核桃DNA的提取及RAPD体系的优化

采用CTAB法和改进的CTAB法,从叶片中提取核桃基因组DNA,比较其分离效果,结果表明:改进的CTAB 法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染,并以此为模板进行RAPD反应,对RAPD反应程序中 的一些重要参数进行摸索和优化试验,建立适合于核桃的RAPD-PCR反应体系,以进行该树种的分子标记研究。

红花基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

用多种方法提取红花老叶及嫩叶DNA,进行比较,最后确定老叶DNA的提取用高盐低pH法,嫩叶用Michael等的方法。设计两次正交实验来确定红花RAPD体系中各成分的浓度,最终确定了一个既稳定又能扩增出最多条带的适合红花的RAPD最优体系,即25μL反应液中,dNTP200μM,Mg2+1.5mM,引物0.8μM,Taq酶1U,模板30～60ng。

濒危物种胡杨和灰叶胡杨总DNA提取及RAPD体系优化

以濒危物种胡杨和灰叶胡杨硅胶干燥的叶片为材料,研究其总DNA提取方法及RAPD-PCR体系优化条件。结果表明,用改良CTAB法提取的DNA适用于胡杨和灰叶胡杨的RAPD分析。优化的胡杨和灰叶胡杨RAPD-PCR体系为:20μL的反应体系中含Mg2+2.5 mmol·L-1、dNTP 0.15 mmol·L-1、引物0.2μmol·L-1、模板DNA100 ng和1.5 U Taq DNA聚合酶。用6条多态性引物对优化体系的稳定性进行检测,结果显示扩增结果稳定,多态性丰富。该优化体系为在分子水平开展胡杨和灰叶胡杨的保护生物学研究提供了技术支持和参考。

长白山杜鹃花基因组DNA提取及RAPD体系的建立

采用改良的CTAB法提取杜鹃花的基因组DNA,所得的DNA纯度高、质量好,可用于RAPD分析。筛选出的杜鹃花RAPD反应的最佳体系为25μL反应体系中包括模板DNA20～200 ng,引物10pmol,dNTPs100μmol·L-1,TaqDNA聚合酶0.5U,Mg2+2.5 mmol·L-1,10×buffer缓冲液2.5 mmol·L-1,其余部分用无菌超纯水补充。PCR扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性1 min,37℃退火1min,72℃延伸2min,40次循环;72℃最终延伸7 min。应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好,为长白山杜鹃花品种鉴定、分类的研究提供了一定基础。

扁豆RAPD体系优化的探讨

以两个扁豆地方品种为材料,进行RAPD反应体系、程序的优化和引物的筛选,结果表明,在20μl的反应体系中,Taq酶浓度、Mg2+浓度、引物浓度、dNTP浓度分别为3.0 U,2.5、0.25、0.15 mmol/L,模板DNA浓度为60 ng,反应循环数为45个循环。在这种条件下能获得理想的扩增结果,利用该体系进行引物筛选得到46条多态性引物。

黄瓜RAPD体系的优化与应用

以黄瓜为实验材料,采用改良CTAB法提取黄瓜基因组DNA进行RAPD分析,优化黄瓜RAPD体系的程序、模板、引物、dNTPs、Mg2+等参数。结果表明:黄瓜的PCR程序为94℃预变性3min;94℃变性30s,37℃复性30s,72℃延伸2min,循环40周,最后72℃延伸7min为佳;反应体系中,模板DNA的适宜浓度为2.5～5ng·μl-1,适宜的引物浓度为0.6μmol·L-1,dNTPs的适宜浓度为0.25mmol·L-1,Mg2+适宜浓度为1.875mmol·L-1。同时应用这一DNA扩增体系,进行黄瓜RAPD分析,筛选出了适用于申绿64的2条引物,最终得到了它的特异性条带。

长白山林下参基因组DNA提取及RAPD体系的优化

采用改良的CTAB法提取林下参的基因组DNA,所得的DNA纯度高、质量好,可用于RAPD分析.筛选出的林下参RAPD反应的最佳体系为20μL,反应体系中包括模板DNA 20ng,引物20 pmol,dNTPs 0.187 5 mmol/L,TaqDNA聚合酶1.5 U,Mg2+2.0 mmol/L,10×Reaction Buffer 2.0 mmol/L,其余部分用无菌超纯水补充.PCR扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1 min,37℃退火1 min,72℃延伸2 min,40次循环,72℃最终延伸7 min.应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好,为通过分子标记获得丰富的林下参遗传信息奠定了基础.

