Study on Systematics in Glycine With RAPD Fingerprinting

The detection and exploitation of naturally occurring DNA sequencepolymorphisms represent one of the most significant developments in molecular biology.Restriction endonuclease digestion of total genomic DNA followed by hybridizationwith a radioactively labelled probe reveals differently sized hybridizing fragments. Thisform of polymorphism termed RFLP has been used extensively for genetic studies.However, the technique is not so efficient in detecting polymorphisms of

大白菜杂交种‘冠春’杂交率的RAPD分析

从春大白菜品种‘冠春’及其亲本中提取基因组DNA,用320个随机引物进行RAPD扩增,从中筛选出5 个可将亲本和子代区分的引物S4、S47、S73、S134和S194。S4产生父本特征带S4-370;S47和S134产生母本特征带S47-700 和S134-1200;S73和S494产生亲本互补的特征带S73-660、S73-730和S494-400、S494-1770,上述谱带均在子代中出现。以这5个引物产生的特征谱带建立杂交种‘冠春’及其亲本的RAPD特异指纹。通过对134个‘冠春’的种子进行纯度鉴定,结果表明2个父本和4个母本与大田检测结果完全一致。进一步验证了4种鉴定大白菜杂交种方法的可行性。

尾叶桉和细叶桉无性系的RAPD指纹图谱构建

利用ＲＡＰＤ分子标记技术对来自９个起源地点的尾叶桉（ＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｕｒｏｐｈｌａＳ．Ｔ．Ｂｌａｋｅ）和细叶桉（Ｅ．ｔｅｒｅｔｉｃｏｒｎｉｓＳｍｉｔｈ）共２２个无性系的研究表明，１３个引物共扩增出１１０个位点，多态性位点９１个，在起源地点间差异显著的多态性位点２５个，各无性系有其特异的ＲＡＰＤ扩增谱带。利用多态性位点的数据矩阵，计算了各无性系间的遗传距离，并构建了无性系间的遗传关系聚类图。

30个中国甘薯主栽品种的RAPD指纹图谱构建及遗传变异分析

研究以中国30个甘薯主栽品种为材料,对甘薯RAPD指纹图谱的构建进行了探讨。从102个RAPD引物中筛选出26个多态性丰富的引物用于PCR扩增,共扩增出255条多态性条带,平均每个引物扩增的多态性带数为9.8条。其中S32和S39多态性最高,仅用其中1个引物即能将这30个甘薯品种完全区分开,且由此构建的指纹图谱出现的概率很小,分别为4.77×10-7(1/221)和1.91×10-6(1/219)。结果进一步表明,这30个甘薯品种的遗传距离变异幅度较大,为0.0390～0.4306,平均遗传距离为0.3086。RAPD聚类分析表明,地域分布相近的甘薯品种和具有同一亲本的甘薯品种聚在一起,与这些甘薯品种的系谱图一致。

RAPD法鉴定射干类中药

目的 用 RAPD技术对射干类药材射干 Belamcanda chinensis及混淆品鸢尾属鸢尾 Iris tectorum、野鸢尾I.dichotoma、蝴蝶花 I.japonica、德国鸢尾 I.germanica等 5种药用植物进行分子水平的鉴定。方法 CTAB法和 DNeasy TMPlant Mini Kit法提取射干类药材 5种原植物总 DNA,以随机引物进行随机扩增。结果 用 OPD- 0 8(5’- gtgtgcccca- 3')等作随机扩增引物进行随机扩增时 ,可得到识别这些物种基因组 DNA的多态片段。结论 RAPD法能有效的鉴别射干类药材 ,把射干和鸢尾、野鸢尾、蝴蝶花。

康定冬虫夏草与人工虫草的RAPD指纹图谱比较研究

目的用RAPD方法对康定虫夏、人工虫草及虫草发酵菌丝体进行指纹图谱的研究,为不同虫草的品质和药效差异提供分子依据。方法从65个随机引物中筛选出7个引物,以这7个引物进行PCR扩增,电泳得到其指纹图谱。结果没有发现任何两个样本拥有完全相同的RAPD标记,康定冬虫夏草和人工虫草具有较高的遗传多态性,而与虫草发酵菌丝体相比差异较大。结论来自不同产地冬虫夏草群体均表现出其独特的RAPD标记,其差异可能系虫体的不同所致。随机扩增的DNA片段的差异是否预示其药效的不同,有待进一步研究。

