RAD51C蛋白高表达率高于对照组(P<0.05);高危型人乳头瘤病毒阳性、脉管浸润、间质浸润≥1/2、宫旁浸润、RAD51C蛋白高表达及sCTLA-4高水平是宫颈癌患者术后复发的独立危险因素(P<0.05);高危型人乳头瘤病毒、脉管浸润、间质浸润、宫旁浸润、RAD51C蛋白及sCTLA-4水平构建宫颈癌患者术后复发的列线图预测模型,一致性指数分别为0.610(95%CI为0.511~0.702)、0.616(95%CI为0.517~0.708)、0.640(95%CI为0.541~0.730)、0.609(95%CI为0.510~0.702)、0.728(95%CI为0.633~0.809)、0.817(95%CI为0.731~0.885),且校准曲线验证显示具有较高一致性,sCTLA-4、RAD51C蛋白联合检测的净受益率大于单独检测。结论宫颈癌患者sCTLA-4、RAD51C蛋白均呈高表达,且二者同时高表达表明宫颈癌患者术后复发风险较高,临床可通过检测sCTLA-4、RAD51C蛋白表达情况筛选高复发风险患者并及早进行干预,以降低复发率。

PI3K/mTOR通路抑制剂NVP-BEZ235增加直肠癌细胞SW1463的放射敏感性

背景与目的直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,提高直肠癌细胞的放射敏感性、降低术后局部复发率是临床工作中亟待解决的难题。本文旨在探讨PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235调节直肠癌细胞SW1463辐射敏感性的作用及机制。方法将完全培养基中对数生长期的SW1463细胞分为3组,分别进行无照射(对照组)、2 Gy高能X射线照射(辐射组)和100 nmol/L NVP-BEZ235处理1 h后给予2 Gy高能X射线照射(辐射+NVP-BEZ235组)处理,通过CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖能力和活力,通过Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞迁移能力,通过γH2AX免疫荧光染色检测DNA损伤反应,通过免疫印迹检测PI3K/mTOR通路和HR途径相关蛋白表达情况。采用单因素方差分析和Dunnett’s multiple comparisons test进行统计学分析。结果辐射引起了SW1463细胞增殖能力、细胞活力、迁移能力的降低,而NVP-BEZ235进一步降低了辐射引起的SW1463细胞活性的降低;辐射增加了SW1463细胞的DNA损伤,而NVP-BEZ235则进一步增加了辐射引起的SW1463细胞的DNA损伤。辐射引起了SW1463细胞PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-S6、p-BRCA1和D51蛋白水平的升高,而NVP-BEZ235则抑制了辐射引起的蛋白水平下调(均P<0.05)。结论辐射引起SW1463细胞活力、增殖和迁移能力的降低,增加SW1463细胞的DNA损伤;NVP-BEZ235可加强辐射对细胞的影响,两者可能发挥协同作用。

三氧化二砷通过毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶通路上调KG1a细胞UL16结合蛋白1的表达

目的观察三氧化二砷(ATO)对急性髓系白血病细胞KG1a细胞表面NKG2D配体UL16结合蛋白1(ULBP1)表达的影响,探讨其调节ULBP1表达的分子机制。方法常规体外培养KG1a细胞,采用细胞增殖/毒性检测试剂(CCK8)检测不同浓度ATO对KG1a细胞的增殖抑制率;应用实时荧光定量反转录(RT)-PCR方法检测KG1a细胞ULBP1 mRNA表达的影响;流式细胞术检测ATO对KG1a细胞表面ULBP1蛋白表达的影响。加入毛细血管扩张性共济失调突变和RAD3相关激酶(ATM/ATR)抑制剂咖啡因,观察其是否影响ATO对KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达。采用Western blot法观察ATO对KG1a细胞中CHK1、CHK2蛋白及其磷酸化表达的影响。结果不同浓度(1、2、3、4、5μmol/L)ATO均可抑制KG1a细胞的增殖,呈浓度依赖性,其对KG1a细胞的半数抑制浓度(IC50值)为2.7μmol/L。荧光定量RT-PCR法检测结果示ATO可使KG1a细胞ULBP1 mRNA的相对表达水平升高,ATO在浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L时,与未加药组比较,ULBP1 mRNA相对表达水平分别升高至(1.86±0.30)倍、(3.02±0.71)倍、(3.16±0.75)倍、(4.80±0.70)倍、(3.70±0.89)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05);与未加药组相比,当ATO浓度分别为1、2、3、4、5μmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。咖啡因预先处理KG1a细胞2 h再联合ATO共同孵育KG1a细胞24 h,ULBP1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低。在咖啡因浓度为8 mmol/L时,ULBP1 mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(9.55±0.38)倍降为(6.36±0.93)倍,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果发现,当咖啡因浓度分别为2、4、8 mmol/L时,ULBP1蛋白相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.50±0.08)倍分别降为(2.17±0.07)倍、(2.02±0.06)倍、(1.75±0.06)倍,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CHK1和CHK2蛋白相对表达水平均随ATO浓度的升高而降低,而CHK1和CHK2磷酸化蛋白的相对表达水平均随ATO浓度的升高而升高。结论ATO诱导上调KG1a细胞ULBP1 mRNA及蛋白的表达,ATM/ATR-CHK1/CHK2通路可能参与这一过程。

