柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量及营养价值评价

建立柱前衍生-高效液相色谱法测定巴戟天中氨基酸含量,采用氨基酸比值系数法评价其营养价值。采用盐酸水解法制得巴戟天氨基酸供试品溶液,以异硫氰酸苯酯和三乙胺为柱前衍生化试剂,采用高效液相色谱法,使用Ultimate Amino Acid色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)以0.1 mol/L无水乙酸钠-乙腈为流动相,梯度洗脱,柱温40℃,检测波长为254 nm,测定氨基酸含量;通过氨基酸比值、氨基酸比值系数、氨基酸比值系数分等评价其营养价值,并采用系统聚类和主成分分析对其进行分类分析。结果表明,15种氨基酸线性关系良好,相关系数r≥0.9996。16份巴戟天氨基酸总含量为17.87~102.15 mg/g,均检测到15种氨基酸,其中包含6种必需氨基酸,占总氨基酸含量的14.15%~32.06%;8种药用氨基酸,占总氨基酸含量的45.20%~56.31%。限制氨基酸为苏氨酸和亮氨酸,氨基酸比值系数分为33.87~61.31。不同巴戟天样品氨基酸组成相关性显著;主成分分析提取2个主成分,累计方差贡献率为97.085%,可将16批巴戟天分为三类。该实验测定方法简单有效,可同时分离测定15种氨基酸,精密度与重复性良好,有较高的药用价值,可为巴戟天的品质分析和资源开发利用提供参考。

不同产地巴戟天HPLC指纹图谱及化学模式识别研究

目的:利用HPLC指纹图谱及化学模式识别对巴戟天药材进行评价。方法:采用Shodex Asahipak NH2P-504E色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水为流动相梯度洗脱,使用蒸发光散射检测器(ELSD)。利用相似度评价、聚类分析和主成分分析等化学模式识别方法,对不同产地的巴戟天药材进行分析。结果:所建立的HPLC指纹图谱共识别了18个共有峰,经与对照品图谱比较,鉴定其中的4个共有峰分别为果糖、蔗糖、蔗果三糖和耐斯糖。6个产地巴戟天的相似度在0.861~0.995;经聚类分析和主成分分析,6个产地巴戟天共聚为3类。结论:本研究采用的巴戟天HPLC指纹图谱及化学模式识别技术可反映出不同产地的巴戟天样品的差异,可为巴戟天的质量控制提供参考。

基于BDNF/CREB信号通路探讨巴戟天对慢性应激抑郁大鼠海马神经元损伤的影响

目的研究巴戟天对慢性应激抑郁大鼠海马神经元损伤及脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)/细胞内环磷腺苷效应元件结合蛋白(cyclic adenosine phosphate response element binding protein,CREB)信号通路的影响。方法从40只SD大鼠随机选取其中10只为正常组,对其余大鼠构建慢性不可预知温和应激模型后,再将其分为3组,即模型组,盐酸氟西汀组(3.17 mg·kg^(-1)),巴戟天组(3.17 g·kg^(-1))。持续灌胃后给药8周,1次/d,并先后在造模前、造模后和给药后开展了行为学实验,以判断大鼠的抑郁情况。通过苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)研究大鼠海马形态学改变,用免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)测定大鼠海马BDNF蛋白表达,用HE染色研究大鼠海马组织病理损伤并评分,用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)测定大鼠海马BDNF、TrkB、CREB mRNA相对表达,用蛋白免疫印迹法(western blot,WB)测定大鼠海马BDNF、TrkB、CREB蛋白的相对表达。结果与正常组比较,模型组大鼠活动总路程显著减少(P<0.05),自主游泳时间显著减少(P<0.05),悬尾挣扎时间显著减少(P<0.05)。HE染色结果中表明海马神经元组织受到破坏,病理损伤评分显著下降(P<0.05),免疫组织化学染色中海马BDNF表现显著下降(P<0.05),BDNF、TrkB、CREB mRNA的基因相对表达显著下降(P<0.05);与模型组对比,盐酸氟西汀组和巴戟天组大鼠活动的总里程明显提高(P<0.05),自主游泳时间显著增加(P<0.05),悬尾挣扎时间显著增加(P<0.05),HE染色结果表明海马神经元组织明显复原,病理损伤评分增加(P<0.05),免疫组织化学染色中BDNF表现显著增加(P<0.05),BDNF、TrkB、CREB mRNA的基因相对表达明显增加(P<0.05)。结论经慢性应激刺激后,巴戟天可能通过激活BDNF/TrkB/CREB信号通路对抑郁大鼠海马神经元损伤发挥神经保护作用,改善其抑郁样行为。

