黑木耳不同交配型的单倍体菌株RAPD/BSA分析(英文)

从黑木耳(Auricularia auricula)种内杂交子H2J3的子实体上单孢分离培养得到F1代52个单核体菌株,将F1子代及亲本(H2,J3)等所有供试单核体菌株的菌丝体两两配对培养,采用核荧光染色观察核相,和光学显微镜观察锁状联合,鉴别菌丝交配反应是否形成双核体菌丝,同时测定了亲本菌株所有F1子代的交配型。根据交配型表型将F1子代菌株分成两群(F1-A1,F1-A2),将每群内各自菌株的DNA等量混合,构建交配型基因的等基因池,通过64个随机引物的RAPD分析,发现引物S126在2个等基因池间扩增出差异带S1261021,且在属于同一交配型的亲本及F1子代之间扩增结果基本一致,表明S1261021是与交配型基因连锁的分子标记。

基于文献计量学BSA在作物育种领域的应用现状与展望

为了解国内外集群分离分析法(bulked segregant analysis,BSA)在作物育种领域的研究现状与前沿动态,客观反映各国家、机构及研究人员在该领域的影响力,本文基于文献计量学分析方法使用文献计量分析软件CiteSpace对WOS(Web of Science)数据库2000~2023年2111项和CNKI(China National Knowledge Infrastructure)数据库2003~2023年446项研究成果进行关键词共现分析、突显词分析、关键词聚类分析、聚类时间线分析及作者共被引分析。结果表明:BSA在作物育种领域应用的研究成果在国内外的发文趋势相同,国内外期刊发文量均逐年上升;在发文量国家排序中,中国排名第一、美国第二、印度第三。在CNKI数据库中华中农业大学的发文量最多,而在WOS数据库中中国农业科学院的发文量最多。国外BSA在作物育种领域应用的文章主要集中在植物科学、农学、园艺学和遗传学等学科,而国内主要集中在作物学、植物保护学、园艺学、生物学等学科;Michlmore RW、Kosambi DD和Li H这3位作者在该领域的影响力最高,而Michlmore RW、Lander ES、Li H这3位作者与其他作者有更密切的联系。国内研究的热点作物和性状分别是水稻(Oryza sativa)、大豆(Glycine max)、玉米(Zea mays L.)和抗病性、株高;国外研究的热点作物和性状分别是水稻、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、小麦(Triticum aestivum L.)和抗病性。目前,BSA在国内集中应用于作物目标性状候选基因及作物突变体突变基因的定位和功能验证,而国外则集中应用于作物目标性状基因的精细定位和功能验证及遗传机制的解析。此外,BSA在作物育种领域应用的研究前沿分析表明,未来在该领域热点研究的对象为水稻、花生(Arachis hypogaea L.)、陆地棉(Gossypium hirsutum L.)、作物突变体和作物代谢产物。

地被菊匍匐性的遗传分析与RAPD标记研究

【目的】探讨地被菊株型匍匐性的遗传控制,并寻找与匍匐性连锁的RAPD标记,为匍匐型地被菊新品种选育、分子标记辅助育种和匍匐性相关基因的克隆奠定基础。【方法】以盆栽小菊品种‘早意大利红’为母本,地被菊品种‘03(6)-12’为父本构建F1群体,从F1中选取株型表现为匍匐、直立和中间型的单株各1株,分别自交,构建F2群体,并以选取的3个类型F1单株为母本与‘03(6)-12’回交,构建BC1群体。以主枝分枝角度作为株型划分依据,统计每个群体中不同株型分离比,推测地被菊株型控制相关基因特点。此外,以F1分离群体为试材,采用集团分离分析法(bulkedsegregantanalysis,BSA)构建株型匍匐/直立基因池,利用200个RAPD随机引物筛选与地被菊匍匐基因相连锁的分子标记。【结果】通过遗传分析和χ2检验表明,地被菊匍匐/直立特性由1对不完全显性主效基因控制,同时存在微效修饰基因。筛选出1个与地被菊匍匐性状控制基因相连锁的分子标记A-10555。经过重复性验证和群体单株验证,该标记与地被菊株型匍匐/直立位点遗传距离为7.96cM。【结论】以主枝分枝角度作为株型的划分标准是可行的,通过F1、F2和BC1分离群体能对地被菊株型控制位点进行有效分析。获得的分子标记与株型匍匐/直立位点的遗传距离小,能用于辅助育种。