RAPD重建的大豆属植物的亲缘关系

利用８种ＲＡＰＤ引物（ＯＰＨ－２、ＯＰＨ－３、ＯＰＨ－５、ＯＰＨ－１２、ＯＰＨ－１５、ＯＰＨ－１６、ＯＰＨ－１８和ＯＰＨ－２０）对大豆属的２１份植物材料，其中包括Ｇｌｙｃｉｎｅ亚属的１０个种和Ｓｏｊａ亚属的３个种，进行了基因组指纹图谱构建。通过对获得的基因组指纹图谱的量化分析，利用Ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄｐａｉｒｇｒｏｕｐｗｉｔｈｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｖｅｒａｇｅ（ＵＰＧＭＡ）对大豆属中的各个种进行了亲缘关系重建。重建的亲缘关系表明：Ｇ．ｔｏｍｅｎｔｅｌｌａ种中存在３种不同的进化类型，其分化距离已大于某些种种间的分化距离，它们可能是被形态遮蔽的３个种。Ｓｏｊａ亚属内３个种的分化关系同前人的研究推断相同，其亲缘关系很近，这一结果支持将这３个种归并为一个种的观点。但是重建的亲缘关系未能显示出大豆属两个亚属的划分格局。

用RAPD方法研究草鱼、柏氏鲤和3个地理种群鲤的亲缘关系

用 2 4种随机引物对雅罗鱼亚科 (Leuciscinae)的草鱼、鲤亚科 (Cyprininae)的柏氏鲤和 3个地理种群鲤 (荷包红鲤、黑龙江野鲤和德国镜鲤 )进行RAPD分析 ,构建了这 5种鱼类的基因组指纹图谱。通过对获得的基因组指纹图谱的量化分析 ,利用UPGMA重建了它们之间的亲缘关系。结果鲤种内 3个地理种群之间的相似性高于鲤和柏氏鲤种间的相似性 ,而草鱼与另 4种鲤亚科鱼类亚科之间的差异明显高于柏氏鲤、黑龙江野鲤、荷包红鲤和德国镜鲤的种间或种内差异。

利用RAPD标记鉴定和区分梅花42个宫粉型品种

利用RAPD标记,对形态特征相似的42个宫粉型梅花品种的基因组DNA进行随机引物PCR扩增。从120个引物中筛选出21个引物,共扩增出96条谱带,其中多态性谱带68条,占扩增谱带数的70.8％,品种间相似系数范围为0.737～0.961。在21个引物中,7个引物扩增的谱带可区分27个品种,7个引物相互组合可区分其余的15个品种。梅花品种RAPD指纹图谱的建立可以为品种知识产权保护提供依据。

景天属药用植物遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD技术对景天科景天属(Sedum)的凹叶景天、江南景天、宽叶景天、佛甲草和垂盆草等6种药用植物进行分子水平鉴定,并初步分析其相互间的亲缘关系。CTAB法提取各药用植物总DNA,以45条随机引物进行随机扩增,筛选出10条随机引物很好地区分了11个试样,扩增出208个位点,其中多态性位点173个(83.2%)。用Popgen32计算出各种间的Nei’s(1978)遗传距离和遗传相似性矩阵,采用UPGMA绘出了亲缘关系聚类图。结果表明RAPD法能有效地鉴别景天属6种药用植物,探讨其种间亲缘关系和种内遗传多样性,其结果还为同属待定种鉴定提供了DNA分子水平依据。

墨西哥落羽杉无性系RAPD指纹图谱的构建

利用随机多态扩增DNA（RAPD）分子标记对53个墨西哥落羽杉无性系的研究表明：31个随机引物共扩增出了241条谱带，其中118条谱带在无性系间呈现多态性，多态位点占48．96％；用POPGENE软件对无性系进行遗传分析，得出无性系间的遗传距离为0．271～0．537，说明无性系间的遗传差异相对较大。通过聚类分析将53个优良无性系分为两大类，同时利用RAPD分子标记构建了53个无性系的指纹图谱，可对墨西哥落羽杉优良无性系进行区分和鉴定。

苹果RAPD分析体系的建立

对富士苹果（Ｍａｌｕｓ ｐｕｍｉｌａ Ｍｉｌｌ．ｃｖ．Ｆｕｊｉ）ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ）分析体系的优化研究表明，ＲＡＰＤ反应体系中，ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、引物和Ｍｇ２＋４种主要成分的最适用量分别为：２０ｎｇ、１．０ Ｕ、０．２ｕｍｏｌ·Ｌ－１和３．０ｕｍｏｌ·Ｌ－１。采用该优化体系，以 ＯＰＪ０３为引物，构建了我国及世界范围内苹果生产中重要的２８个品种的ＲＡＰＤ指纹图谱，分析了其遗传多样性，区分了供试的２８个苹果品种中的１５个，区分率达５３．６％。讨论了ＲＡＰＤ鉴定苹果品种的应用及其主要影响因素。

不同类型玉米RAPD指纹图谱的构建

采用 RAPD标记技术对在云南省种植的不同类型玉米构建指纹图谱 ,在种子检验中用于鉴别种子真伪。从 80个引物中筛选到多态性好 ,带型稳定的 5个引物 ,总共检出 42个等位基因 ,片段大小在 40 0 bp～ 1 4 0 0 bp之间。分别建立了这些玉米材料的 RAPD指纹图谱及相应的数字指纹。