基于BMSCs淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质提取工艺研究

目的筛选淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质的最佳提取工艺。方法采用正交设计,选取提取时间、料液比、乙醇浓度为考察因素,以BMSCs细胞增殖率结合淫羊藿苷、总黄酮含量为考察指标,筛选淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质的最佳提取工艺,并对最佳提取条件进行验证。结果兼顾生产效率和节约能源,优选出淫羊藿-仙茅-巴戟天角药药效物质的最佳提取条件为提取时间1.5 h,乙醇浓度55%,溶剂用量10倍。验证实验结果BMSCs细胞增殖率、淫羊藿苷及总黄酮含量与工艺考察结果非常接近。结论该方法在保证淫羊藿-仙茅-巴戟天角药治疗骨质疏松的药效基础上,结合淫羊藿苷及总黄酮含量进行综合评价,优化提取工艺,使得实验结果更科学合理。

益肾固本法治疗稳定期慢性阻塞性肺疾病的用药经验

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种以慢性、进展性气流受限和呼吸道症状为表现的肺部疾病,西医治疗效果尚不完全满意,病情反复加重和高致死率给个人和社会带来沉重的负担。中医药历史悠久,经验丰富,治疗COPD疗效较好。本病多属中医学“喘证”“肺胀”等范畴,曹世宏教授认为,COPD是由多种慢性肺系疾病反复发作,迁延不愈,导致肺气胀满,不能敛降而引起的一种病证。病机为本虚标实,多在久病肺虚的基础上损及五脏,其中尤以肺肾两脏为甚,并强调痰浊和血瘀为其发病的关键病理因素。曹教授治疗稳定期COPD主张衷中参西、取长补短,采用支气管舒张剂吸入等西医基础治疗的同时,联合中药补益肺肾之气,治病求本,其中党参、黄芪、巴戟天等是曹教授临床常用中药,有平补肺脾之气,温补肾阳之功。同时注意化痰祛瘀,因人制宜,临床疗效颇佳。本研究附验案1则以佐证。

基于表型和分子标记分析24份巴戟天遗传多样性

【目的】广东省德庆县是道地药材巴戟天的产地,该文对广东德庆不同地区的24份巴戟天进行了种质资源的遗传多样性分析。【方法】以德庆县各地收集来的24份巴戟天资源为研究对象,使用主成分分析和SRAP、CDDP两种分子标记方法对24份巴戟天材料进行遗传多样性分析。【结果】在表型分析中,基于主成分分析的聚类图发现,官圩镇和高良镇、凤村镇和高良镇分别聚类至4个类群中。此外,18对SRAP引物组合和16条CDDP引物扩增后分别获得100条和98条总条带,其中SRAP多态性条带为50条,多态性比率达50%,平均遗传相似系数(GS)为0.87,遗传相似系数变化范围为0.71~0.97;CDDP多态性条带为80条,条带之间多态性比率达79.0%,各种质间遗传系数范围为0.71~0.96,平均遗传相似系数为0.86,且当系数为0.82时,两种分子标记结果均表明高良镇、官圩镇和凤村镇的种质之间具有一定的相似性。【结论】结合表型和分子标记聚类结果,高良镇和官圩镇、高良镇和凤村镇的亲缘关系最近,SRAP和CDDP两种分子标记方法对巴戟天遗传多样性的结果具有一定的差异,而联合分析可以更好地反映巴戟天遗传多样性研究及其资源的系统发育关系。