人参皂苷Rg1诱导白血病K562细胞老化的研究

目的目前人参皂苷Rg1主要集中于对实体瘤和急性白血病的研究,涉及慢性白血病的报道较少。文中旨在探讨共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关蛋白(ATR)-检查点激酶1(Chk1)通路在人参皂苷Rg1诱导白血病K562细胞老化中的作用。方法采用不同浓度的人参皂苷Rg1处理K562细胞,分为对照组(加入50μL PBS培养液)、5μmol/L人参皂苷组、10μmol/L人参皂苷组、20μmol/L人参皂苷组、40μmol/L人参皂苷组、80μmol/L人参皂苷组。运用CCK-8法、集落形成实验和流式细胞术检测细胞周期确定人参皂苷Rg1对K562细胞老化的影响;SA-β-Gal染色法和Wright’s染色法观察K562细胞衰老形态学变化;实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞老化调控因子ATR和Chk1表达的改变。结果20μmol/L人参皂苷组K562细胞集落形成率较其他组明显降低(P<0.05)。CCK-8检测结果显示,人参皂苷Rg1各组分别诱导K562细胞24、48、72 h,K562细胞增殖能力较对照组升高(P<0.05);当20μmol/L人参皂苷组48 h时K562细胞增殖抑制率最高(P<0.05)。20μmol/L人参皂苷组作用48 h后,K562细胞SA-β-Gal染色阳性细胞率[(95.833±1.528)%]显著高于对照组[(3.083±0.764)%],阻滞在G0/G1期的细胞较对照组明显增高,进入S期和G2/M期的细胞较对照组明显减少(P<0.05);且ATR和Chk1 mRNA表达水平[(0.0117±0.0038)%、(0.0120±0.0021)%]较对照组[(0.0027±0.0006)%、(0.0058±0.0019)%]明显增高(P<0.05);ATR和Chk1蛋白相对表达水平[(19.370±0.994)%、(43.520±1.236)%]较对照组[(17.080±1.274)%、(39.100±0.969)%]明显上调(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1可通过调控ATR-Chk1通路诱导K562细胞老化,可为临床白血病治疗提供新靶点。

对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32对胰腺癌细胞的作用及机制

目的探讨对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32对胰腺癌细胞SW1990的作用及机制。方法将SW1990细胞随机分为对照组、0.5μmol·L^(-1) J32组、1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组,分别用含终浓度0.0、0.5、1.0、2.0、4.0μmol·L^(-1) J32的培养基培养。采用细胞划痕试验检测细胞迁移能力,单克隆形成试验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况、细胞中活性氧水平及细胞周期,磷酸化H2组蛋白家族成员X(γ-H2AX)免疫荧光法检测细胞DNA损伤程度,Western blot法检测共济失调毛细血管扩张和Rad3相关蛋白(ATR)-细胞周期检查点激酶1(Chk1)-p53-细胞周期素D1(Cyclin D1)通路相关蛋白以及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达。结果培养24、48 h时,1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力显著低于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力均显著低于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力显著低于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。0.5μmol·L^(-1) J32组、1.0μmol·L^(-1) J32组细胞的增殖能力显著低于对照组(P<0.05),1.0μmol·L^(-1) J32组细胞的增殖能力显著低于0.5μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组细胞的DNA损伤程度显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组细胞的DNA损伤程度显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组细胞中G 1/S期细胞占比显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组细胞中G 1/S期细胞占比显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。对照组、1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞中,随着J32浓度的增加,磷酸化ATR/ATR值及磷酸化p53蛋白表达呈升高趋势(F=25.534、3.970,P<0.05),Chk1、CyclinD1蛋白表达呈降低趋势(F=19.532、0.485,P<0.05);促凋亡蛋白caspase-3、Bax的表达呈升高趋势(F=0.219、4.314,P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达呈下降趋势(F=0.324,P<0.05)。结论对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32可呈浓度依赖性地抑制胰腺癌SW1990细胞的迁移和增殖、促进细胞凋亡及提高细胞内活性氧水平,此外,J32可促进细胞发生DNA损伤及细胞周期阻滞,其作用机制可能与ATR-Chk1-p53-Cyclin D1通路相关。

