RAP1B对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞生物学行为的影响研究

目的探讨RAP1B对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-1ike synoviocyte,FLS)增殖、迁移以及炎症因子分泌能力的影响。方法通过构建RAP1B过表达及干扰表达的慢病毒载体,转染至人RA成纤维样滑膜细胞(MH7A),分别采用CCK8法、划痕实验、Transwell-迁移实验及ELISA法,对MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力进行检测。结果RAP1B表达上调后,MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力均明显增强(均P<0.01);RAP1B表达下调后,MH7A增殖、迁移及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8)分泌能力均明显减弱(均P<0.05)。结论RAP1B具有促进RA-FLS增殖、迁移及炎症因子分泌的能力。

小鼠上丘Rap1B表达的发育性变化及关键期单眼形觉剥夺对其的影响

目的探讨小鼠上丘Rap1B表达的发育性变化以及视觉发育关键期单眼形觉剥夺(MD)对其表达的影响。方法SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠45只为实验对象。实验一:小鼠上丘Rap1B表达的发育性变化。该实验小鼠分为3组,即关键期前组[生后18 d(P18)小鼠]、关键期组(P32小鼠)和成年组(P60小鼠),采用qPCR和Western blot检测各组小鼠左右两侧上丘中Rap1B基因及蛋白的表达量。实验二:MD对上丘Rap1B基因及蛋白表达的影响。该实验小鼠分为2组:右眼MD组(小鼠P28时右眼建立MD模型,至P32时行检测)与NC组(正常对照组,P32小鼠),采用qPCR和Western blot检测各组小鼠左右两侧上丘中Rap1B基因及蛋白的表达。结果关键期前组小鼠左右两侧上丘中Rap1B基因和蛋白表达量均较低;与关键期前组相比,关键期组小鼠Rap1B基因及蛋白表达量均显著增高(均为P<0.05);与关键期组相比,成年组小鼠Rap1B基因和蛋白表达量均显著降低(均为P<0.05)。与NC组相比,右眼MD组小鼠左侧上丘Rap1B基因和蛋白表达量均显著增高(均为P<0.05),而右侧上丘Rap1B基因和蛋白表达量均显著降低(均为P<0.05)。结论小鼠上丘中Rap1B基因表达的发育性变化趋势与视觉发育关键期相一致,Rap1B可能参与了关键期MD对上丘发育的调控。

缺氧微环境中HIP68/RAP1B信号通路对乳腺癌侵袭转移的作用

目的探讨HIP68/RAP1B信号通路对乳腺癌侵袭转移的作用机制。方法选取西安交通大学第一附属医院2012—2013年乳腺癌组织样本共73例,通过免疫组化标本及临床资料分析HIP68/RAP1B的表达情况及其与病理特征的关系。将体外培养的乳腺癌细胞系(MCF-7和MDA-MB-231)构建成缺氧乳腺癌细胞,分别测定缺氧乳腺癌细胞系(MCF-7和MDA-MB-231)及正常乳腺上皮细胞系SK-BR-3中HIP68/RAP1B蛋白表达情况。构建高/低表达HIP68的乳腺癌细胞,观察其对RAP1B蛋白的影响及对乳腺癌细胞生物学行为的影响;沉默/过表达乳腺癌细胞RAP1B,观察其对HIP68蛋白的影响及对细胞生物学行为的影响;免疫共沉淀检测HIP68/RAP1B的结合位点。结果HIP68和RAP1B蛋白在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.05);HIP68表达与TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05),RAP1B的表达与TNM分期、淋巴结转移、ER、RR状态相关(P<0.05);HIP68表达与RAP1B表达呈正相关(r=0.427,P<0.05)。HIP68/RAP1B在缺氧乳腺癌系细胞中高表达;RAP1B蛋白的表达与HIP68表达呈正相关并且高表达HIP68/RAP1B促进细胞侵袭转移,低表达HIP68/RAP1B抑制细胞侵袭转移;HIP68蛋白不因RAP1B蛋白的高/低表达而改变,但是高表达RAP1B促进乳腺癌细胞增殖及侵袭转移;免疫共沉淀结果显示RAP1B可能为HIP 68基因的下游。结论HIP68/RAP1B信号通路在缺氧乳腺癌组织中高表达并促进乳腺癌细胞迁移和侵袭。

