维甲酸相关孤儿核受体C可通过抑制糖酵解来调节宫颈癌细胞增殖

目的:探讨维甲酸相关孤儿核受体C(RORC/RORγ)对宫颈癌细胞Siha和HeLa的增殖抑制作用及相关机制。方法:采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测RORC对宫颈癌细胞增殖的抑制作用;采用葡萄糖检测分析试剂盒进行细胞内糖代谢检测分析;采用蛋白质印迹法(Western印迹)检测RORC、葡萄糖转运因子1(GLUT1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的变化。结果: CCK-8检测结果显示,RORC能明显抑制宫颈癌细胞Siha和HeLa细胞增殖( P<0.05)。糖代谢检测结果显示,RORC能使宫颈癌细胞葡萄糖摄取水平降低(P<0.05)。Western印迹检测结果显示,RORC可使宫颈癌细胞内GLUT1、LDHA和HIF-1α蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论: RORC可通过降低宫颈癌细胞Siha和HeLa糖代谢水平来抑制细胞增殖。

加权基因共表达网络分析筛选结肠腺癌预后相关的免疫标志物

目的寻找结肠腺癌(COAD)免疫相关预后标志物,以期能够准确预测COAD患者预后。方法基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析COAD患者免疫相关差异基因,通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)与COX回归分析得到风险模型,根据风险值的中位值将患者分为高、低风险组,比较两者预后,在基因表达数据集(GEO)数据库中验证模型。结果通过分析共得到1015个免疫相关差异基因。COX回归分析得到由维甲酸受体相关孤核受体C(RORC)、富含亮氨酸重复序列Fli-I相互作用蛋白2(LRRFIP2)、半乳糖凝集素4(LGALS4)构成的风险模型,高风险组较低风险组预后较差并在GEO中得到验证,通过单因素与多因素COX分析发现模型可作为COAD患者独立预后风险模型。结论通过免疫相关预后差异基因建立模型,可以预测COAD患者预后。

基于FoxP3、RORγt及相关细胞因子探讨半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎的干预机制

目的基于叉头框蛋白P3(FoxP3)、RAR相关孤儿受体γt(RORγt)及相关细胞因子探讨半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎(CAG)的干预机制。方法将48只大鼠随机分为空白组6只和模型制备组42只,模型制备组以脱氧胆酸钠加氨水联合法建立CAG模型。造模成功后,除去意外死亡及用于模型验证的12只大鼠,将剩余的30只大鼠随机分为模型组、半夏泻心汤低剂量组、半夏泻心汤中剂量组、半夏泻心汤高剂量组、叶酸组,各6只。给予空白组和模型组大鼠灌胃生理盐水,给予叶酸组大鼠灌胃叶酸,分别按照4.185 g/kg、8.370 g/kg、16.740 g/kg给予半夏泻心汤低剂量、半夏泻心汤中剂量、半夏泻心汤高剂量组大鼠灌胃半夏泻心汤,均连续干预12周。实验期间观察各组大鼠一般情况。给药结束后,取各组大鼠胃黏膜组织观察病理学变化及细胞凋亡情况,并检测FoxP3 mRNA、RORγt mRNA表达水平,取血清标本检测白细胞介素(IL)-10、IL-17、转化生长因子β(TGF-β)含量。结果与空白组相比,模型组大鼠毛色泛黄且光泽度下降,食欲降低,大便稀溏,肛周潮湿,体质量下降,胃黏膜固有层腺体数量减少,凋亡细胞增多,血清IL-10、IL-17、TGF-β含量及胃黏膜组织FoxP3 mRNA、RORγt mRNA表达水平均升高(均P<0.05)。与模型组比较,半夏泻心汤各剂量组和叶酸组大鼠毛色光泽度及大便性状有所改善,食欲增大,肛周毛发干燥,体质量增长,胃黏膜固有层腺体数量不同程度增加,凋亡细胞减少,血清IL-10、IL-17、TGF-β含量及胃黏膜组织FoxP3 mRNA、RORγt mRNA表达水平均下降(均P<0.05)。在半夏泻心汤各剂量组中,半夏泻心汤低剂量组上述指标改善最为明显。结论半夏泻心汤能够有效改善CAG大鼠的临床症状和病理改变,低剂量的半夏泻心汤可获得最佳的干预效果。半夏泻心汤干预CAG的机制可能与其下调大鼠胃黏膜Foxp3、RoRγt的mRNA表达及相关细胞因子的表达有关。

