从Raf-1/ERK/CREB信号通路探讨枢经推拿对慢性神经病理性疼痛大鼠的镇痛机制

分析对神经病理性疼痛大鼠Raf-1/ERK/CREB信号通路予以枢经推拿的效果。方法 对60只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、CCI组、假推拿组、推拿组,每组各12只。CCI组、假推拿组、推拿组大鼠经7天预饲养后建立坐骨神经慢性压迫(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)模型模拟神经病理性疼痛,正常组不予处理,假手术组模拟CCI造模但只暴露脊神经,不予接扎。在造模后第7天开始对推拿组每天进行推拿干预,假推拿组每天进行抚摸大鼠。检测造模后第3、7、14、21天这4个时间点各组大鼠的机械痛阈值和热痛阈值以明确推拿镇痛效果;分别在造模后第14、21天对各组大鼠随机各取6只大鼠进行处死取材;采用PCR检测各组大鼠脊髓背角及大脑灰质顶叶区的Raf-1、ERK、CREB的基因表达情况,采用Westernblot法检测各组大鼠Raf-1、ERK、CREB的蛋白表达情况。结果:在大鼠脊髓背角上,术后14天CCI组大鼠的Raf-1、ERK、CREB、均高于正常组和假手术组;推拿干预后推拿组的Raf-1、ERK、CREB均低于CCI组和假推拿组;但在造模后第21天,各组大鼠间的Raf-1、ERK、CREB差异无统计学意义。在大鼠大脑灰质顶叶区,造模后第14、21天的各组大鼠间的Raf-1、ERK、CREB、P38差异无统计学意义。结论 1、CCI模型可致神经病理性疼痛大鼠热痛阈、机械痛阈降低,推拿可提高CCI模型大鼠的热痛阈、机械痛阈。2、Raf-1/ERK/CREB信号通路参与了慢性神经病理性疼痛过程,推拿镇痛的机制可能与其下调脊髓背角中Raf-1/ERK/CREB信号通路基因和蛋白的表达有关。

榄香烯阻碍大鼠胶质瘤C6细胞ERK信号通路中Hsp90/Raf-1分子复合体的形成

目的探讨莪术提取物榄香烯抑制胶质瘤细胞体外增殖的机制。方法采用细胞计数、免疫共沉淀、Western印迹等方法,分别检测不同浓度、不同作用时间榄香烯对C6胶质瘤细胞的增殖影响、对C6细胞中与Raf-1结合形成分子复合体的Hsp90水平的影响、对C6细胞Hsp90、Raf-1、ERK蛋白质表达的影响。结果榄香烯对大鼠C6胶质瘤细胞具有明显的抑制增殖作用,该增殖抑制效应呈剂量、时间依赖性。榄香烯可明显下调C6细胞中与Raf-1结合的Hsp90水平及C6细胞的磷酸化Raf-1、ERK表达,但不影响总Hsp90的表达水平。结论榄香烯能有效抑制胶质瘤细胞的体外增殖,破坏Hsp90的分子伴侣功能,阻碍Hsp90/Raf-1复合体的形成,使Raf-1不能被活化,最终下调胶质瘤细胞赖以生存的Raf/MEK/ERK通路,这可能是榄香烯抑制C6细胞增殖的机制。

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠Raf-1mRNA和蛋白表达的影响

目的研究不同剂量镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)心血管组织Raf-1蛋白和Raf-1 mRNA表达的影响。方法将50只24周龄SHR随机分为模型对照组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组、阳性对照组,每组10只,同源雄性魏-凯二氏大鼠(WKY)10只作为正常对照组。灌胃给药5周后,Western Blot法测定心血管组织Raf-1蛋白表达,实时聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定大鼠Raf-1 mRNA基因表达。结果与模型对照组比较,其他各组大鼠Raf-1蛋白和Raf-1 mRNA表达均明显升高(F=1 139.282,sig=0.000,P<0.01)。结论镇肝熄风汤可促进SHR心血管细胞Raf-1蛋白和Raf-1 mRNA表达,刺激细胞增殖和分化,抑制细胞凋亡。

