小麦雄性不育材料RAPD扩增体系研究

以光敏雄性不育系A31及其恢复系1376为材料,使用美国MGREACHE公司生产的PTC-200型PCR,对影响RAPD扩增的因素进行了比较研究,确定了模板、Mg2+、dNTPs、引物和TapDNA聚合酶的适宜浓度和最佳的循环次数,实验结果表明在25μL反应体系中使用20～40ng的模板DNA,1.5～2.0mmol/L的Mg2+,0.3～0.4mmol/L的dNTPs,0.15～0.20μmol/L随机引物,1.0～1.5单位TaqDNA聚合酶;反应条件为94℃预变性5min,然后进行94℃45s,36°45s,72°90s,45个循环后,再在72℃延伸10min,小麦雄性不育材料RAPD扩增效果较好。

大白菜RAPD扩增体系的优化研究

以大白菜 341 1 - 7自交系为材料 ,使用 PE公司生产的 Thermal Cycler480型 PCR仪 ,对影响大白菜 RAPD扩增的因素进行了研究 ,确定了模板 ,Mg2 +,d NTPs,引物和 Taq DNA聚合酶的适宜浓度和最佳的循环次数 .实验结果表明 ,在 2 5μL反应体系中使用 2 0— 60 ng的模板 DNA,1 .5— 2 .0 mmol/L 的 Mg2 +,0 .1 5— 0 .2 5 mmol/L d NTPs,0 .8— 1 .0 μmol/L随机引物 ,1 .0— 1 .5 U Taq DNA聚合酶 ;在 94℃下预变性 5 min后执行 94℃ 1 min,37℃ 1min,72℃ 2 min,35个循环 ,最后 72℃再延伸 5 min的条件下 ,大白菜的