全反式维甲酸抑制IL-23/IL-17通路促进小鼠移植皮肤存活的研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)灌胃对小鼠同种异基因皮肤移植存活时间的影响及白细胞介素(IL)-23、IL-17通路在其中的作用。方法以DBA/2小鼠为供者,Babl/c小鼠为受者建立皮肤移植模型。随机将受者分为对照组、小剂量组和大剂量组,分别在术前1 d至术后14 d或判定皮肤死亡之日每天给3组小鼠分别灌胃注射玉米油、10 mg/kg和30 mg/kg ATRA玉米油溶液。术后观察各组皮肤移植物存活时间,皮肤组织切片检测病理改变,酶联免疫吸附试验检测血清IL-23和IL-17水平,实时荧光定量PCR检测移植皮肤中IL-23、转录因子孤核受体(ROR)γt和IL-17 mRNA表达。结果与对照组比较,小剂量组和大剂量组皮肤移植存活时间延长(P<0.05),炎症细胞浸润及组织破坏程度轻,血清IL-23水平降低(P<0.05),而两治疗组间差异无统计学意义。对照组、小剂量组及大剂量组血清IL-17水平依次降低(P<0.05)。小剂量组和大剂量组皮肤移植物中IL-23、RORγt和IL-17 mRNA表达水平均较对照组低(P<0.05),而两治疗组间差异无统计学意义。结论 ATRA灌胃可显著延长小鼠移植皮肤存活时间,其机制可能与抑制IL-23、RORγt、IL-17 mRNA表达和蛋白分泌有关。

IL-38对类风湿关节炎患者辅助性T细胞17转录因子的影响

目的研究类风湿关节炎(RA)患者白细胞介素-38(IL-38)的表达水平,并探讨IL-38对辅助性T细胞17(Th17)细胞转录因子(RORC、STAT3)的影响。方法收集RA患者30例,为RA组,30例体检中心的健康人群作为正常对照组。采用实时荧光定量PCR检测IL-38、RORC、STAT3mRNA水平;ELISA法检测血清IL-38蛋白水平;采用t检验或Mann-Whitney秩和检验。结果(1)实时荧光定量PCR结果显示RA患者IL-38基因表达水平(2.92±1.96)显著低于正常对照组(5.79±3.55),差异有统计学意义(Z=-1.28,P<0.05);RA患者IL-38蛋白表达水平(0.44±0.03)显著低于正常对照组(0.72±0.58),差异有统计学意义(Z=-1.59,P<0.05);(2)RA患者RORC、STAT3基因表达水平(6.29±3.98)、(2.72±2.11)显著高于正常对照组(1.6±0.95)、(0.69±0.67),差异有统计学意义(Z=-1.36,P<0.05;Z=-1.24,P<0.05);且RORC、STAT3基因表达水平分别与IL-38水平呈负相关(r=-0.31,P<0.05;r=-0.25,P<0.05);(3)在体外实验中,RA患者外周血中加入IL-38后,RORC、STAT3基因表达水平(1.87±1.59)、(0.58±0.13)较RA患者(6.29±3.98)、(2.72±2.11)明显下降,差异有统计学意义(Z=-1.48,P<0.05;Z=-1.37,P<0.05)。结论在RA患者体内IL-38浓度下降,使得Th17细胞转录因子RORC、STAT3表达增加,可诱导经典JAK/STAT3信号传导通路活化,促进Th17细胞大量分化,导致关节滑膜增殖、软骨侵蚀和全身性的炎症反应,从而引发RA的发病。