巴戟天多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

本文采用超声辅助水提醇沉法制备了3种巴戟天多糖,通过紫外光谱仪、傅里叶红外光谱(FT-IR光谱)和扫描电镜对巴戟天多糖的化学结构进行表征,并以此来研究巴戟天多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制动力学及抑制作用。结果表明,3种多糖是蛋白质/多糖或蛋白质/多聚糖/核酸偶联物;多糖沉淀溶剂极性越小,其结构均一性越差;巴戟天多糖BJ-90具有更好的α-葡萄糖苷酶抑制效果,属于混合型抑制剂。

基于国家药品评价性抽检的巴戟天饮片质量分析与研究

目的:通过国家药品评价性抽检工作,了解市场上的巴戟天饮片质量及存在的问题,为巴戟天的质量标准提高和市场监管提供数据支持。方法:从全国24个省级行政区抽取巴戟天饮片,按照《中华人民共和国药典》2015年版(一部)巴戟天性状项和薄层鉴别项方法开展检验工作,并进行DNA条形码技术、指纹图谱、环烯醚萜含量测定、真菌毒素残留量共4项探索性研究,分析检验结果以评价巴戟天饮片的市场情况。结果:本次抽检的88家企业的巴戟天饮片共计108批,按照国家法定标准检验的合格率为100%。DNA条形码技术可以有效区分巴戟天及其混伪品。指纹图谱研究结果显示,正品巴戟天指纹图谱相似度均超过95%,混伪品相似度均低于70%。含量测定结果显示,不同巴戟天炮制品中环烯醚萜从种类和含量上具有显著性差别。真菌毒素筛查试验结果显示,有1批样品的黄曲霉毒素G1超出药典限度。结论:按标检验结果显示,市场上巴戟天饮片质量基本合格。根据探索性研究结果,建议标准增加环烯醚萜含量测定和黄曲霉毒素限量检查。

谭新华教授治疗勃起功能障碍用药规律分析

目的通过对谭新华教授治疗勃起功能障碍的中药处方进行用药和配伍规律分析,为临床治疗提供参考。方法收集谭新华专家门诊2021年1月至2021年10月治疗勃起功能障碍的中药处方,建立医案数据库,基于中医传承计算平台3.0进行药物性味、归经、使用频次分析,以及相关规则与聚类分析。结果纳入治疗勃起功能障碍的中药处方227张,包含药物153味。用药以甘温为主,归肝、肾两经居多,脾经其次。补虚药使用最多,频次≥100的药物有10味,高频药物有茯苓、巴戟天、淫羊藿等,常见药对是淫羊藿-巴戟天。聚类分析发现,谭新华教授治疗勃起功能障碍有脾肾同调、补肾固涩、疏肝活血、平补阴阳、肝肾并治5种经典治法。结论谭新华教授治疗勃起功能障碍宜清补脾胃,在补肾的基础上注重固肾、疏肝养血、气火同调,以期为临床治疗用药提供思路和参考。

巴戟天的药理作用的研究进展

巴戟天是我国四大南药之一,临床上用于补肾益阳、滋阴调经、祛风除湿。近年来研究表明,巴戟天具有多方面的药理作用,如抗衰老,免疫增强,对内分泌系统的影响,促进造血作用等功能。本文概述了近年来巴戟天的药理活性的研究进展,为今后巴戟天的开发利用提供参考。