Raf-1蛋白预测鼻咽癌放疗敏感性的价值

目的:探讨鼻咽癌组织Raf-1的表达与鼻咽癌放疗敏感性的关系,评估其预测鼻咽癌放疗敏感性的价值。方法:纳入60例放射抵抗(放射抵抗组)和同期配对的60例放射敏感(放射敏感组)的鼻咽癌患者,应用免疫组化检测两组在接受放疗前Raf-1蛋白的表达情况,分析Raf-1表达与放疗效应的相互关系。结果:放射抵抗组与放射敏感组鼻咽癌组织Raf-1蛋白表达的阳性率(82%vs22%)及强度之间差异均有统计学意义(均P<0.01)。Raf-1蛋白的阳性表达率和强度分别与鼻咽癌放疗抵抗正相关(r分别为0.600、0.447,均P<0.01)。把Raf-1阳性表达作为预测鼻咽癌放疗是否抵抗的一种指标,敏感性为82%,特异性为78%,准确率为80%,阳性预测值为79%,阴性预测值为81%。结论:Raf-1蛋白的阳性表达率和表达强度均与鼻咽癌放疗抵抗呈正相关,可作为初筛鼻咽癌患者放疗内在敏感性的一种分子标记物,治疗前可根据鼻咽癌组织Raf-1的表达情况,实行个体化治疗。

基于Ras/Raf-1/ERK信号转导通路调控VEGF的表达探讨活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜的影响

目的:观察活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜血管形态的影响并探讨其可能的作用机制。方法:一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ,65 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,造模后随机分为模型组和活血解毒方组。另设正常对照组。药物干预12周后,应用视网膜消化铺片法观察视网膜血管形态;应用Western blot法检测视网膜VEGF蛋白的表达,应用Real-Time PCR法检测视网膜VEGF、Ras、Raf-1与ERK mRNA的表达。结果:模型组视网膜毛细血管面积密度及内皮细胞/周细胞比例与较正常组升高(P<0.001),VEGF蛋白及VEGF、Ras、ERKmRNA表达升高(P<0.05),Raf-1mRNA表达升高(P>0.05)。与模型组比较,活血解毒方组视网膜毛细血管面积密度和内皮细胞/周细胞比例降低(P<0.01和P<0.001),VEGF蛋白与VEGF、Ras、Raf-1、ERK mRNA表达下降(P<0.05)。结论:活血解毒方能明显抑制视网膜毛细血管和内皮细胞的增生,其机制可能是通过干预Ras/Raf-1/ERK信号转导通路,下调VEGF在视网膜中的表达,抑制血管新生,从而改善DR。

人结肠癌组织中Raf-1的表达及其临床意义

目的:研究Raf-1在人结肠癌组织中的表达与肿瘤血管生成的关系,并探讨它们的临床意义。方法:应用组织芯片技术和免疫组化法检测来自西京医院病理科2005-2006年间的87例结肠癌病例癌区、癌旁区及切缘区组织标本中Raf-1的表达,应用CD34标记的免疫组化法检测微血管密度(microvessel density,MVD);并分析Raf-1表达和MVD与结肠癌体积、转移、分化等病理特征之间的相关性。结果:Raf-1在癌组织、癌旁组织、切缘区组织的阳性率分别为86.47%、37.34%和11.03%,3者比较有显著性差异(P<0.01)。癌组织、癌旁组织、切缘区组织中MVD值分别为(61.35±11.60)、(28.34±6.70)和(8.26±3.70),3者有显著性差异(P<0.01)。Raf-1表达和MVD与肿瘤大小、转移与否密切相关。结论:Raf-1是调控人结肠癌组织血管生成的关键分子,在癌组织中Raf-1的表达与MVD值成正相关,两者与临床上肿瘤的大小、转移与否密切相关。

