余甘子基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以余甘子叶片为材料,研究了余甘子基因组DNA提取方法及RAPD反应条件.结果表明,采用改良的SDS方法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD-PCR分析.在25μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为:0.6mmol·L-1Mg2+、500-600μmol·L-1dNTP、300nmol·L-1随机引物、25ngDNA、1.00-1.25UTaqDNA聚合酶.

紫花苜蓿RAPD反应条件优化

以“中苜一号”、“大西洋”、“渭南”3个苜蓿品种为材料 ,对 RAPD反应条件中的 Mg Cl2 浓度、d NTP浓度、随机引物浓度、模板 DNA用量、Taq DNA聚合酶用量以及扩增缓冲液浓度分别进行梯度试验。结果表明 ,该反应体系的体积为 2 5 μL,Mg Cl2 浓度为 2 .7mm ol/ L,d NTP浓度为 15 0 μmol/ L,随机引物浓度为 0 .192 μm ol/ L,Taq DNA聚合酶用量为每一反应体系 2 U,扩增缓冲液浓度 (以 KCl浓度为指标 )为 5 0 mm ol/ L,模板 DNA用量为 12 0 ng。通过试验建立了一套稳定的 RAPD反应体系。

鼠尾草属植物基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以鼠尾草属植物叶片为材料,提取基因组DNA,并对RAPD反应条件进行了系统优化。结果表明,采用核DNA法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为:20μl反应体系中,10×buffer2.0μl,模板DNA20ng,Mg2+浓度2.0mmol/L,引物浓度0.6μmol/L,dNTPs浓度0.2mmol/L,Taq酶1.0U。扩增反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min;40个循环;72℃后延伸10min,4℃保存。

百合属RAPD反应条件优化的研究

以百合DNA为材料,对影响其RAPD反应体系中的6个主要因素(模板DNA、Mg2+、TaqDNA聚合酶、引物、dNTPs、退火温度)进行优化,最终确定了百合RAPD反应的最佳体系(25μL)为:40 ng模板DNA,1.5 mmol/L Mg2+,1.0 U TaqDNA聚合酶,1.0μmol/L引物,200μmol/L dNTPs,引物E 13的最适退火温度为37.3℃。该体系的建立为今后应用RAPD技术鉴定百合属植物的种质资源和遗传多样性研究奠定了基础。

索科线虫RAPD反应条件优化

以中华卵索线虫为材料，研究索科线虫DNA的提取以及对RAPD的影响因素，包括模板DNA、Mg^2＋、dNTP、引物和Taq聚合酶浓度等，探索最佳反应条件，构建了适于索科线虫RAPD分析的稳定的反应体系．25pL反应体系中，含模板DNA20～40ng，10×PCR缓冲液2．5μL，MgCl2 2．0mmol／L，dNTP150 μmol／L，引物0．3μmol／L，Taq聚合酶1U．实验证明，在对索科线虫进行RAPD分析时，采用优化的反应条件，规范实验操作，使用同厂家同批次的试剂，宴验结果就会具有很好的重复性和稳定性．

紫花苜蓿RAPD反应条件优化

以"中苜一号"、"大西洋"、"渭南"3个苜蓿品种为材料,对RAPD反应条件中的MgCl2浓度、dNTP浓度、随机引物浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量以及扩增缓冲液浓度分别进行梯度试验。结果表明,该反应体系的体积为25μL,MgCl2浓度为2.7 mmol/L,dNTP浓度为150μmol/L,随机引物浓度为0.192μmol/L,TaqDNA聚合酶用量为每一反应体系2 U,扩增缓冲液浓度(以KCl浓度为指标)为50mmol/L,模板DNA用量为120ng。通过试验建立了一套稳定的RAPD反应体系。该反应体系扩增效果好。

巨龙竹基因组DNA的提取及RAPD反应条件的优化

用改良CTAB法从巨龙竹硅胶干燥的叶片中提取基因组DNA,成功地进行RAPD扩增。通过正交法对RAPD反应条件优化,6个试验因子的最适条件为:模板DNA1～1.5ng/μl,引物0.8～1.0μmol/L,dNTPs0.1～0.15mmol/L,Mg^(2+) 2.0～2.5mmol/L,Taq酶0.5～1.0U,退火温度35～36℃。

