电化学发光PCR定量检测H-ras癌基因点突变

提出了一种电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法, 该法可用于定量检测基因点突变. 其检测H-ras癌基因PCR扩增产物的灵敏度可达100 fmol;线性范围为0.1～500 pmol. 用ECL-PCR分析法对膀胱癌组织中H-ras癌基因进行突变检测, 只需要10 μL样品, 20 min的孵育时间和30 s的采集时间, 得出20例膀胱癌样品中有7例存在点突变, 通过标准曲线方程定量计算出突变样品的量. ECL-PCR分析方法在灵敏度、线性范围、分析时间等方面都优于传统的检测方法, 是一种安全、快速、灵敏、定量检测基因点突变的分析方法.

胰腺癌ras癌基因及p53抑癌基因表达的临床意义

目的研究ras癌基因及p53抑癌基因在在胰腺癌表达的临床意义．方法胰腺石蜡包埋标本55例，包括胰腺癌32例，癌切缘未受浸润的胰腺组织12例，急慢性胰腺炎7例，正常胰腺4例，标本均经病理学证实，用免疫组织化学ABC法对上述标本的ras癌基因及p53抑癌基因表达进行检测．结果在32例胰腺癌中，ras和p53基因的阳性表达率分别为71．9％和28．1％，高于胰腺炎和癌切缘组织（P＜0．05）ras，p53基因表达与患者性别、年龄、肿瘤所在部位及大小和初发症状无关（P＞0．05），p53基因表达与临床分期和病理分级相关（P＜0．05），p53基因表达阳性者其临床分期较晚期，细胞分化较差，而ras基因表达仅与病理分级有关（P＜0．05）．P53基因表达与癌肿可切除率相关（P＜0．05），凡癌肿能切除者多为p53基因表达阴性者.p53基因表达亦与淋巴结转移有关（P＜0．05），其表达阳性者多已有淋巴结转移．ras与p53基因表达之间存在正相关关系．结论ras与p53基因表达可以反映胰腺癌的生物学行为，对胰腺癌的诊断和治疗有一定指导意义．

宫颈癌及慢性宫颈炎ras癌基因产物p21和DNA倍体的研究

应用细胞免疫荧光技术和流式细胞术对宫颈癌和慢性宫颈炎组织ras癌基因产物p21蛋白的表达量进行了定量研究，并分析了rasp21的表达量与DNA倍体和细胞增殖指数的关系。结果显示：宫颈癌rasp21的表达量（荧光指数FI）明显高于慢性宫颈炎组织，rasp21表达的荧光指数随组织学分级升高而增高。DNA倍体和rasp21的表达量有密切关系。

胰腺癌反义K-ras癌基因片段的分离和克隆

目的:分离及克隆胰腺癌基因组中K-ras基因片段,构建重组反义K-ras癌基因逆转录病毒载体,并探讨其意义。方法:设计2对PCR引物,分别在上下游引物中引进BamHⅠ和EcoRⅠ位点,以胰腺癌细胞株BxPC-3基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子1及侧翼序列,并采用重组DNA技术将目的基因插入逆转录病毒载体LZRSpBMN-Z中,并经菌液PCR和限制性内切酸酶切鉴定。结果:K-ras基因外显子1及侧翼序列已成功地克隆入LZRSpBMN-Z中。结论:LZRSpBMN-Z是胰腺癌反义基因治疗中新型候选载体之一。应用PCR方法获取反义K-ras目的基因外显子1方便可行,可用于重组反义K-ras癌基因逆转录病毒载体的构建。

Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响

目的 :研究ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对细胞膜磷脂酶D(PLD)活性的影响。方法 :用ras癌基因和nm2 3抑癌基因构建的重组质粒 ,分别转染人肝癌细胞株 772 1,建立了高表达ras癌基因和nm2 3抑癌基因的H ras 772 1和nm2 3 H 772 1细胞株 ,测定 772 1、mock细胞 (空载体转染的 772 1细胞 )、H ras 772 1和nm2 3 H 772 14种细胞中 ,细胞膜PLD酶活性和PLD酶蛋白表达量。结果 :在H ras 772 1细胞中 ,PLD酶活性比 772 1、mock细胞中PLD酶活性显著升高。nm2 3 H 772 1细胞中 ,酶活性却显著降低。但在二种细胞中 ,PLD酶蛋白的量未见显著变化。结论 :ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对PLD酶活性的影响 ,可能主要是通过影响PLD酶活性的调节因素来实现的。

外阴白斑和鳞癌细胞中ras癌基因产物P_(21)的检测

报道102例外阴白斑和鳞癌细胞中ras癌基因产物P_(21)的检测。检测结果显示,正常组与各组存在显著差别(P<0.05～0.01),良性病变与不典型增生、鳞癌组之间存在显著差别(P<0.05～0.01),不典型增生与鳞癌组之间无显著差别(P>0.05),说明P_(21)ras检测可作为良恶性病变之间的鉴别手段。

沥青工和焦炉工血清中ras癌基因P21蛋白的检测

本研究应用ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术，对１１名焦炉工和１１名沥青工血清中ｒａｓ癌基因表达产物Ｐ２１蛋白进行检测，有２Ｐ２１阳性，接触组Ｐ２１蛋白水平显著高于对照组．沥青高于焦炉工。结果表明，沥青烟气对Ｐ２１蛋白表达水平的升高有较强的作用。

大鼠心肌肥厚时心脏心钠素、ras癌基因的表达

心钠素是由心肌细胞合成和分泌的一种循环激素，具有强大的利钠、利尿、舒张血管、抑制肾素—血管紧张素系统等作用，在高血压、心肾功能不全等疾病的发病过程中具有重要作用。本工作采用分子杂交技术，研究了心室超负荷、高血压心肌肥厚时，大鼠心肌心钠素基因以及ｒａｓ癌基因的表达。实验证明：ａ，部分结扎肾动脉上方的腹主动脉可明显升高血压和左心室／体重比值；血浆心钠素水平可由未结扎时的１２７．００士２１．８ｐｇ／ｍｌ升至结扎１周时的４６１．１０士１０２．９０ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０１）。ｂ．Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果发现，心房心钠素ｍＲＮＡ在腹主动脉部分结扎后１周内没有明显的改变，两周时明显升高；心室心钠素ｍＲＮＡ在结扎１周时开始出现，４周时达到高峰。牛磺酸可明显促进心室心钠素ｍＲＮＡ的表达，肼苯哒嗪则明显抑制心室心钠素的转录。ｃ．应用心钠素限制性内切酶片段长度多态性分析，还发现遗传性高血压大鼠的染色体ＤＮＡ应用ＰｓｔＩ酶切后，较ＷＫＹ大鼠缺失一条３．０ｋｂ的片段。ｄ．部分结扎腹主动脉或注射α－肾上腺素能受体激动剂—新福林，可促进心肌ｒａｓ癌基因的转录。这种增加在结扎后４小时内即可发生，且可持续３周以上。其ｒａｓｍＲＮＡ的变化?

Ras癌基因及nm23抑癌基因对细胞膜磷脂酶D活性的影响

目的 为研究ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对细胞膜磷脂酶D (PLD)活性的影响。方法 用ras癌基因和nm2 3抑癌基因构建的重组质粒 ,分别转染人肝癌细胞株 772 1,建立了高表达ras癌基因和nm2 3抑癌基因的H ras/772 1和nm2 3 H/772 1细胞株 ,测定 772 1、mock细胞 (空载体转染的 772 1细胞 )、H ras/772 1和nm2 3 H/772 1四种细胞中 ,细胞膜PLD酶活性和PLD酶蛋白表达量。结果 在H ras/772 1细胞中 ,PLD酶活性比 772 1、mock细胞中PLD酶活性显著升高。nm2 3 H/772 1细胞中 ,酶活性却显著降低。但在两种细胞中 ,PLD酶蛋白的量未见显著变化。结论 ras癌基因和nm2 3抑癌基因的高表达对PLD酶活性的影响 ,可能主要是通过影响PLD酶活性的调节因素来实现的。