大豆异黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马PKG和Raf-1的影响

目的:通过观察大豆异黄酮(SIF)对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织蛋白激酶G(PKG)和Raf-1蛋白的影响,探讨大豆异黄酮治疗阿尔茨海默病作用机制。方法:采用β-淀粉样蛋白(Aβ)双侧海马注射建立AD大鼠模型,分组后给予不同剂量大豆异黄酮,Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力的变化,ELISA法测定大鼠海马组织PKG含量,免疫组化SP法观察大鼠海马组织Raf-1的表达。结果:大豆异黄酮可改善AD大鼠的学习记忆能力(P<0.05),显著降低AD大鼠海马组织PKG的含量(P<0.05),显著降低AD大鼠海马组织Raf-1的表达(P<0.05)。结论:大豆异黄酮可能通过降低AD大鼠海马PKG的含量和Raf-1的表达起到治疗AD的作用。

C-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸联合对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

背景与目的:针对c-erbB-2与c-raf-1单基因的反义寡脱氧核苷酸(antisenseoligodexynucleotide,ASODN)治疗肿瘤的研究报道很多,这些研究往往局限于单个基因或细胞水平,从肿瘤发生的多基因学说上讲是不恰当的。本研究旨在探讨c-erbB-2与c-raf-1基因联合ASODN对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法:在BALB/c裸鼠上建立卵巢上皮癌模型,然后随机分成阴性对照组和6个实验组(分别为脂质体c-erbB-2SODN组、脂质体c-raf-1SODN组、脂质体c-erbB-2ASODN组、脂质体c-raf-1ASODN组、全剂量联合反义给药组、半剂量联合反义给药组)。检测裸鼠体重及肿瘤体积变化,计算抑瘤率及肿瘤缩小率。结果:给药后,全剂量联合反义给药组与半剂量联合反义给药组的肿瘤体积抑瘤率分别为72.5%和78.4%,肿瘤重量抑瘤率分别为70.7%和75.3%,肿瘤缩小率分别为29.7%和41.6%。在给药后,各组裸鼠体重变化无明显统计学差别。结论:C-erbB-2与c-raf-1基因联合ASODN在体内能明显地抑制肿瘤生长。

PTEN基因调控Raf-1磷酸化对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响

目的探讨PTEN基因表达通过调控Raf-1磷酸化对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响。方法FTS和MK22062HCl分别抑制Ras和AKT,PTEN基因过表达和干扰后检测Raf-1磷酸化水平并观察前列腺癌PC3细胞光镜下形态变化、MTT检测细胞活力、流式细胞仪测定细胞凋亡率以及Western blot检测Bax、Bcl-2、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12和Caspase-3表达水平,分析PTEN基因的不同表达和Raf-1磷酸化水平与PC3细胞凋亡的关系。结果与对照组相比,PTEN基因过表达后,Raf-1磷酸化水平降低,PC3细胞变形、体积缩小、细胞核固缩,细胞活力降低,细胞凋亡率增加,凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12、Caspase-3以及促凋亡蛋白Bax表达量增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低(P<0.01);PTEN基因干扰表达减低后,Raf-1磷酸化水平增强,PC3细胞形态和数目变化无显著差异,细胞活力和细胞凋亡率变化无显著差异,凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12、Caspase-3以及促凋亡蛋白Bax表达量降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量增加(P<0.01)。结论PTEN基因可负调控Raf-1磷酸化水平;PTEN基因过表达可促进前列腺癌PC3细胞凋亡,PTEN基因干扰表达减低则抑制PC3细胞凋亡。