麻竹RAPD反应条件的优化

以麻竹DNA为模板,对影响麻竹RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立麻竹RAPD反应的最适体系。最终得出的麻竹RAPD反应体系为:20μL反应体系,2μL10倍反应缓冲液,模板含量为50ng,2 5mmol·L-1的Mg2+,1 5U的Taq酶,dNTP为1 75mmol·L-1,引物浓度为0 4μmol·L-1。优化后的RAPD反应程序为:94℃3min→[94℃1min→37 5℃1min→72℃1min20sec]40个循环→72℃8min→4℃保持。

甘薯叶RAPD反应条件的优化

以甘薯叶为试材 ,系统分析了MgCl2 浓度、dNTP浓度、随机引物用量、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶浓度对RAPD反应的影响 ,建立了一套稳定的RAPD反应体系。该体系反应体积为 2 5 μl:含 2 5 μlPCRBuffer,MgCl2浓度为 3nmol μl,dNTP浓度为 0 4nmol μl,随机引物用量为 40ng ,模板DNA用量为 40ng,TaqDNA聚合酶浓度为0 2 5U。

白菜RAPD反应条件的优化

以芜菁、大白菜及其杂交 1代为试材 ,系统分析了 Mg Cl2 浓度、d NTP浓度、随机引物浓度、模板 DNA用量、Taq DNA聚合酶浓度以及不同来源扩增缓冲液对 RAPD反应的影响 ,建立了一套稳定的 RAPD反应体系。该体系反应体积为 2 0μL,Mg Cl2 浓度为 1 .5mmol/L ,d NTP浓度为 2 0 0μmol/L ,随机引物浓度为 0 .4μmol/L ,模板 DNA为 2 0 ng,TaqDNA聚合酶为 6.67μmol/( L· min)。在 8种热循环条件下 ,该体系具有稳定的重现性 ,其扩增程序为 :94℃ /1′→ 36℃ /2 0″→ 72℃ /1 0″预扩增 2循环 ;94℃ /1 0″→ 36℃ /1 5″→ 72℃ /70″扩增38循环 ;72℃

甘薯RAPD-PCR反应条件的优化

以徐薯22的基因组DNA作为PCR反应模板,以随机引物进行RAPD-PCR反应,通过设置TaqDNA聚合酶加量、MgCl2浓度、dNTPs浓度、模板DNA加量、引物加量的不同梯度,探索出一套适合甘薯RAPD-PCR的最优反应条件。试验结果表明,最优反应条件为反应体系25.0μL,2.5μL的PCR 10×Buffer、0.15U的Taq DNA聚合酶、3.0 nmol·μL-1的MgCl2、0.6 nmol·μL-1的dNTPs、40 ng的DNA模板、40 ng的RAPD引物。

西施舌基因组DNA的提取及其RAPD反应条件的优化

通过实验比较获得了一种高效、简便的西施舌基因组DNA的提取方法,以该法提取的基因组DNA为模板,对西施舌RAPD分析中的DNA模板浓度、镁离子浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Taq酶浓度进行了研究,初步确定了适于西施舌RAPD分析的最佳反应体系:25μL反应体系中,含模板DNA 25 ng,10×PCR缓冲液2.5μL,dNTPs 0.3 mmol/L,MgCl22.5 mmol/L,引物15 ng,Taq DNA聚合酶1.5U。

荷斯坦奶牛随机扩增多态DNA(RAPD)反应条件的优化

以中国荷斯坦奶牛为试验材料,研究了Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶,以及退火温度对RAPD反应的影响,建立一套适合中国荷斯坦牛的最佳RAPD反应体系。反应总体积为20μL,Mg2+浓度为2.5mmol/L,TaqDNA聚合物浓度为1U,引物浓度为2μmol/L,dNTPs浓度为400μmol/L,模板DNA浓度为100ng。PCR反应程序:94℃预变性2min→40循环(94℃变性1min→36℃退火1min→72℃延伸1min)→72℃延伸5min。