巴戟天多糖对体外培养成骨细胞核心结合因子α1 mRNA表达的影响

目的:观察巴戟天多糖对成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)表达的影响,并与巴戟天水提物相对照,阐述巴戟天补肾阳,强筋骨作用的实质。方法:取24h内新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,用巴戟天多糖及巴戟天水提物药物血清进行体外培养,72h后提取成骨细胞总RNA进行RT-PCR检测核心结合因子α1mRNA相对表达量。结果:巴戟天水提物组(1.3582±0.0966)与巴戟天多糖组(1.9073±0.1280)Cbfα1mRNA与对照组(0.7347±0.0327)相比具有非常显著差异,且巴戟天多糖组非常显著优于巴戟天水提物组。结论:巴戟天水提物与巴戟天多糖均能显著提高成骨细胞Cbfα1mRNA的表达,且巴戟天多糖的这种作用优于巴戟天水提物。提示巴戟天多糖是巴戟天提高成骨细胞(OB)活性的有效成分之一。

菟丝子、仙茅、巴戟天对人精子体外运动和膜功能影响的研究

目的：观察菟丝子、仙茅、巴戟天对人精子体外运动和膜功能的影响。方法：取不同浓度的菟丝子、仙茅、巴戟天水煎剂与人体精子混匀，３７℃孵育３０ｍｉｎ，通过精子毛细管穿透试验，精子运动速度和活力指数计算评估精子活动功能，采用精子低渗肿胀试验评价其膜功能。结果：精子的运动功能、膜功能均显著改善，其中以菟丝子最佳，仙茅次之，巴戟天则较差。结论；菟丝子对精子的运动能力和膜功能有促进作用。故有益于治疗男性不育并可能有助于提高人工授精的成功率。

巴戟天多糖的分级纯化及结构分析

对巴戟天多糖的柱层析分级纯化和一级结构进行了研究.采取热水浸提、乙醇沉淀的工艺获得巴戟天粗多糖MOHP,经离子交换和凝胶柱层析得到了MOHP-Ⅰ,MOHP-Ⅱ,MOHP-Ⅲ和MOHP-Ⅳ4个组分,通过红外光谱、液相和气相色谱等分析手段对分级后的MOHP-Ⅰ和MOHP-Ⅲ进行了初步的结构分析.结果表明:MOHP-Ⅰ的单糖组成为葡萄糖和果糖,分子质量约为2 ku,呋喃糖环结构;MOHP-Ⅲ是一种均一的糖蛋白物质,其组成单糖为阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、果糖以及半乳糖,分子质量约为35ku;高效凝胶渗透色谱显示两组分均达到了较高的纯度.

巴戟天不同炮制品中水晶兰苷的大鼠体内血药浓度及组织分布研究

目的探讨炮制对巴戟天中水晶兰苷在大鼠体内血药浓度及组织分布的影响。方法分别给予SD大鼠灌胃巴戟肉、盐巴戟天、制巴戟天的正丁醇萃取物,采用HPLC,Venusil MP C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.4%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,柱温25℃,检测波长235 nm,测定血浆及各组织中水晶兰苷的含量。结果巴戟肉、盐巴戟天、制巴戟天中水晶兰苷高、中、低剂量(0.177、1.77、17.7μg/m L)的药代动力学特征符合二室模型,在所研究的剂量范围内,AUC与给药剂量呈现良好的线性相关性,符合线性动力学特征。灌胃给药60 min后,水晶兰苷在肾、肺、肝、脾的浓度达到最大,在肾组织和肝组织中的浓度分布为盐巴戟天>巴戟肉>制巴戟天,在脾组织中浓度分布为制巴戟天>盐巴戟天>巴戟肉。结论不同炮制方法对巴戟天在大鼠体内血药浓度及组织分布有一定影响。

巴戟天挥发性成分研究

目的:研究巴戟天中的挥发性成分。方法:利用水蒸气蒸馏法提取巴戟天(Radix morindae officinalis)挥发油,用GC-MS进行测定,结合计算机检索技术对分离的化合物进行结构鉴定,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果:鉴定出34个化学成分,其中相对百分含量大于2%的分别确定为L-龙脑(Borneol L)29.28%,α-姜烯(Alpha-Zingiberene)4.88%,2-甲基-6-对甲基苯基-2-庚烯(Ar-Curcumene)4.49%,1-己醇(1-Hexanol)3.40%,β-倍半水芹烯(beta-sesquiphellandrene)3.34%,2-戊基呋喃(2-Amylfuran)3.32%,正壬醛(n-nonanal)2.17%,樟脑(L-camphor)2.07%,β-没药烯(bete-Bisabolene)2.06%。结论:34个挥发性成分均为首次从该植物中得到。

