RAISE技术改组转录因子RpoD调控大肠杆菌的低pH值耐受性

在生物炼制生产过程中,微生物由于自身对酸的抗逆性差,其代谢生产过程会受到严重的影响。为解决该问题,本实验采用PCR方法从E.coli DH5α中扩增分离得到分子量为2 075bp的RpoD完整序列(包含天然启动子区域和终止子区域),并利用RAISE方法,通过突变全局调控因子RpoD来提高大肠杆菌的耐酸能力。通过对104随机突变文库的多轮筛选,获得最佳突变菌株MutantⅦ。在pH值为3.0、3.5、4.0、5.0、6.0和7.0的条件下,对MutantⅦ和对照菌株的生长情况进行比较分析,结果表明,在酸性条件下MutantⅦ较对照菌株具有明显的生长优势,尤其在pH值为3.0时,相比对照菌株0.015h-1的生长速率,MutantⅦ的生长速率达到0.022h-1,具有较高应用价值。