RAPD在蔬菜种子纯度鉴定中应用的反应条件优化

随着分子生物学的发展 ,RAPD(随机扩增多态性DNA)在越来越多的领域得到应用 ,但在蔬菜种子纯度鉴定方面 ,国内外报道较少 .为了更好地将RAPD方法应用于蔬菜种子纯度鉴定 ,就反应条件进行了探索 .以几种蔬菜种子为材料 ,使用进口PCR仪 ,在对几种蔬菜种子进行RAPD分析过程中 ,从DNA提取方法 ,模板DNA量 ,Mg2 +浓度 ,Taq DNA聚合酶的量 ,dNTPs浓度 ,随机引物浓度及反应缓冲液的量等几个方面进行研究 .从而确定了最适的反应条件 。

猪链球菌RAPD分析反应条件优化的研究

为了建立猪链球菌的基因分型方法 ,对影响猪链球菌RAPD分析的两个主要因素进行了反应条件的优化 ,结果在 2 5 μl反应体系中DNA模板的添加量为 5 0ng ,Mg2 +的添加量为 2 5mmol L时 ,可获得理想的扩增结果 ,并筛选出了多态性好且稳定的随机引物 ,为猪链球菌的基因分型方法的建立奠定了基础。

皮下盘菌属及其近似类群RAPD-PCR反应条件的优化

以悬钩子皮下盘菌等总基因组DNA为皮下盘菌属(Hypodermade Not.)及其近似类群RAPD体系优化的模板,对模板DNA浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度等反应体系以及退火温度和时间、延伸时间、循环次数等扩增程序条件进行优化,寻找出适合此类菌物RAPD-PCR反应的最佳反应体系和最佳扩增程序。

荷斯坦奶牛RAPD反应条件的优化

以中国荷斯坦奶牛为实验材料,研究了Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶,以及退火温度对RAPD反应的影响,建立一套适合中国荷斯坦牛的最佳RAPD反应体系。反应总体积为20μL,Mg2+浓度为2.5mmol/L,TaqDNA聚合酶浓度为1U,引物浓度为2μmol/L,dNTPs浓度为400μmol/L,模板DNA浓度为100ng。PCR反应程序:94℃预变性2min→40循环(94℃变性1min→36℃退火1min→72℃延伸1min)→72℃延伸5min。

三江白猪组织基因组提取及RAPD反应条件的优化

本试验从三江白猪组织中提取总DNA,获得较高质量的模板样品。并对RAPD反应的条件进行了优化,提高RAPD分析的可靠性和重复性。确保三江白猪遗传分析的真实性和准确性,为进一步的研究提供参考条件。

RAPD法研究穗花杉遗传多样性的反应条件优化

以改进CTAB法抽提的中国特有濒危植物穗花杉嫩叶总DNA为模板,进行随机扩增多态性DNA(RAPD)最佳条件优化,结果表明:RAPD分析最佳反应体系为10×Buffer缓冲液2μL,模板70ng,Mg2+2.0mmol/L,dNTPs0.2mmol/L,引物0.60μmol/L,Taq酶1.5U,PCR反应体积为20μL.最佳扩增程序为94℃5min,1个循环;94℃1min、37℃1min、72℃2min,40个循环;72℃10min,1个循环.

具有催化熊果苷酰化反应能力的微生物全细胞培养条件的优化

熊果苷是一种具有抗炎、抑菌、镇咳、美白等多种药理活性的糖苷类化合物,但其脂溶性差、生物利用度低,限制了其应用范围。全细胞催化其酰化反应,可获得具有生物活性好及生物利用度高的熊果苷酯衍生物。由于目前全细胞原始培养基配方所得的细胞生物量较低,故该研究以熊果苷辛酰化为反应模型,以米曲霉为菌种,探究了全细胞培养条件对细胞生物量及其催化效率的影响,以期获得较多生物量、较高催化活性的全细胞催化剂。结果表明,米曲霉在6.0 g/L大豆油、7.0 g/L胰蛋白胨、5.0 g/L(NH_(4))_(2)SO_(4)和0.2 g/L CaCl2的培养基中,于30℃、180 r/min培养48 h,米曲霉全细胞生物量达到6.28 g/L,较初始培养基提高了4.39倍,熊果苷转化率达99.55%。该研究设计的可催化熊果苷酰化反应的新型微生物全细胞培养体系,具有成本低、高效、高选择性等优点,为熊果苷酯衍生物的工业化制备提供了有效途径。