何首乌野生种质资源的RAPD指纹图谱构建

采用RAPD分子标记技术对广西何首乌野生种质资源进行遗传多样性分析。结果表明:40对随机引物用于PCR扩增,共得到295条扩增DNA片段,175个多态性片段,多态性达到59.3%,其中田林种源与西林种源之间的遗传变异最小,西林种源和灌阳种源之间遗传变异最大;根据RAPD标记划分10个何首乌野生种源得到5个品种群,这5个类型与地理分布有一定关系,地理位置较近的材料能聚在一起。分子标记可用于何首乌种质资源的分类、真伪鉴定及良种选育。

中国芸芥栽培品种亲缘关系的RAPD分析

用100个随机引物对18个芸芥品种的基因组DNA进行扩增,结果有10个随机引物得到了稳定一致的RAPD谱带,扩增出的谱带数在2～17条之间,共扩增出91条谱带;采用UPGMA法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,在遗传距离(D)=0.1333处,将供试芸芥品种分为2类8组,揭示了供试芸芥品种的亲缘关系。

中国李RAPD的优化反应体系及其在品种鉴定中的应用

以5'-GACCGCTTGT-3'为随机引物,以奉化李(Prunussalicinacv.Fenghuali)为试材,对中国李RAPD反应体系进行了优化研究,结果表明:25μL反应体系中,TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:1.0U、2.5mmol/L、20ng、40ng和0.2mmol/L。利用该优化反应体系,用10个随机引物,构建了5个中国李品种的RAPD指纹图谱;并以共有谱带率对这些品种遗传关系进行了分析,5个中国李品种的共有谱带率平均为33.2%,变异幅度为20.1%～44.9%。

百合种质资源间亲缘关系及RAPD指纹图谱分析

目的探讨百合种质资源间亲缘关系的遗传多样性。方法利用随机扩增多态性DNA标记(RAPD)分子标记技术进行遗传多样性研究。结果35条随机引物用于PCR扩增,共得到769个扩增位点,628个位点具有多态性,占81.7%,其中江苏省引种栽培的2个农家品系(尖头系和平头系)种源之间的遗传变异最小,湖南衡山野外的大百合和甘肃引种的细叶百合种源之间遗传变异最大;根据RAPD标记划分l6个百合种源在阈值为0.940 7时分为2个RAPD群,即分别属于百合科的百合属和大百合属;阈值为0.579 0时,百合属分为3个种,即分别为百合、卷丹和细叶百合。结论分子标记可用于百合种质资源的分类、真伪鉴定、选育良种。

中国大陆沿海六水系绒螯蟹(中华绒螯蟹和日本绒螯蟹)群体亲缘关系:RAPD指纹标记

用 4 8个具有丰富多态性的 10碱基随机引物对辽河、黄河、长江、瓯江、珠江和南流江的中华绒螯蟹和日本绒螯蟹的 6个群体进行RAPD分析。结果发现 :(1)两个引物具有群体特异性带 ,其中Z2扩增的 880bp片段为珠江蟹和南流江蟹群体中所特有 ,而 70 0bp片段为长江蟹、辽河蟹、黄河蟹和瓯江蟹所特有 ,可作为区别日本绒螯蟹和中华绒螯蟹的分子遗传标记 ;(2 )Opp17扩增的 94 7bp片段的出现频率 ,在长江、黄河和辽河群体显著地从南到北递减 ,长江蟹 87.50 %、黄河蟹4 1.66%、辽河蟹 10 .83%。这一遗传渐变的度量可作为区别这三个水系的中华绒螯蟹种群的判据 ;(3) 6水系群体内的平均遗传相似度依次为 :辽河蟹 0 .90 8>南流江蟹 0 .897>瓯江蟹和珠江蟹 0 .895>黄河蟹 0 .890 >长江蟹 0 .850 ;6群体间遗传距离及其UPGMA、NJ聚类分析进一步表明 ,南流江蟹、珠江蟹同长江蟹、辽河蟹及黄河蟹在基因组之间存在明显的歧化。

闽南乌龙茶茶树种质资源RAPD指纹图谱构建及遗传多样性分析

利用RAPD分子标记技术构建了30份闽南乌龙茶茶树种质的DNA指纹图谱,结果表明使用同一扩增引物的特异谱带类型和不同扩增引物的谱带类型组合可以有效鉴别闽南乌龙茶茶树种质资源;10条RAPD引物共扩增出103条谱带,其中80条具有多态性,占77.67%。通过UPGMA法聚类分析,30份茶树种质被聚为2个类群,供试种质间的平均遗传相似系数为0.603,遗传关系树状图在分子水平上清楚的显示了闽南乌龙茶茶树种质资源间的亲缘关系,为评估供试样品的遗传演化地位并从中选择适宜种质作为亲本进行茶树育种研究提供依据。