微波抗原修复法检测ras癌基因P21的实验探讨

应用微波抗原修复法在福尔马林固定、石蜡包埋组织中进行了ｒａｓ基因表达蛋白Ｐ２１的免疫组化检测，并观察了不同染色程序染色结果的影响。结果显示，在同一组织切片上，经两次微波处理，再经两次免疫组化染色，可明显提高染色效果和阳性检出率，且不增加背景着色，是一种值得推荐的方法。

乳腺良恶性病变ras癌基因产物P^（21）及性激素受体检测的比较研究

用ｒａｓ癌基因产物Ｐ^（２１）单克隆抗体对１０４例乳腺良恶性病变的石蜡包埋切片进行了ＡＢＣ法免疫组织化学染色，同时对其中６０例乳腺癌新鲜组织冰冻切片进行了荧光素标记法的ＥＲ和ＰＲ检测．结果提示Ｐ^（２１）阳性表达与乳腺肿瘤的良恶性程度和患者性激素水平有关，并认为Ｐ^（２１）免疫组化检测可反映乳腺肿瘤ｒａｓ癌基因活性，表达的强弱与性激素状态和预后可能有关．

ras癌基因与化学致癌剂诱导的肿瘤

本文综述了各种化学致癌剂诱导的动物肿瘤中ｒａｓ癌基因的活化情况，探讨了ｒａｓ癌基因在多步骤致癌作用过程中的作用及特点。

ras癌基因产物p21蛋白在脑胶质细胞瘤中的表达

目的:研究ras-p21蛋白在脑胶质细胞瘤中的表达。方法:用SP免疫组化方法检测79例脑胶质细胞瘤中r&s-p21蛋白的表达。结果:胶质瘤p21蛋白总阳性表达率为36.71％。其中星形细胞瘤、室管膜瘤及髓母细胞瘤中的表达率分别为44％、31.29％和15.38％,但三者之间统计学上无显著性差异(P>O.05)。Ⅰ、Ⅱ级肿瘤与Ⅲ、Ⅳ级肿瘤表达率之间统计学上也无显著性差异(P>0.05)。但高强度表达绝大多数见于Ⅲ、Ⅳ级肿瘤。结论:ras-p21蛋白的表达与胶质瘤的组织学类型及分化程度无关,但表达量能反映肿瘤的恶性程度。

ras癌基因蛋白在子宫颈癌表达与预后意义的研究

ｒａｓ癌基因蛋白在子宫颈癌表达与预后意义的研究王翠莲１李宗铉２作者单位：１．长治医学院病理教研室（长治０４６０００）２．中国医科大学病理教研室随着生物学技术的发展，癌基因和抑癌基因的研究正日益成为肿瘤分子生物学的研究热点，已知ｒａｓ癌基因的点突变可以...

点突变ras癌基因全cDNA真核表达重组体的构建及诱导NIH3T3细胞转化的研究

将活化癌基因Ｔ２４－ｒａｓ的全ｃＤＮＡ序列正向插入真核载体ｐＭＡＭｎｅｏ，构建成重组质粒ｐＭＡＭｎｅｏ－Ｔ２４－ｒａｓ．将该质粒转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，通过药物筛选，建成细胞系３Ｔ３（Ｔ２４）．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明外源Ｔ２４－ｒａｓ基因已整合于受体细胞染色体中．３Ｔ３（Ｔ２４）细胞表现出形态学方面的明显变化：具失去接触抑制能力，且在裸鼠体内致瘤等恶性行为．本文构建的Ｔ２４－ｒａｓ基因真核表达重组体和建立的转化细胞系可用于肿瘤的诊断、预防、治疗及抗肿瘤药物的筛选、评估等研究．