Rap1b蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Rap1b蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及与其临床病理参数的关系。方法选取子宫内膜癌组织标本82例(癌组织)。同时期选取子宫脱垂等手术过程中获取的正常子宫内膜组织标本45例(正常组织)。观察2组Rap1b蛋白阳性率、Rap1b蛋白表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系、患者预后与Rap1b蛋白表达相关性。结果癌组织中Rap1b蛋白阳性率(70.73%)显著高于正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。不同病理分级、不同FIGO分期、有无淋巴结转移的子宫内膜癌患者Rap1b蛋白表达阳性率比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。经过3年随访后,82例子宫内膜癌患者中死亡8例,存活率为90.24%(74/82),其中8例死亡患者中Rap1b蛋白阳性有6例。23例复发,复发率为20.73%(17/82)。Rap1b阳性组3年累积存活率[87.93%(51/58)]低于Rap1b阴性组[95.83%(23/24)](χ^(2)=1.204,P=0.273)。结论Rap1b蛋白在子宫内膜癌组织内呈现高表达,主要与病理分级、FIGO分期、淋巴结转移存在关系,且与患者预后存在正相关,其可作为子宫内膜癌患者病情评估检测指标。

RAP1B与肿瘤及胃癌关系的研究进展

癌症是目前全世界人口死亡的主要原因之一,而胃癌是一种非常常见的消化系统恶性肿瘤,居全球癌症死因第三位[1]。胃癌是我国目前发病率第二高的恶性肿瘤,发病率远高于欧美等其他国家,仅在2013年全球新增患者95.2万例,其中47%发生在我国[2]。2008年国际癌症研究机构(IARC)数据指出,发展中国家胃癌患者较发达国家明显增多;发展中国家男性患者466 900例较发达国家的 173 700 例显著增多,而发展中国家和发达国家女性患者数分别为247 000例和102 000例[3]。

靶向Rap1b基因shRNA慢病毒载体的构建及其对食管鳞癌细胞Rap1b基因表达的沉默

目的:设计以Rap1b基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒表达载体并转染食管鳞癌细胞,观察其在食管鳞癌细胞中的表达。方法:应用重组DNA技术,将设计好的4条基因特异性shRNA序列插至慢病毒表达载体pGLV3-GFP中,构建pGLV3-GFP-Rap1b-shRNA1/2/3/4。并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染食管鳞癌细胞株Eca109后Rap1b基因的表达情况。结果:测序证实慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×109TU/ml,pGLV3-GFP-Rap1b-shRNA3/4转染后72h和96h均可显著抑制Rap1b基因mRNA及蛋白的表达。结论:成功构建Rap1b基因的shRNA慢病毒载体,所介导的RNAi能有效抑制食管鳞癌细胞Eca109中Rap1b基因的表达。

Rap1b在子宫内膜癌组织中的表达及介导自噬调控人子宫内膜癌细胞化疗敏感性的研究

目的检测子宫内膜癌(EC)组织中Ras相关蛋白1b(Rap1b)表达,观察其对EC细胞Ishikawa化疗敏感性的影响及机制。方法选取2016年9月至2019年1月江门市中心医院诊治的60例EC患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EC组织与癌旁组织中Rap1b mRNA表达,免疫组化染色检测组织中Rap1b与自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达。建立Ishikawa/DDP耐药细胞株,脂质体介导细胞转染法构建Rap1b低表达的Ishikawa/DDP细胞,以转染NC-siRNA的Ishikawa/DDP细胞作为阴性转染组,未转染的Ishikawa/DDP细胞作为对照组;qRT-PCR和Western blot检测细胞中Rap1b的表达;CCK-8实验检测DDP处理后细胞存活率,并计算IC50值;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光染色检测LC3表达;Western blot检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin1及P62蛋白表达。结果与癌旁组织比较,EC组织中Rap1b mRNA与蛋白表达均升高,Beclin1、LC3表达也升高(P<0.05);与对照组和NC-siRNA组相比,Rap1bsiRNA组细胞中Rap1b mRNA和蛋白相对表达量均下降,25、50、100μmol/L DDP处理后细胞存活率下降,IC50值降低,细胞凋亡率升高,LC3荧光染色强度减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比率下降,Beclin1蛋白表达水平下降而P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论Rap1b在EC组织中表达水平较高,降低Rap1b表达可提高Ishikawa细胞的化疗敏感性,其机制可能与抑制自噬相关。

Spz1和Rap1b在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨生精亮氨酸拉链蛋白1(spermatogenic leucine zipper 1,Spz1)和Ras相关蛋白1b(Ras-related protein 1b,Rap1b)在人食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达变化,分析两者的相关性及其与病理特征的关系。方法收集病理资料详实的60例食管鳞癌组织和30例癌旁组织,采用免疫组化SP法检测Spz1和Rap1b的表达,分析其与临床病理特征的关系以及两者表达的相关性。结果 Spz1和Rap1b在ESCC组织中的表达的强阳性率分别为83.3%,80.0%,明显高于癌旁组织(33.3%,40%,P<0.05);且在分化程度较低以及有淋巴转移患者中,Spz1和Rap1b均呈现显著高表达(P<0.05);而在不同年龄、不同性别、是否吸烟、是否饮酒、不同病变长度以及不同病变位置之间差异无统计学意义(P>0.05);Spz1和Rap1b表达之间具有正相关(P<0.05,r=0.559)。结论 Spz1和Rap1b在ESCC中均高表达,并与分化程度和淋巴转移密切有关,提示可能在ESCC发展及转移中发挥重要作用。