PKC／Raf-1／NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠单核细胞表达TNF-α中的作用

目的:研究PKC/Raf-1/NF-κB信号通路在低氧诱导大鼠外周血单核细胞(PBMCs)肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达中的作用,探讨低氧与全身炎症反应综合征(SIRS)的关系,为进一步研究老年多器官功能障碍综合征(MODSE)的肺启动机制奠定基础。方法:采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞,分为chelerythrine+低氧组、forskolin+低氧组和单纯低氧组。Chelerythrine+低氧组和forskolin+低氧组细胞在低氧前分别予10μmol/L chelerythrine和50μmol/L forskolin预处理。然后各组均于低氧条件下(3%O2,5%CO2,92%N2)培养0、1、3、6、9、12、24h后,收集细胞及培养液上清,分别采用PKC、Raf活性检测试剂盒、电泳迁移分析法(EMSA)、逆转录PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测PKC、Raf-1、NF-κB活性及TNF-α表达量。结果:低氧1-9h,PKC、Raf-1活性、NF-κB结合活性及TNF-α表达量显著高于正常对照组(P<0.01)。低氧后1-24h,PKC、Raf-1活性、NF-κB结合活性与TNF-α mRNA和蛋白表达水平间呈显著正相关(P<0.01,P<0.05)。10μmol/L chelerythrine可显著抑制低氧诱导的PKC、Raf-1、NF-κB活性升高和TNF-α表达。50μmol/L forskolin可显著抑制低氧诱导的Raf-1、NF-κB活性升高及TNF-α表达。结论:低氧可显著增强大鼠外周血单核细胞的PKC、Raf-1活性及NF-κB结合活性,并可诱导其产生大量的促炎症因子TNF-α,这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关。

电针足阳明经(穴)促大鼠胃黏膜损伤修复过程中P-RAF-1表达的影响

目的通过观察电针足阳明经(穴)在促大鼠损伤胃黏膜修复过程中P-RAF-1表达的影响,探讨电针足阳明经(穴)对胃黏膜损伤修复效应的作用机制。方法选取40只健康大鼠随机分为4组,每组10只,空白组,模型组,针刺治疗组,针刺对照组;采用GUTH法检测溃疡指数,免疫印迹法检测P-RAF-1的表达。结果与空白组比较,模型组胃黏膜损伤指数值明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01);针刺治疗组胃黏膜损伤指数值显著低于模型组和针刺对照组差异有统计学意义(P<0.01),而与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05),针刺治疗组能RAF-1磷酸化水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论电针足三里、梁门、四白穴可减轻无水乙醇灌胃造成的胃黏膜损伤,对胃黏膜具有修复作用,其促进胃黏膜修复的过程中与RAF-1蛋白磷酸化有关,并存在穴位特异性。提示电针足阳明经(穴)促胃黏膜损伤修复可能与RAF-1蛋白磷酸化有关。

PTPIP51、p-Raf-1及ERK1/2在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的探讨PTPIP51和p-Raf-1及ERK1/2在口腔鳞状细胞癌中的表达及对口腔鳞癌侵袭、转移的影响。方法收集32例口腔鳞状细胞癌及其配对癌旁正常口腔黏膜组织。用免疫荧光组织化学染色激光共聚焦显微镜检测PTPIP51与p-Raf-1蛋白在组织切片内表达及定位;PBS冲洗后对标本进行苏木精-伊红染色,普通光镜对比观察组织结构及细胞形态,同时用免疫组织化学方法(SP法)检测PTPIP51蛋白在组织和细胞内的定位;Rea-ltime PCR检测PT-PIP51与ERK1/2基因mRNA在肿瘤组织及癌旁正常口腔黏膜组织的表达情况。结果 PTPIP51与p-Raf-1蛋白在癌巢周围增殖旺盛的肿瘤细胞、间质免疫细胞及部分脉管壁内皮细胞表达阳性且2种蛋白在细胞中共定位表达。同时发现PTPIP51与ERK1/2基因mRNA在口腔鳞癌组织表达高于配对癌旁正常口腔黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05);ERK1/2及PTPIP51基因mRNA表达呈正相关(r=0.641,P<0.05);两者的表达水平与患者的性别、年龄,病理分级无关,与肿瘤的TNM分级及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 PTPIP51与Raf-1可能通过Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与口腔鳞状细胞癌的发生、发展过程,且2种蛋白与肿瘤的侵袭、转移有密切关系。

缺血性脑中风钙依赖性激活Raf-1/ERK的级联机制研究

目的:研究Raf-1磷酸化与脑缺血诱导的ERK钙依赖性激活的联系。方法:采用4动脉阻断法诱导大鼠前脑缺血,用免疫印迹技术观察缺血/再灌后海马组织Raf-1和ERK磷酸化的变化,以及钙通道抑制剂氯胺酮对它们活性的影响。结果:缺血/再灌15 min,海马内ERK活性显著升高,而Raf-1的Ser259而不是Tyr340和Ser338位点磷酸化显著降低;氯胺酮能阻断缺血后Raf-1(Ser259)的去磷酸化,继而抑制Raf-1/ERK活性。结论:脑缺血通过钙依赖性地诱导Raf-1Ser259位点的去磷酸化,暴露其催化结构域,从而导致ERK级联的活性上调。