ras癌基因产物p21在胃癌组织中表达的意义

ｒａｓ癌基因产物ｐ２１在胃癌组织中表达的意义江西医学院一附院（南昌市３３０００６）徐萍吕农华王崇文祝金泉ｐ２１ｒａｓ是由ｒａｓ癌基因所编码的一组密切相关的蛋白质，是ｒａｓ癌基因表达的产物，其分子量为２１ＫＤ（１），正常定位在细胞膜表面，当它受到某些因...

胰腺癌、结肠癌患者对突变ras癌基因蛋白特异的T细胞及抗体反应

ras癌基因往往因发生特异性点突变而激活。ras癌基因突变最常是在其编码的p21蛋白第12或61位发生单个氨基酸置换，从而增强p21蛋白的GTP酶活性并激活其转化活性。在人类的多种肿瘤中均可发现突变ras基因的存在。目前已报道大约90％胰腺癌，60％甲状腺癌,50％结肠癌和40％髓样白血病患者中可检出突变ras癌基因存在,

子宫内膜癌ras癌基因产物p21和DNA倍体的研究

为了观察ｒａｓ癌基因产物ｒａｓｐ２１在子宫内膜癌及癌前病变组织中的表达，及ｒａｓｐ２１与ＤＮＡ倍体的关系，应用流式细胞术和细胞免疫荧光技术检测了３２例子宫内膜癌、２６例癌前病变和１０例正常内膜组织中的ｒａｓｐ２１的表达情况。结果为正常内膜组织中ｒａｓｐ２１表达阴性，子宫内膜癌ｒａｓｐ２１的表达高于癌前病变。ｒａｓｐ２１表达的荧光指数随子宫内膜癌组织学分级的升高而增加，但与临床分期、肌层浸润和淋巴结转移无关。ＤＮＡ倍体与ｒａｓｐ２１的表达量有关。表明ｒａｓｐ２１在子宫内膜癌和癌前病变有较高的表达，这可能与子宫内膜癌的发生有关。检测ｐ２１蛋白和ＤＮＡ倍体有助于判断肿瘤的恶性程度和预后。

ras癌基因与P_(53)抑癌基因及其产物在胃肠肿瘤中的表达及临床研究

取胃肠癌手术标本159例,其中胃癌20例,结肠癌71例,直肠癌68例。男性94例、女性65例。用LSAB免疫组化法检测P_(53)、rasP_(21)蛋白在159例癌组织及89例移行区粘膜中的表达。结果表明:肿瘤区P_(53)、P_(21)的表达分别为55.35％(88/159)、70.44％(112/159)。移行区分别为25.84％(23/89)、60.67％(54/89)。P_(53)表达在肿瘤区明显高于移行区(P<0.01)。有淋巴结转移组P_(53)表达率为94.12％(32/34);无淋巴结转移组为44.80％(56/125),两者间差异非常显著((P<0.01)。除4例直肠癌外,随肿瘤浸润深度增加,P_(53)阳性表达显著增加,P_(53)与P_(21)共同表达率为40.25％(64/159),明显高于P53单独表达15.09％(24/159),(P<0.01)。P_(21)在移行区有高度表达,其单独表达率为30.19％(48/159),与P_(53)共同表达率差异无显著性。P_(53)蛋白表达在女性患者为66.15％(43/65),男性为47.87％(45/94),女性明显高于男性,(P<0.05),而P_(21)表达差异无显著性。两种基因的表达与肿瘤发生部位、病理类型、组织学分化关系不显著。结果提示:胃肠癌的发生与P_(53)和ras基因突变有关。P_(53)突变大多与其它基因突变共存,并且主要发生于肿瘤的进展和转移间;ras基因突变发生于恶性转化前。因此进行ras基因、P_(53)基因突变的检测对于临床早期?