Rap1b在斑马鱼神经嵴中表达情况的初探

目的:研究Rap1b与斑马鱼颅面部发育的关系。方法:利用模式动物斑马鱼,取由神经嵴发育而来的颅面部组织做实时定量RT-PCR,观察不同时期Rap1b的mRNA表达情况。再通过Rap1b整体原位杂交观察其在斑马鱼发育过程中时间和空间的表达情况,并与神经嵴特异性标志基因Crestin原位杂交表达情况在时间和空间上对比。结果:实时定量RT-PCR结果显示,Rap1b在神经嵴形成、迁移、分化过程中在颅面部均有表达。原位杂交结果显示,Rap1b与Crestin在斑马鱼中的表达在时间和空间上有重叠。结论:Rap1b可能通过调节神经嵴发育参与颅面部发育。

Rap1b在肿瘤中的功能及意义

Rap1是一种小的Ras样GTP酶,在调控多种信号通路如增殖、分化、形态形成以及凋亡中起分子开关的作用。Rap1共有两种异构体,即Rap1a和Rap1b。Rap1b缺失可以导致血管生成、内皮细胞迁移及增殖功能受损以及MAPK信号通路受阻。无论是血管发生、内皮迁移以及MAPK通路都在肿瘤的发生发展中发挥重要作用,因此,Rap1b在肿瘤中意义重大。本文就国内外对Rap1b在肿瘤中的作用及意义的研究进展做一综述。

hoxb4转基因斑马鱼造血发育中rap1b基因的表达

目的为了发现在早期造血发育中关键的调控因子,利用hoxb4转基因斑马鱼研究rap1b基因的表达变化情况,以期明确hoxb4与rap1b在早期造血发育中的关系。方法选取过表达hoxb4的斑马鱼系为研究对象,分为3组:实验组(表达hoxb4-EGFP的斑马鱼),实验对照组(表达EGFP的斑马鱼),空白对照组(野生型斑马鱼)。通过流式分选技术将实验对照组和实验组18hpf(斑马鱼胚胎受精发育18 h)、24、30、36、48hpf胚胎中带有绿色荧光(enhanced green fluorescent protein,EGFP)信号的细胞分选出来,利用实时荧光定量PCR检测分选出的细胞中的rap1b基因的表达变化;然后收集野生型斑马鱼多时相胚胎,制备rap1b基因的反义m RNA探针,通过胚胎原位杂交观察探针在3组斑马鱼胚胎18、24、30、36、48hpf杂交信号表达部位。结果 q RT-PCR结果显示实验组30、36、48hpf的斑马鱼胚胎的rap1b基因的表达明显增强(P<0.05);制备了rap1b基因的反义m RNA探针,胚胎整体原位杂交结果显示:rap1b基因在3组斑马鱼胚胎18~48hpf之间神经发育和造血发育部位都有表达。结论在过表达hoxb4转基因斑马鱼中rap1b基因表达有明显的升高趋势,提示rap1b基因与hoxb4基因可能共同参与调节早期造血发育过程。

Rap1b对鼠前成骨细胞Mc3T3-E1成骨分化早期的影响

目的探讨Rap1b对鼠前成骨细胞Mc3T3-E1成骨分化早期的影响。方法利用成骨诱导液诱导Mc3T3-E1成骨向分化,利用实时定量PCR分别检测诱导后0、3、7 d的Rap1b mRNA的相对表达量。同时向实验组细胞分别转染Rap1b-mus-462和Rap1b-mus-703,4 d后进行ALP染色,同时测定Rap1b的mRNA相对表达量,并对转染后细胞中成骨指标ALP、Runx2和Osterix 0、3、7 d时的mRNA相对表达量进行测定。再利用划痕实验观察siRNA转染对Mc3T3-E1细胞迁移能力的影响。结果 Real-time PCR结果显示在成骨诱导早期的不同时间点,Rap1b的表达量随诱导时间的增加而增加。当Rap1b的表达降低时,各成骨指标ALP、Runx2和Osterix的表达量也随之降低,Mc3T3-E1细胞迁移能力也有所减弱。结论 Rap1b对Mc3T3-E1细胞成骨分化早期以及细胞迁移有一定的促进作用。

Rap1b在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨Rap1b在人非小细胞肺癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化法检测65例非小细胞肺癌组织和52例癌旁组织中Rap1b的表达,分析其与临床病理特征之间的关系。结果:Rap1b在65例非小细胞肺癌组织中的表达率为72.3%,明显高于癌旁组织23.1%(P<0.05)。与肿瘤分化程度明显相关(P<0.05)。结论:Rap1b在非小细胞肺癌中高表达,提示其可能发挥癌基因的功能。

