随机扩增多态性DNA分子标记技术在肠球菌分型中的应用

该研究旨在探索随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)分子标记技术在肠球菌种间快速分型的效果。试验通过筛选模板、单引物、双引物及RAPD反应体系,构建肠球菌种间分型体系,对32株已知肠球菌分型确定分型相似度标准,并通过对46株未知肠球菌进行种间分型以及管家基因rpoA测定验证分型效果。结果显示微波法提取基因组DNA满足实验需要,筛选出7条单引物用于双引物配对组合,最适的双引物反应体系为:2×PCR Taq Mix 12.5μL,模板DNA 1μL,引物各1μL,ddH_(2)O 9.5μL;分型效果最好的双引物组合为Primer1+Primer5,该引物组合可以在80%的相似度下区分肠球菌种间差异,Primer1+Primer3组合在500 bp位置扩增出海氏肠球菌的特征条带,可以作为海氏肠球菌的鉴定指标,用以快速鉴定海氏肠球菌。

向日葵种质资源的随机扩增多态性DNA(RAPD)研究

采用RAPD方法对我国 2 1个向日葵 (HelianthusannuusL .)基因型和 11个国外引进向日葵基因型进行分析 ,构建了它们的指纹图谱。从 80个随机引物中筛选出的 2 5个有效引物共产生 188条DNA片段 ,大小分布在 0 .2 6～1.98kb之间 ,其中 16 4条带具有遗传多态性 ,约占总数的 87.2 % ,平均每个引物扩增的DNA带数为 7.5 2条。 32个向日葵的遗传相似性分析表明 ,各基因型间的Nei氏相似性系数分布在 0 .3987～ 0 .85 3 1之间 ,平均相似性系数为0 .6 2 81。 11个国外向日葵基因型的Nei氏相似性系数分布在 0 .713 4～ 0 .85 3 1之间 ,平均相似性系数为 0 .782 8,说明国外基因型之间的遗传基础比较狭窄。 2 1个国内向日葵基因型的Nei氏相似性系数分布在 0 .475 0～ 0 .82 0 6 ,平均相似性系数为 0 .6 478,说明国内向日葵基因型之间的遗传多态性较为丰富。通过非加权算术平均数聚类(UPGMA)的方法 ,绘制出了 32个向日葵基因型之间的遗传关系树图。 32个向日葵基因型明显地聚成A、B两大类群。 2 1个国内向日葵基因型聚成了A1、A2两个亚类 ,A1组包括 :X10、陕西向日葵、D_S12 、长岭向日葵 6、黑 2_S2_2 、T_C0 8、长岭葵花 4、白葵 3号、BH_10、J_S_B1、张掖白子葵、C10 1_S4 3S4 等 12个基因型 ;A2组包括 :LK30 5_S8?

用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术区分不同地理株白纹伊蚊

目的 对来自北京、广州、成都、上海和日本的冲绳及长乐寺 6个不同地理株的 12只雄蚊进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析。方法 RAPD -PCR。结果 UPGMA法构建的系统聚类图表明 ,12只白纹伊蚊可归为明显不同的两个组 ,不同地理株之间存在着显著的遗传分化。结论 用RAPD法可以区分不同地理株的白纹伊蚊。

长江口刀鲚遗传多样性的随机扩增多态DNA(RAPD)分析

用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对长江口刀鲚 (Coiliaectenes) 30个个体的遗传多样性进行了检测 ,从 4 0个随机引物中筛选出 17个对每个刀鲚的DNA进行扩增 ,结果表明 ,17个引物共检测到 14 8条清晰且重复性好的条带 ,分子量在 2 0 0～ 2 0 0 0bp之间 ,其中多态位点为 86个 ,占5 8 11% ;群体的Shannon多样性指数为 0 190 5 ,Nei基因多样性指数为 0 2 2 80 ;个体间最大遗传距离为 0 2 12 ,最小遗传距离为 0 0 92。通过与其他鱼类的遗传多样性的研究结果比较可初步判断 ,刀鲚群体的遗传多样性比较丰富。