枣树基因组DNA提取方法及RAPD体系的建立

以8个枣树品种的嫩叶为材料,比较了不同的DNA提取方法,结果表明:采用改良的CTAB法提取的DNA纯度和产率,虽然不比改良SDS的高,但适宜RAPD分析.在20μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为:引物0.2 pmol.L-1、Mg2+2.0 mmol.L-1、dNTP200μmol.L-1、TaqDNA聚合酶1.2 U.改良的CTAB法是枣树RAPD分析基因组提取DNA的最好方法.

湖南地方辣椒品种RAPD体系的正交优化研究

以辣椒DNA为模板，对影响辣椒RAPD扩增的重要参数进行了优化试验，以期建立辣椒RAPD反应的最佳体系。通过采用正交试验设计的方法，对辣椒RAPD条件进行了优化，结果表明：最佳的辣椒RAPD的反应体系（15μL）中含有1×buffer，MgCl22．67mM，dNTPs0．13mM，Primer0．5μmol／L，Taq0．75U／μL，DNA40-50ng。适宜扩增条件为94℃预变性4min，再进入40个PCR循环94℃变性1min，37℃退火45s，72℃延伸1min，72℃延伸10min,4℃保存。

观赏竹芋DNA的提取与RAPD体系优化

文章用多种方法对观赏竹芋进行DNA的提取和RAPD体系优化研究,结果表明CTAB法较适合于观赏竹芋DNA的提取,RAPD体系优化还有待进一步确定。

硅胶干燥罗布麻叶片DNA提取及RAPD反应体系建立

【目的】得到适用于罗布麻RAPD的最优体系。【方法】以伊犁地区新源县罗布麻硅胶干燥叶片为材料,采用TIANGEN试剂盒提取罗布麻基因组DNA,得到满足RAPD(Random amplified polymorphic DNA)分析的罗布麻基因组DNA。【结果】通过单因素优化实验,得到罗布麻RAPD分析的最佳反应体系为:Mg2+(2.0mmol/L)、dNTPs(0.5 mmol/L)、primer(0.4 mmol/L)、DNA(1μL)、Taq酶取1μL、10×buffer取1μL,总反应体系为10μL;扩增程序为:在94℃下预变性,然后进行42个循环(94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2min),最后在72℃延伸7 min。【结论】提取的罗布麻总DNA均有较高的质量,适合RAPD分析;Tiangen植物基因组DNA提取试剂盒对罗布麻基因组DNA有着良好的提取效果;对罗布麻RAPD-PCR中Mg2+、dNTPs、DNA聚合酶和引物浓度进行优化,较为理想的各因子用量和扩增程序为:Mg2+(2.0 mmol/L)、dNTPs(0.5mmol/L)、primer(0.4 mmol/L)、Taq酶(0.5 U/μL)、DNA(40 ng),总反应体系为10μL;扩增程序为:在94℃下预变性5 min,然后进行42个循环(94℃变性30 s、38℃退火30 s、72℃延伸2 min),最后在72℃延伸7 min。

塔里木盆地荒漠区柽柳属植物总DNA提取及RAPD体系优化

本研究以干旱荒漠盐生植物柽柳的幼嫩叶片为实验材料,探究摸索其总DNA的提取方法与RAPD-PCR的反应体系及扩增条件。结果表明,改良CTAB-高盐沉淀法较好地提取出了柽柳植物的总DNA,其产量、质量均有明显提高,比较适合于多数柽柳属植物的DNA提取;同时,通过单因素试验比较优化筛选出了适合于柽柳植物RAPD分析的最佳的PCR反应体系与扩增条件,其25μL的反应体系中包含有Mg2+=2.5 mmol/L、d NTPs=0.25 mmol/L、引物=0.30μmol/L、Taq DNA聚合酶=1.5 U、模板DNA=200 ng;其最适扩增条件为95℃预变性4 min,94℃变性30 s、36℃退火40 s、72℃延伸1 min、40个循环;最终在72℃下延伸10 min,4℃下保存;另外,通过6条多态性引物的扩增效果证实该优化体系比较稳定,扩增条件比较合适,能够满足多数柽柳植物分子多态性的检测要求。

回归分析在辣椒品种RAPD反应体系优化中的应用

以辣椒(CapsicumannuumL.)为材料,采用回归分析的方法对RAPD体系进行优化研究。结果表明在体积为20μl反应体系中,主要因子的优化组合是:Mg2+、dNTP、Taq酶、引物、模板DNA等的浓度分别为3mmol/L、0.3mmol/L、1.3U、0.4μmol/L和64ng;热循环程序为:94℃预变性2min,94℃变性30s,40℃退火1min,72℃延伸90s,47个循环,最后72℃延伸10min。通过对24个辣椒品种进行遗传多样性分析,证明该优化体系是稳定可靠的。