益气活血汤对急性心肌梗死模型大鼠Ras、ERKl、p-ERKl和C-Raf-1表达的影响

目的探讨益气活血汤对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠缺血心肌Ras、ERKl(extracellularsignal regulated kinasel)、p-ERKl(phosphor-ERKl)和C-Raf-1蛋白表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、倍他乐克组和益气活血汤大、小剂量组(下称大、小剂量组)。采用大鼠冠状动脉左前降支结扎构造急性心肌梗死(AMI)的心肌缺血模型。通过免疫组化法检测缺血心肌的Ras、ERKl、p-ERKl及C-Raf-1的蛋白表达。结果模型组Ras、ERKl、p-ERKl及CRaf-1的蛋白表达均高于空白组、假手术组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Ras、C-Raf-1蛋白表达:小剂量组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);大剂量组及倍他乐克组与模型组比较均有增高(P<0.05或P<0.01)。ERK1、p-ERK1蛋白表达:大、小剂量及倍他乐克组与模型组比较均有增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。四个因子在大剂量组的表达均较小剂量组增多更明显(P<0.05)。结论益气活血汤可能是通过提高Ras通路相关蛋白表达来促进缺血后心肌的血管生成,抑制心肌缺血的损伤。

结肠癌裸鼠移植瘤中Raf-1的表达与肿瘤血管生成的相关性

目的:研究Raf-1在结肠癌裸鼠移植瘤中的表达与肿瘤血管生成的关系。方法:通过Western blot方法检测不同结肠癌细胞系(HT-29、SW480、LS174T)中Raf-1的表达,然后将表达差异较大的2株细胞(HT-29、LS174T)分别接种到BALB/cnu/nu小鼠体内,分别观察肿瘤的生长速度、瘤重变化等情况,最后通过免疫组化的方法分别检测瘤组织中Raf-1的表达及肿瘤微血管密度(MVD)的情况,分析二者的相关性。结果:在裸鼠移植瘤模型中,LS174T组移植瘤生长速度及瘤重大于HT-29组;免疫组化结果显示Raf-1在LS174T组中的强阳性率为50%,在HT-29组中为10%,两组之间的差异有统计学意义(P<0.01);在LS174T组中MVD平均值为28.32±5.2,HT-29组MVD平均值为19.23±4.7,两组之间MVD值差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Raf-1是调控肿瘤组织血管生成的关键分子,在结肠癌裸鼠移植瘤中Raf-1的表达与MVD值成正相关。

Raf-1蛋白激酶、磷酸化丝裂原细胞外激酶1和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2在肝癌中的表达与预后分析

目的探讨Raf-1蛋白激酶(Raf-1)、磷酸化丝裂原细胞外激酶1(pMEK1)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)在肝癌中的表达与肝癌预后的关系。方法应用免疫组织化学PV6000法检测原发性肝癌组织中Raf-1、pMEK1、pERK1/2蛋白的表达差异性与肝癌预后之间的关系。结果 Raf-1、pMEK1和pERK1/2在肝癌中的过表达率分别为38.3%、46.7%和38.3%,三者过表达率呈正相关(P<0.05)。Raf-1、pMEK1和pERK1/2过表达与性别、年龄、甲胎蛋白、乙肝表面抗原表达状态、肿瘤分化程度、TNM分期、是否存在癌栓、肿瘤大小等各临床病理因素无关(P>0.05)。单因素及多因素分析均显示Raf-1过表达与肝癌预后相关(P<0.05)。结论 Raf-1的过表达是肝癌预后不良的显著标记,可能为肝癌的靶向治疗提供理论依据。