随机扩增多态性DNA(RAPD)技术用于青海田鼠鼠疫菌株亲缘性的研究

目的 对青海省称多县境内和四川省石渠县境内青海田鼠体内分离的 32株鼠疫耶尔森氏菌的基因进行分析 ,明确两地鼠疫耶尔森氏菌间的亲缘关系。方法 用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术。结果 扩增产物在凝胶电泳上显示的条带 ,除 7株菌略有不同外 ,其余 2 5株均相同。TreeView[Win32 ]统计软件分析的结果也显示两地鼠疫耶尔森氏菌之间具有很近的亲缘关系。结论 青海省称多县和四川省石渠县青海田鼠体内分离到的鼠疫耶尔森氏菌在遗传学上属同一来源。

长江下游铜鱼遗传多样性的随机扩增多态DNA(RAPD)分析

用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对长江下游铜鱼(Coreius heterodon)20个个体的遗传多样性进行了检测,从40个随机引物中筛选出19个对每个铜鱼的DNA进行扩增。结果表明,19个引物共检测到95条清晰且重复性好的条带,分子量在100～1500bp之间,其中多态位点为30个,占31.58%;群体的Shannon多样性值为0.1940;个体间最大遗传距离为0.0976,最小遗传距离为0.0003。通过与其他鱼类的遗传多样性的研究结果比较可初步判断,长江下游铜鱼群体的遗传多样性较低。由于没有以前的遗传多样性分析资料,因此不能评判过度捕捞和自然环境的破坏等因素对铜鱼遗传多样性的影响程度。

以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术筛选意大利蜜蜂重要农艺性状遗传标记

为了获得意大利蜜蜂重要农艺性状的分子遗传标记 ,本研究以 30种RAPD随机引物对平湖浆蜂、美意、澳意、苏意等 4个在产浆、采蜜和抗病性上存在较大差异的意蜂品系的基因组DNA进行RAPD_PCR扩增筛选。试验结果显示 ,随机引物W 1 8(5′_CGGACGGCGG_3′)和W2 3(5′_GTACCGCCCG_3′)的扩增图谱呈多态性。其中 ,在引物W 1 8所扩增出的 9条片断中 ,2 35 2bp和 36 4bp条带为美意所特有 ,表明可将之用于鉴别美意 ;2 0 92bp条带仅出现于蜂蜜高产的美意和澳意中 ,意味着该条带为一个蜂蜜高产性状的遗传标记 ;而 6 32bp条带在王浆高产品系平湖浆蜂中出现的频率 (0 91 )显著高于 (P <0 0 1 )美意(0 0 4 )、澳意 (0 0 2 )和苏意 (0 0 0 ) ,说明 6 32bp条带可能为王浆高产性状的一个遗传标记。在W2 3引物扩增条带中 ,6 5 1bp条带为澳意所特有 。

文蛤、青蛤和四角蛤蜊的随机扩增多态性DNA(RAPD)的比较分析

利用随机扩增多态性 DNA (RAPD) 技术,对吕四海区的三种重要的水产贝类:文蛤、青蛤和四角蛤蜊的遗传多样性进行了分析和比较。用 60 个随机引物对三种贝类共 24 个样品进行随机扩增,从中选取了 45 个扩增效果比较稳定的引物用于群体分析,共得到了 250 个位点。根据 Nei 氏公式计算出 3 种贝类种间和种内的遗传相似性指数和相对遗传距离,并进行聚类分析。通过比较分析,3 种贝类之间的遗传距离差异不大;相对与青蛤和四角蛤蜊,文蛤种内的遗传距离要小。

随机扩增多态性DNA(RAPD)技术及其在医学原虫学中的研究进展

随机扩增多态性 DNA(RAPD)分析技术以其高效、快速、简便等优点而被广泛应用。本文介绍了该技术的原理、影响因素和局限性 ,并重点综述了其在医学原虫分类鉴定、世系发育、地理分布。

随机扩增多态性DNA(RAPD)及其在茶叶科学领域的应用

随机扩增多态性DNA（RAPD）是用于作物种质资源鉴定及育种的分子标记。近年发展非常迅速，应用范围很广。本文就茶叶科学的几个方面论述了RAPD标记在茶叶科学研究的应用及前景：（1）茶树品种遗传连锁图谱的绘制；（2）茶叶种质资源鉴定及分类；（3）茶树目标性状基因的标记研究。