美洲黑杨抗黑斑病基因的RAPD标记筛选和连锁分析

以美洲黑杨（Populus deltoides Bartr.cv.“Lux”:I-69/55））为母本,欧美杨（P.euramericana cv.I-45）为父本得到的F1为材料,其中I-69对黑斑病表现为高度抗病,I-45为高度感病。利用分离群体混合分析（bulkedsegregrants analysis,BSA）技术建立两个DNA池（感病池和抗病池）,筛选出了与抗黑斑病性状基因相连锁的RAPD标记:OPAI17-1550、OPAI13-900。利用选择性基因型分析法进行标记-抗黑斑病基因连锁分析,两标记与抗黑斑病基因遗传距离分别为29.9cM和37.4cM。

利用RAPD-BSA分子标记技术筛选金针菇色泽基因研究

色泽是金针菇的重要性状之一,受一对等位基因的控制。以FL19(黄色)、8801(白色)及其后代(F1代、F2代)菌株和相应单核菌株为材料,采用分离群体分组分析(BulkedSegregantAnalysis,BSA)方法,对金针菇基因组DNA进行RAPD分析,通过对200个引物的筛选,获得了一个与白色性状基因紧密连锁的RAPD标记S3751800,并在亲本及其后代菌株进行了验证,具有较好的重复性和稳定性。可用于白色金针菇新品种的辅助选育。

太空诱变玉米细胞核雄性不育基因与RAPD标记的连锁分析

以姊妹交多代的太空诱变玉米雄性不育材料RP3195(A)×S37(自交系)得到的F2代分离群体(138株)为材料,利用集团分离法(BSA)对太空诱变玉米细胞核雄性不育基因进行了RAPD分析,在152个随机引物中,引物SB SK-14(CCCGCTACAC)和SBSR-3(ACACAGAGGG)分别在可育集团与不育集团之间扩增出多态性产物SBSK-14850、SBSK-14475和SBSR-3400。通过对F2代分离群体中的单株进行连锁分析,初步认为SBSK-14850、SBSK-14475和SBSR-3400与太空诱变玉米细胞核雄性不育基因相连锁,遗传距离分别为49.6,26.6和31.7cM。

高粱抗蚜基因的RAPD分析

应用RAPD技术BSA法 ,对高粱抗蚜基因进行分析 ,筛选了 50 0个随机引物 ,共扩增出 1 6 1 4条谱带 ,得到了 1 0个具有稳定多态性标记的引物 ,分别为OPA - 0 1、OPP - 0 9、OPP - 1 4、OPH - 1 9、OPN - 0 8、OPN - 0 7、OPN - 2 0、OPY - 1 4、OPS - 2

中药白芷种质资源的RAPD分析

目的：对中药白芷的种质资源进行分析。方法：用１２个随机引物对野生白芷、杭白芷的４个居群超过１７个个体的基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析。结果：共扩增出４０个位点，其中多态位点２６个，占６．５％；祁、杭白芷的多态位点的百分率显示出低水平的遗传变异。根据ＲＡＰＤｉｓｔａｎｃｅ分析，祁、杭间的遗传距离（０．１６０）小于祁白芷居群内单株间和杭白芷不同居群间遗传距离，并且它们都小于野生白芷与祁、杭白芷间的遗传距离。结论：祁、杭白芷应属同一类群，与野生白芷有一定区别。

林木RAPD分析及实验条件的优化

随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ，ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）分子标记是目前林木遗传研究中使用最为广泛的一种分子标记，作者对影响ＲＡＰＤ实验的因素进行了分析和探讨，确定了一个针对林木进行ＲＡＰＤ分析的实验程序。根据该程序，可以快速确定ＲＡＰＤ实验的理想条件，获得ＲＡＰＤ反应的良好重复性。

烤烟品种资源的RAPD分析

从 15 6个随机引物中筛选出 30个引物 ,对来自国内外的 31个烤烟品种进行了遗传多样性和亲缘关系的RAPD分析。在检测的 2 46个位点中 ,12 7个位点为多态位点 (5 2 % )。聚类分析表明 ,不同烤烟品种之间存在明显差异 ,31个品种基本上可分为 4大类 ,品种最多的第一大类 (19个 )主要由来自美国的Orinoco烤烟选育而成 ,反映了我国现在推广的烤烟品种遗传基础比较狭窄。研究结果表明 ,RAPD技术可用于烤烟品种的鉴别和纯度测定。研究为烤烟杂种育种中亲本的选配提供了一定的理论依据。