晚期胃癌分子靶向药物研发的研究进展

近年来,化疗基础上加用抗表皮生长因子受体2药物、抗血管生成药物及免疫检查点抑制剂,不仅可提高晚期胃癌(GC)患者治疗的有效率,而且可明显改善患者预后。然而,目前晚期GC患者治疗后的生存获益远落后于肺癌、结直肠癌及乳腺癌等实体肿瘤,靶向治疗仍需进一步探索。随着分子生物学技术的发展,新的治疗靶点如Claudin 18.2、基质金属蛋白酶(MMP)、Dickkopf相关蛋白1(DKK-1)、RAD3相关蛋白激酶(ATR)被发现在GC细胞中表达,针对这些靶点的药物逐渐在临床治疗中崭露头角,并显示出较好的临床应用前景。阐述晚期GC治疗中靶点的作用机制及靶向药物的研究进展,对提高GC的临床治疗疗效具有重要意义。

当归芍药散对MAFLD大鼠AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路的调节作用

目的:观察当归芍药散对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)大鼠腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1(AMPK/mTOR/ULK1)信号通路的调控作用,探讨其对MAFLD大鼠的治疗作用及机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组(多烯磷脂酰胆碱胶囊,0.144 g·kg^(-1))及当归芍药散低、中、高剂量组(2.44、4.88、9.76 g·kg^(-1))。采用高脂饲料连续喂养8周后,各用药组给予相应药物治疗4周。给药结束后,收集血清和肝组织用于后续实验检测。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝组织TC、TG、游离脂肪酸(FFA)的含量或活性均显著升高(P<0.01),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著降低(P<0.01),肝组织磷酸化(p)-AMPK、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)Ⅱ、Beclin1和ULK1蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),p-mTOR和泛素结合蛋白p62蛋白表达水平显著升高(P<0.01),肝细胞出现脂肪性变,NAFLD活动度评分(NAS)和油红O染色面积均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,当归芍药散可降低血清TC、TG、ALT、AST和肝组织TC、TG、FFA的含量或活性及p-mTOR和p62蛋白表达水平(P<0.01),升高血清HDL-C含量及肝组织p-AMPK、LCBⅡ、Beclin1和ULK1蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),改善肝组织脂肪性变,降低NAS和油红O染色面积(P<0.05,P<0.01)。结论:当归芍药散对MAFLD大鼠有治疗作用,其机制可能与调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路,增强自噬有关。

依维莫司和LBH589对耐药急性髓系白血病细胞增殖、凋亡及多药耐药相关蛋白表达的影响

目的探讨雷帕霉素衍生物依维莫司（RAD001）或联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对耐药急性髓系白血病细胞株HL-60／ADM细胞增殖、凋亡和逆转耐药的影响。方法采用不同浓度RAD001或联合LBH589处理HL-60／ADM细胞，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活力，Hoechst33342染色法和AnnexinV—FITC／PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡、阿霉素摄取率和多药耐药相关蛋白1（MRP1）表达评估逆转耐药效应。进一步检测处理前后细胞信号通路蛋白变化，探讨其机制。结果10～50μmol／LRAD001均能够抑制HL-60／ADM细胞增殖、诱导凋亡，在作用48和72h时30μmol／L药物浓度达到最大抑制效果，进一步增加药物浓度细胞增殖抑制率并没有明显增加（P〈0．05）。不同浓度RAD001和LBH589联合处理HL-60／ADM细胞，没有明显的协同抑制增殖作用[协同指数（CI）≥1．0]。10μmol／LRAD001处理HL-60／ADM细胞可以明显下调细胞表面MRP1表达（93．90％±4．20％比79．10％±3．28％，P〈0．05），提高HL-60／ADM细胞阿霉素蓄积率（8．53％±0．68％比15．37％±1．46％，P〈0．01）。深入机制研究表明，RAD001可以阻断P13K／AKT／mTOR信号通路活性，通过上调1）53抑制MRPI蛋白的活性。结论RAD001与LBH589联合没有协同抑制HL-60／ADM细胞增殖作用。但RAD001单药能够有效抑制HL-60／ADM细胞增殖，诱导凋亡，通过阻断P13K／AKT／mTOR信号通路抑制细胞MRP1蛋白的表达，提高细胞阿霉素摄取率而逆转耐药。