人源细粒棘球蚴的RAPD分析体系建立

目的建立PCR-RAPD反应体系,提升细粒棘球蚴随机扩增多态性DNA(RAPD)遗传多态性研究的稳定性,为研究细粒棘球蚴的分类学以及包虫病的分子流行病学奠定基础。方法采用改进的酚-氯仿抽提法提取细粒棘球蚴基因组DNA,用单因素筛选方法建立PCR-RAPD分析体系。结果采用改进的酚/氯仿抽提方法提取细粒棘球蚴基因组DNA质量高,适用于PCR-RAPD扩增分析;在25μL体系中,RAPD-PCR扩增反应各成分的最佳浓度为:dNTP 0.2-0.3 mmol/L、Taq酶2.5U、随机引物0.8-1.4μmol/L,模板为60ng。PCR扩增最佳条件为:95℃预变性5min;94℃变性30s、32℃退火45s、72℃延伸1min、共35个循环;最后72℃延伸10min;初步从20条引物中筛选出11条带型丰富的随机引物。结论酚-氯仿适用于提取细粒棘球蚴基因组DNA,优化的RAPD反应体系和筛选出的随机引物适合进行细粒棘球蚴RAPD遗传多态性分析。

朝鲜白头翁RAPD反应体系的优化

采用改进的CTAB法提取朝鲜白头翁的基因组总DNA,建立朝鲜白头翁RAPD分析的PCR反应体系,成功进行RAPD扩增.筛选出的最佳PCR反应体系为:25μL反应体系中包括模板DNA 20ng,dNTP 200μmol/L,引物0.4μmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,Taq酶1 U,10×Buffer 2.5μL,其余部分为无菌重蒸馏水.

茶树RAPD分析体系的优化

以福鼎大白茶为材料 ,采用美国的PTC 10 0 Tm热循环仪 ,对茶树RAPD分析中影响PCR扩增结果的主要因素进行了研究 ,确定了茶树RAPD的最适反应体系和扩增程序 ,即在 30 μl反应体系中 ,含 40ng模板 ,2mmol/LMgCl2 ,各 0 .2mmol/LdNTPs、0 .15 μmol/L引物和 1.5UTaqDNA聚合酶 ;扩增程序为 :第 1步预变性94℃ ,180s ;第 2步变性 92℃ ,5 0s;第 3步退火 35℃ ,5 0s ;第 4步链延伸 72℃ ,10 0s ;循环 41次 ,后延伸 72℃ ,30 0s .

油菜RAPD反应体系的优化研究

针对 RAPD反应体系中 Taq聚合酶、d NTP和引物这 3个影响较大的因素 ,设计了一组 3因素 3水平试验 .根据试验结果 ,筛选出了油菜 random amplified polymorphic DNA(RAPD)反应体系中 3因素的最佳浓度配比 ,即 Taq 1.6 U ,d NTP 0 .2 mm ol/ L ,引物 0 .3μm ol/ L .

柱花草RAPD反应体系的建立及其8个品种遗传多样性分析

采用两种不同的方法分别从柱花草嫩叶及种子萌发芽中提取了高质量的DNA ,并对柱花草RAPD反应中的各组分浓度及热循环因素进行优化 ,建立了柱花草RAPD反应的最佳条件。在此基础上 ,用 2 0条随机引物对 8个柱花草品种进行了RAPD扩增 ,结果表明 ,其多样性达 5 1 .9% ,品种间的遗传相似系数在 0 .5 3～0 .88之间 ;根据非加权成对平均数法 (UPGMA)进行分类 ,获得了品种聚类树形图 ,8个柱花草品种均被明显分开。

土壤微生物RAPD分析体系的优化研究

采用正交实验设计,对影响土壤微生物RAPD扩增体系的Mg2+、dNTP浓度及引物浓度进行了研究,同时对退火温度、延伸时间及循环次数进行摸索。结果表明,适宜土壤微生物PCR扩增反应在25μl体积中进行,包括7ng土壤微生物DNA样品、20pm随机引物l、.5uTaq酶、3.0mmol.L-1Mg-CL2和0.2mmol.L-1dNTP。PCR扩增反应进程如下:94℃3min,使土壤DNA变性;然后再进行39个循环,每个循环包括94℃1min,37℃40s,72℃90s,结束后72℃延伸7min。

辣椒RAPD反应体系研究

建立了辣椒RAPD反应体系 ,即在Williams等体系的基础上 ,以改进了的Pich和Schubert的方法提取的DNA为底物 ,2 5μL反应混合物中含 2 0ngDNA、1 .5mmol/LMgCl2 。利用该体系所获得的RAPD图谱重复性好、稳定性强。