冷应激对大鼠肝脏组织中Rap1b表达的影响

目的探讨冷应激对大鼠肝脏组织中Rap1b表达的影响。方法将20只Wistar大鼠随机分为常温饲养组和冷应激组,每组10只,正常饲养温度为(24.0±0.1)℃,冷应激温度为(4.0±0.1)℃。经12 h冷刺激后,采集大鼠肝脏组织,提取总RNA和总蛋白,通过实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测Rap1b基因m RNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果冷应激组大鼠肝脏组织中Rap1b基因m RNA的转录水平和蛋白表达水平均显著高于常温饲养组(P<0.01)。结论冷应激可显著提高大鼠肝脏组织中Rap1b基因m RNA的转录水平和蛋白表达水平。

益气化瘀解毒方对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺损伤及中性粒细胞粘附分子的作用研究

目的 观察益气化瘀解毒方及拆方对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)模型大鼠的保护作用及中性粒细胞粘附分子的影响。方法 将36只SD大鼠随机分为对照组、模型组、益气清热组、益气化瘀组、益气逐饮组及中药全方组,每组6只。益气清热组、益气化瘀组、益气逐饮组、中药全方组给予对应中药浸膏12.2 g/(kg·d)连续灌胃7天,其余组均以等量蒸馏水灌胃。尾静脉注射LPS建立ARDS大鼠模型,造模后16小时麻醉处死各组动物进行取材。苏木精—伊红染色观察肺组织病理变化,采用酶联免疫吸附法法检测肺匀浆及肺泡灌洗液中Rap1b、淋巴细胞功能相关抗原1(leukocyte function-associated antigen-1,LFA-1)、巨噬细胞表面抗原-1(macrophage surface antigen-1,MAC-1)的表达水平,蛋白免疫印迹法检测肺组织Rap1b的表达水平。结果 与对照组相比,模型组大鼠Rap1b、LFA-1及MAC-1蛋白表达均有所上调。与模型组相比,益气化瘀解毒方及拆方可明显减轻ARDS模型大鼠肺损伤,显著下调肺泡灌洗液中Rap1b、MAC-1及肺匀浆中LFA-1蛋白表达。结论 益气化瘀解毒方对LPS诱导的ARDS模型大鼠具有保护作用,可能与其减少Rap1b、LFA-1和MAC-1蛋白表达水平,降低中性粒细胞粘附活性有关。

miR-28调控非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用机制

目的探讨微小RNA-28(miR-28)对非小细胞肺癌细胞株细胞A549和H1299的影响及其作用机制。方法通过转染miR-28 mimics过表达miR-28,转染miR-28 inhibitor抑制miR-28的表达,其中miR-28 NC作为对照组。通过CCK-8实验、克隆形成试验和细胞周期实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;通过划痕实验、Transwell迁移及Boyden小室侵袭实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响;通过生物信息学软件分析发现Ras相关蛋白1b(RAP1B)可能是miR-28的潜在靶基因并利用荧光素酶报告基因实验进行验证;通过RT-qPCR和Western blot方法检测过表达和抑制miR-28表达后A549和H1299细胞RAP1B的表达。结果与miR-28 NC比较,miR-28 mimics组A549和H1299细胞的增殖速度明显减慢,迁移及侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-28 inhibitor组A549和H1299细胞的增殖速度增快,迁移及侵袭能力明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05);在非小细胞肺癌细胞中,荧光素酶报告基因实验表明miR-28可以靶向RAP1B基因;与miR-28 NC比较,miR-28 mimics组A549和H1299细胞RAP1B mRNA和RAP1B蛋白的表达明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-28 inhibitor组A549和H1299细胞RAP1B mRNA和RAP1B蛋白的表达明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-28可能通过下调靶基因RAP1B从而抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移与侵袭。

RAS相关蛋白1b在肿瘤中调控机制的研究进展

Ras相关蛋白1(RAS-associated protein 1,Rap1)是RAS家族小G蛋白中的一员,可通过多种信号通路参与癌变过程。Rap1由两种高度同源异构体Rap1a和Rap1b组成,其中Rap1b通过参与Wnt/β-catenin、PI3K/Akt/mTOR、NF-κB/Twist1、cAMP/PKA等多种通路,在调节细胞增殖、转移,血管生成,免疫逃逸等与肿瘤发生发展相关的方面有显著调控作用。根据其调控作用,Rap1b可能作为肿瘤治疗靶点,通过靶向Rap1b的治疗可能抑制肿瘤的转移、血管生成,解除免疫抑制,减缓耐药。全文就Rap1b对肿瘤相关细胞及通路调节作用的研究进展作一综述。