应用RAPD技术分析热带龙眼四季蜜与常规龙眼品种的遗传差异

为分析不同龙眼品种之间的遗传差异及亲缘关系,以近年从广西引进的四季蜜龙眼和原产广东、福建、广西的9个龙眼品种的叶片为材料,以基因组DNA为模版,使用100条随机引物进行RAPD扩增,其中18条引物扩增出清晰的具多态性的DNA谱带。采用UPGMA法对这18条引物扩增的谱带进行聚类分析发现,遗传距离系数为0 8时,可将10个龙眼品种(系)分为3组,第1组含四季蜜,第2组含灵龙,第3组含其余8个常规龙眼品种,它们是古山二号、储良、友谊、龙优、石硖、松风本、大乌圆和广眼。

用RAPD技术对人参栽培群体的遗传分析

目的 :通过对栽培人参不同品系之间的遗传多样性进行研究 ,为人参品种选育提供参考。方法 :采用SPSS 10 0软件计算Dice遗传相似性系数 ,Between groupslinkage方法聚类 ,构建亲缘关系系统图。结果 :共筛选出18个 10碱基随机引物用于PCR扩增 ,17个供试样品共获得 14 5条扩增片段 ,其中有 5 3条是多态的 ,占 36 5 %。聚类分析结果表明 :大马牙类型内各品系间的亲缘关系近于与二马牙类型各品系样品间的亲缘关系 ,从分子水平证明了根据表征性状对栽培类群进行划分是可行的。结论 :RAPD对人参新品种培育进行辅助选择是一种良好的分子标记。

枇杷主要种类的RAPD分析

应用 14个 10聚体随机引物对解放钟、森尾早生、早钟 6号、贵州野生、台湾枇杷、栎叶枇杷、乌脐、白梨、洛阳青、俨糖枇杷、湖北六二等 11个枇杷品种或种类的基因组DNA进行RAPD扩增 ,共得到 13 0条扩增带 ,其中 3 3条为非多态性条带 ,多态性程度为 74.62 %。进行聚类分析 ,以D1=0 .5 99进行划分时 ,可将枇杷的 11个遗传资源分成栽培和非栽培两个类群。以D2 =0 .64 9进行划分时 ,8个普通种可分为两个类群 ,即白肉类群和红肉类群 ,并在DNA分子水平上说明枇杷果肉色泽可作为分类的一个指标。

对虾抗病性状遗传标记的RAPD分析

对人工选育的第 3代中国对虾和选育的第 1代凡纳对虾进行个体人工感染WSSV后 ,选取感染WSSV十余天但仍健康的对虾为实验材料 ,用 2 2 0个随机引物进行RAPD分析 ,得到抗病性状相关的特异性遗传标记 99个。其中中国对虾抗病组特异性片段出现了 18个 ,片段大小在 46 0～ 2 30 5bp之间 ;凡纳对虾抗病组特异性片段产生 81个 ,片段大小在 435～ 2 2 87bp。 77个引物在两种对虾的抗病组扩增出特异性遗传标记 ,其中有 4个引物各获得了三个特异性片段 ,有 13个引物各获得了两个特异性片段 ,其余 6 1个引物各获得了 1个特异性片段。

石蒜属种间亲缘关系RAPD分析

采用RAPD标记构建了石蒜属Lycoris植物 13个种的指纹图谱。从 5 2 0个随机引物中筛选出清晰且多态性高的 4 1个引物 ,共产生了 35 0条DNA片段 ,分子量在 0 3～ 3 0kb之间 ,其中 2 5 3条谱带具有遗传多态性 ,约占 72 3% ,平均每个引物扩增的DNA片段数为 6 2条。采用TFPGA数据分析软件 ,计算Nei氏相似性系数和遗传距离 ,建立了UPGMA聚类图。结果表明 :石蒜属 13个种明显聚为两大类 ,即具有单型核型结构 (Ⅰ型 )、染色体基数为x =11的 5个物种 :玫瑰石蒜L rosea、红蓝石蒜L haywardii、稻草石蒜L straminea、换锦花L sprengeri和石蒜L radiata聚为一类 ;具有两型核型结构 (V型和Ⅰ型 ) 8个物种即江苏石蒜L houdyshelii、乳白石蒜L albiflora、中国石蒜L chinensis、长筒石蒜L longituba、安徽石蒜L anhuiensis、夏水仙L squmigera、短蕊石蒜L caldwellii和忽地笑L aurea聚为一类。其中玫瑰石蒜和红蓝石蒜的亲缘关系最近 ,石蒜和忽地笑的亲缘关系较远 ,与细胞学的研究结果相吻合。通过RAPD分析 ,对玫瑰石蒜、红蓝石蒜和稻草石蒜是否天然杂交起源以及乳白石蒜、稻草石蒜和江苏石蒜的分类地位进行了探讨。