贵州3种车前草的随机扩增多态性DNA(RAPD)亲缘关系分析

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对贵州车前草的3个种进行了分析,建立了它们的指纹图谱。从60个随机引物中筛选出的9个引物共产生94条DNA片段,大小分布在0.1￣0.2kb之间,其中71个条带具有遗传多态性,约占总数的75.53%。平均每个引物扩增的DNA带数为10.44条。应用NTSYSpc软件进行聚类,将聚类结果转化为3种车前草之间的遗传关系树形图。结果显示,车前和平车前首先聚类,其Dice相似性系数为0.76,在三者中它们的亲缘关系较近;而大车前与它们的遗传相似性系数为0.56,亲缘关系较远。

梭鱼人工养殖群体与自然群体的随机扩增多态DNA(RAPD)分析

利用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术，对黄河口海域梭鱼人工养殖群体与自然群体的遗传多样性进行了分析比较，以期由分子水平了解梭鱼的种群遗传多样性背景及人为干涉因素对梭鱼种群遗传多样性造成的影响．选用ＯＰＣ组２０个１０碱基对（ｂｐ）的随机引物，对采自河北省黄骅市的２４尾野生梭鱼和１５尾人工养殖梭鱼进行了分析．选出１１个扩增效果稳定的引物用于群体分析，扩增结果具有较好的可重复性．１１个引物共检出１１２个位点，其中养殖群体中有９４个表现多态，多态比例为 ８３． ９３％；自然群体在 ９６个位点上表现多态，多态比例为 ８５． ７１％．经计算，养殖群体的遗传多样性指数为 ０． ２１２ ４，自然群体的遗传多样性指数为 ０． ２２７１；梭鱼两群体间的相似系数为 ９２． ８２％，遗传距离为 ０． ０７１８．研究结果表明，目前黄河口海域梭鱼群体的遗传多样性比较丰富，人工养殖过程对其未造成明显的影响，估计这与人工养殖过程中人为干涉因素少（如育苗历史短、亲鱼来源于自然群体、无定向选择和近亲繁殖等）有关．这一结果表明，梭鱼的人工养殖业在黄河口海域有很好的发展前景．

红花种质的随机扩增多态性DNA分子鉴定

目的:从分子水平探讨红花(Carthamus tinctorius L.)的种内变异,为红花种质的分子鉴定提供依据。方法:用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术和统计学分析方法,对从我国新疆、甘肃、宁夏、河南、山东、山西、河北、安徽、浙江等9省采集的红花22个品种的遗传多样性进行分析。结果:根据RAPD特征图谱,通过在DNA分子水平上的聚类分析,将红花22个品种分为7个类型。RAPD聚类分析表明了品种间的亲缘关系:北方,特别是新疆地区的品种亲缘关系较近,PCR结果极为相似,而南方品种间遗传差异性较大。结论:红花种内存在一定的遗传变异,本研究结果为红花品种鉴定及亲缘关系的探讨提供一定依据。

俄罗斯“和平”号空间站搭载的番茄随机扩增多态性DNA分析

目的从分子水平证实长时间航天搭载的番茄种子后代的遗传物质发生变异。方法利用俄罗斯“和平”号空间站搭载6年的番茄种子地面种植,进行随机扩增多态性DNA(randomamplifiedpoly morphicDNA,RAPD)检测。结果空间搭载的番茄和地面对照经RAPD分析,40个随机引物中,31个引物扩增的DNA带型一致,9个引物扩增的DNA带型表现多态性。共扩增出269条带,多态性带29条,多态性百分率为10.8%。空间搭载的番茄和对照相比扩增带型均出现差异,且空间搭载的番茄之 间的带型也不同。和地面对照相比,空间搭载的番茄中5号植株的DNA变异程度最大,3号植株变异程度最小。结论长时间航天飞行可引起番茄遗传物质DNA水平上的变异。