HPLC测定巴戟天中的水晶兰苷

目的以水晶兰苷为指标,评价商品巴戟天的质量。方法采用HPLC法,色谱柱为Kromalsil C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(5:95→28.8:71.2,15min),流速为1ml·min-1;检测波长为231nm;柱温为25℃。结果商品巴戟天中水晶兰苷的含量差异较大,仅广东省德庆县高良镇巴戟天规范化种植基地的4.5年生样品中水晶兰苷的含量较为稳定。结论商品巴戟天的质量参差不齐,应从源头上控制巴戟天的质量。

炮制对巴戟天中蒽醌类成分的影响

目的研究巴戟天的3种炮制品(巴戟肉、盐巴戟天、制巴戟天)在炮制过程中蒽醌类化学成分的变化。方法应用HPLC检测技术,以甲基异茜草素-1-甲醚及总蒽醌类化学成分为评价指标,分别考察3种炮制品在不同蒸制时间、加盐量及盐蒸时间、甘草量及煎煮时间条件下蒽醌类化学成分的变化。结果甲基异茜草素-1-甲醚在加热和加入辅料盐后均有增溶现象,但随着时间的延长,其含有量逐渐下降;在加入辅料甘草后该成分明显下降。总蒽醌类化学成分在不同炮制过程中随着加热时间的增加和辅料盐、甘草的加入,其变化均为先上升后下降。结论控制巴戟天炮制时间和辅料用量有助于控制巴戟天炮制品的质量。

巴戟天中微量元素的形态分析

目的对巴戟天中微量元素的形态进行分析。方法采用电感耦合等离子体质谱法测定巴戟天中13种元素含量及水煮溶出率,并分析水煎液中9种元素的可溶态与悬浮态、正辛醇-水萃取体系中醇溶态与水溶态。结果巴戟天中含量较多元素依次为Mn,Fe,Zn,Pb和Cu等。元素溶出率大小不取决于药材中元素总量。在水煎液9种元素中,Se,Mn和Co以可溶态为主,其余以悬浮态为主;Se,Fe,Pb以及肠液酸度下的Cu,Cd的醇溶态含量较高,其余醇溶态含量较低,酸度对元素Kwo值有影响。电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析法线性好、精密度高、可靠性好。结论巴戟天含有多种生命元素。元素溶出率主要取决于它在药材中存在形态。水煎液中,元素可溶态与悬浮态分布可能与其存在形态及煎出物特性有关;元素醇溶态与水溶态分布应与元素所结合成分及结合的稳定性有关。

不同炮制去心法对巴戟天水晶兰苷含量的影响

目的:比较不同炮制去心方法炮制的巴戟天中水晶兰苷的含量。方法:采用HPLC法,色谱柱为Kromalsil C18(200mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(90∶10),流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃,检测波长232 nm,进样量为5μl。结果:巴戟天各去心炮制品中水晶兰苷含量以润法最高,其次为煮法,泡后蒸法,泡法,清蒸法,最低为盐蒸法。结论:润法去心对巴戟天中水晶兰苷的含量影响最小,其炮制品中水晶兰苷含量最高。

不同炮制去心法对巴戟天多糖含量的影响

目的比较不同炮制去心方法的巴戟天及其木心中多糖的含量。方法采用80%乙醇回流提取,用改进的苯酚-硫酸法测定多糖的含量。结果巴戟天不同炮制品及其木心中多糖含量高低依次为:制巴戟天>巴戟肉>盐巴戟天>巴戟天木心。结论巴戟天经甘草制有利于多糖的溶出,盐炙品的多糖含量低于巴戟肉,巴戟天木心多糖含量最低。