利用RAPD技术分析兰属(Cymbidium)品种间的亲缘关系

本文利用RAPD技术来检测兰属 13个品种间的亲缘关系 .通过对 5 5种 10个碱基随机引物的筛选 ,其中 4种引物能得到重复性、稳定性较高扩增产物 ,四种引物共扩增出 93条多态性带 ,多态率为 10 0 % .根据RAPD标记进行邻体聚类分析 ,表明兰属各种间的亲缘关系与形态学分类结果不完全一致 .实验结果认为RAPD技术可用于兰属植物的系统学研究 .图 2表 3参

巨峰葡萄系谱的SSR与RAPD分析

利用RAPD和SSR 2种标记分别对系谱关系明确的22个巨峰系葡萄品种进行聚类分析,以验证2种标记方法的正确性与可靠性。结果显示,11条RAPD引物和12对SSR引物,分别扩增了82和43个清晰的条带。RAPD与SSR引物扩增的条带中分别有58和31条多态性带,其多态性比率分别为70.7%和72.1%。2种分子标记聚类结果基本一致,并且都能有效地将品种区分开来以及正确反映22个葡萄品种的亲缘关系。研究结果说明RAPD和SSR 2种分子标记均适合于巨峰系葡萄的系谱分析和种质遗传多样性研究。

牛血清白蛋白在锁阳RAPD分析中的作用

[目的]为了研究牛血清白蛋白(BSA)在RAPD分析技术中的作用。[方法]通过锁阳RAPD分析中添加BSA,观察其对RAPD扩增的改善情况。[结果]结果表明,在锁阳RAPD分析过程中,添加BSA可显著改善锁阳的PCR扩增效果,并降低Taq酶的用量,BSA最佳使用浓度为2μg/μl。[结论]添加BSA以改善植物RAPD分析的方法是可行的;该研究为BSA在RAPD分析技术中的应用提供依据。

菊花起源的RAPD分析

利用ＲＡＰＤ分析技术，选取２２个２０个碱基长度的随机引物，对７种野生菊花、１４种栽培菊花和５个种间杂种进行了随机扩增。通过实验建立了ＰＣＲ随机扩增实验体系。在观察到的２２４个扩增条带中，３４条（１５％）表现多态性。利用ＵＰＧＭＡ法对扩增数据进行分析，结果表明：在７种野生种中，Ｄｅｎｄｒａｎｔｈｅｍａｉｎｄｉｃｕｍ、Ｄ．ｖｅｓｔｉｔｕｍ和Ｄ．ｎａｎｋｉｎｇｅｎｓｅ与栽培菊花亲缘关系最近，而Ｄ．ｚａｗａｄｓｋｉ与栽培菊花亲缘关系最远。前３种野菊与栽培菊花间的遗传距离小于０．４０，而Ｄ．ｚａｗａｄｓｋｉ与栽培菊花间的遗传距离大于０．５０。根据上述数据及以往研究结果，使用ＲＡＰＤ数据对菊花起源问题进行了探讨，提出栽培菊花主要起源于Ｄ．ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｄ．ｖｅｓｔｉｔｕｍ和Ｄ．ｎａｎｋｉｎｇｅｎｓｅ．

辣椒基因组DNA提取与RAPD分析

采用液氮－ＳＤＳ法、ＳＤＳ法和氯化苄法对辣椒的ＤＮＡ进行了提取。结果表明：液氮－ＳＤＳ法提取的ＤＮＡ具有典型的天然ＤＮＡ分子的标准紫外吸收光谱，其Ａ２６０／Ａ２８０在１．６０～１．７０之间，Ａ２６０／Ａ２３０在１．５～１．８之间，１００ｍｇ叶子ＤＮＡ产量为６０～９０μｇ。用该法提取的辣椒ＤＮＡ适于进行ＲＡＰＤ分析。ＳＤＳ法、氯化苄法不适于辣椒ＤＮＡ的提取。