长江鲢遗传多样性的随机扩增多态DNA分析

运用４０个１０碱基随机引物对长江中游鲢的遗传多样性进行了随机扩增多态ＤＮＡ （ＲＡＰＤ）分析。所用引物中，能在鲢不同个体基因组中扩增出多态ＤＮＡ带的有１０个，占总引物数 的 ２５％．据ＲＡＰＤ带型分析，所取长江鲢自然群体的 １８条样品中，每两个体相比较的遗 传相似度在０．９２８５至０．９７８８之间，平均值为０．９５４３；遗传变异度则在０．０２１２至０．０７１５之 间，平均值为０．０４７２５；群体Ｓｈａｎｎｏｎ表型多样性指数（Ｈｏ）为８．８６１５，Ｓｈａｎｎｏｎ多样性值（Ｈ）为０．０６２４。 讨论了这些数据所反映的长江鲢遗传多样性和鱼类种质资源评价问题。

小菜蛾对杀虫双和杀螟丹抗药性遗传的DNA随机扩增多态性研究

利用室内选育 119代的抗杀虫双和抗杀螟丹小菜蛾Plutellaxylostella品系和敏感品系 ,通过反复回交建立近等基因系。用Operon公司合成的 80个引物对抗杀虫双近等基因系和抗杀螟丹近等基因系小菜蛾基因组DNA进行PCR扩增 ;在抗杀虫双近等基因系中有 3个引物分别产生了 1条特异扩增带 ,2个引物分别产生了 2条特异扩增带 ,1个引物产生 3条特异扩增带 ;在抗杀螟丹近等基因系中 ,有 4个引物分别产生了 1条特异扩增带 ,1个引物产生了 2条特异扩增带。在培育近等基因系的多次回交过程中 ,与抗性有关的遗传因子被逐步置换到敏感品系的基因组中 ,因此可以认为这些特异带与小菜蛾对杀虫双和杀螟丹的敏感性有关。

中国鼠疫菌随机引物扩增多态性指纹图谱

目的 对中国不同鼠疫自然疫源地鼠疫菌染色体的分析和比较发现其近缘关系进而从分子水平进行分型。方法 用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术。结果 第 1条引物将中国的鼠疫菌分为 11个类型 ,每个类型都有一定的条带规律和地理分布范围。第 2条引物将我国的鼠疫菌分为 5个类型。结论 随机扩增多态性DNA(RAPD)

马尾松随机扩增多态性DNA标记的分离研究

马尾松随机扩增多态性ＤＮＡ标记的分离研究魏令波，唐谦，郑先武，顾万春（中国林业科学研究院林业研究所北京１０００９１）李小兵（中国科学院遗传研究所植物生物技术开放实验室北京１０００１２）关键词马尾松，ＲＡＰＤ，Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ分离随机扩增多态性ＤＮＡ...

用随机扩增多态性DNA技术对重离子辐照大丽花花色突变体的初步研究

品系为“大雪青”的大丽花幼枝,经兰州重离子加速器提供的80MeV/u12C6+束辐照后,种植在甘肃省定西市临洮新兴花卉公司基地。辐照8Gy的幼枝有一株花色突变体,用随机扩增多态性DNA(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术对突变体和野生型进行检测分析。琼脂糖凝胶电泳结果表明,所用的10条引物中,有7条引物共扩增出78条带,其中5条引物扩增出了11条多态性片段,从而在DNA水平上证实了两者之间存在着差异,为进一步探讨重离子诱变机理打下基础。

随机扩增多态性DNA技术在中药红曲基原菌系统分类中的应用

目的 :建立中药红曲基原菌的随机扩增多态性 DNA( RAPD)分析方法。 方法 :以 CTAB法提取紫色红曲霉等 7种红曲霉和 1株土曲霉的基因组 DNA;溴化乙啶荧光强度和分光光度双重测定法确定 DNA浓度 ;琼脂糖凝胶电泳法检测 PCR扩增产物 ,PHYL IP 3.5 c进行聚类分析。 结果 :从 6 0个随机引物中筛选出 S2 82 等 10个引物的扩增产物谱带多 ,特征好 ;红曲霉属种间指纹图谱差异较大 ,呈现出明显的 DNA扩增产物多态性。 结论 :RAPD分析技术可作为真菌系统分类的客观而有效的手段之一。