白血病细胞系中B-Raf与Raf-1的表达及活性

目的研究白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中的 B- Raf和 Raf- 1表达水平及激酶活性。方法利用 Western印迹法检测 B- Raf和 Raf- 1表达水平，利用免疫沉淀及 Western印迹法检测 Raf- 1及 B- Raf的激酶活性。结果 Raf- 1在白血病细胞及正常人外周血淋巴细胞中均有表达 ,表达水平基本相似，其激酶活性较低； B- Raf仅在白血病细胞中表达，且在 Jurkat和 K562细胞中的表达水平较高，其激酶活性也较高。结论在白血病细胞中， B- Raf的高表达及活化可能是白血病发病的机制之一。

Raf-1、MEK-2、ERK-1在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨Raf-1、MEK-2、ERK-1在胃癌组织中的表达形式及其意义,并分析此种信号途径与胃癌的临床病理特征之间是否存在联系,并为胃癌抗EGFR靶向治疗的分子标志物筛选提供依据。方法通过免疫组化中SP法检测60例胃癌患者标本胃癌组织和正常的胃组织中Raf-1、MEK-2、ERK-1的表达水平并进行比对。结果经统计60例胃癌组织当中Raf-1、MEK-2、ERK-1的表达率分别为88.33%(53/60)、85.00%(51/60)、78.33%(47/60)。而正常的胃组织当中Raf-1、MEK-2、ERK-1均未见到阳性表达。被胃癌细胞转移的淋巴结组织中Raf-1、MEK-2、ERK-1的阳性表达率更为显著,分别高达95.12%(39/41),90.24%(37/41),87.80%(36/41)。未见癌细胞转移的淋巴结中Raf-1、MEK-2、ERK-1均无表达。实验证实Raf-1、MEK-2、ERK-1的表达水平与胃癌的临床特征中的肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期有明显相关性(P<0.05)。结论 (1)人体胃癌组织当中存在Raf/MEK/ERK信号通路的激活;(2)人体胃癌组织中Raf/MEK/ERK信号通路的活化程度与胃癌组织的临床病理特征相关,此信号通路活化程度越高的胃癌组织,其分化的程度越低,TNM分期越高。三者联合检测可为研究胃癌的生物学行为乃至对靶向治疗胃癌提供十分重要的参考依据及指标。

Raf-1基因重组腺病毒siRNA载体构建及其对大鼠心肌细胞肥大的影响

目的构建特异性抑制大鼠Raf-1基因的重组腺病毒载体,并将其体外转导大鼠心肌细胞中进行功能鉴定。方法合成针对大鼠Raf-1的靶序列及阴性对照序列,经退火形成的DNA双链定向克隆到穿梭质粒p Ad Track CMV中获得p Ad Track-siRaf-1质粒,Pme I线性化后在BJ5183细菌中与p Ad Easy-1骨架质粒进行同源重组获得p Ad-siRaf-1质粒,后转染HEK293细胞,包装获得p Ad-siRaf-1腺病毒颗粒,继而感染原代培养的心肌细胞,通过Western blot方法检测siRNA对Raf-1、NF-κB基因的抑制效率,液体闪烁计数仪测定3H-亮氨酸([3H]-leu)掺入率,用HJ2000图像分析系统测定细胞表面积。结果重组腺病毒载体经酶切、鉴定正确,制备的病毒感染效率高,携带Raf-1的病毒颗粒能够在蛋白水平有效抑制Ang II诱导心肌细胞Raf-1的表达、细胞表面积及[3H]-leu的增加并下调Raf-1、NF-κB表达。结论成功构建了p Ad-siRaf-1重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,转染心肌细胞后能有效抑制Raf-1、NF-κB表达,抑制Ang II诱导的心肌细胞肥大。

Raf-1蛋白激酶在细胞信号转导研究中的新进展

重点讨论Ｒａｆ１蛋白激酶的特征、激活方式及其与其他蛋白质相互作用等方面的研究进展．Ｒａｆ１蛋白激酶是酪氨酸激酶相关信号转导途径中的重要信号分子之一，可直接下传与Ｒａｓ蛋白相关的细胞增殖信号．近年来发现，Ｒａｆ１蛋白激酶还可与其他信号分子作用或相互调节，参与多种细胞生物学过程的信号转导与调控．