红景天含药血清对肿瘤坏死因子α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的探讨红景天含药血清对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)增殖的影响。方法制备空白组、模型组、雷公藤多苷组(9.45 mg·kg^(-1))及红景天低、中、高剂量组(1.05、2.1、4.2 g·kg^(-1))大鼠含药血清;体外培养HFLS-RA,以20 ng·mL^(-1)TNF-α及10%不同组含药血清对HFLS-RA进行干预。采用MTT法检测各组含药血清对HFLS-RA细胞的增殖作用;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)、转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素10(IL-10)的含量;PCR法检测细胞中维甲酸受体相关孤儿受体γt(ROR-γt)、信号转导及转录激活因子3(Stat3)、叉头样转录因子3(Foxp3)mRNA表达;Western Blot法检测细胞中ROR-γt、Stat3、Foxp3蛋白表达。结果与空白组比较,模型组培养HFLS-RA 24、48 h后细胞增殖水平明显升高(P<0.01),ROR-γt、Stat3 mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),IL-6、IL-17水平升高(P<0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达下调(P<0.01),TGF-β、IL-10水平降低(P<0.01)。与模型组比较,红景天各剂量组HFLS-RA细胞增殖水平降低(P<0.01),ROR-γt、Stat3mRNA及蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),IL-6、IL-17水平降低(P<0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达上调(P<0.01),TGF-β、IL-10水平升高(P<0.01)。结论红景天含药血清可抑制TNF-α诱导的HFLS-RA细胞的异常增殖,其机制可能与下调ROR-γt、Stat3表达及上调Foxp3表达有关。

Th17/IL-17与病毒性肝炎的研究进展

病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的一组全身性传染病。其中乙型、丙型多呈慢性感染,少数病例可发展为肝硬化或肝细胞癌。辅助性T细胞(Th17)细胞是近年来发现的不同于Th1、Th2及调节性T细胞(Treg)细胞的CD4+T细胞亚群,IL-17是Th17细胞的重要效应因子,具有强大的促炎作用,维甲酸相关核孤儿受体γt则是其重要的转录因子。有研究发现Th17细胞能够抑制T淋巴细胞的细胞不良反应,增加肝炎病毒的持续感染,导致肝炎的慢性化。

记忆T细胞在哮喘小鼠不同时间的表达量

目的研究哮喘模型小鼠肺脏和脾脏组织中记忆T细胞(Tm)不同时期的表达规律以及可能作用机制。方法将84只小鼠随机分为对照组和模型组,每组42只。模型组予以腹腔注射和雾化吸入卵清白蛋白,对照组则予以等量磷酸缓冲盐溶液。于激发前1日开始,每隔2 d处死2只小鼠,直至激发后20 d。收集小鼠脾脏和肺脏,用流式细胞术检测脾脏和肺脏中Tm的水平,实时定量聚合酶链式反应检测T盒子转录因子(T-bet)、维甲酸相关孤儿受体γ亚型(RORγt)mRNA的水平。结果激发后第7天肺脏中CD4^+Tm-(辅助T细胞)Th比例达到最大值为(46.20±2.18)%,第9天脾脏中CD4^+Tm-Th比例为(38.35±1.60)%;第3天肺脏中CD8^+Tm-Th比例达到最大值为(42.29±0.97)%,第7天脾脏中CD8^+Tm-Th比例达到最大值为(31.26±1.04)%。对照组和模型组肺组织中T-bet mRNA的表达量分别为1.00±0.01,0.73±0.07;RORγt mRNA表达量分别为1.02±0.01,2.65±0.33,模型组与对照组比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 CD4^+Tm可能参与哮喘小鼠气道的持续炎症反应,CD8^+Tm可能表达于哮喘的急性发作时期,其作用机制可能与Th17、Th1细胞的分化有关。