应用组织芯片技术检测胃癌组织中PTEN、Survivin和p21ras蛋白的表达

目的 利用组织芯片技术观察胃癌组织Survivin蛋白、PTEN蛋白和p21ras蛋白的表达，探讨三者的相互关系及三者与胃癌病理学指标的相关性。方法 收集江汉大学附属医院1988～2003年行胃癌根治性手术切除的、有完整病理学检查资料的标本140例。构建胃癌组织芯片，采用免疫组织化学法检测PTEN蛋白（17A）、Survivin蛋白和p21ras蛋白（F132）在胃癌组织中的表达情况。结果 构建420点和288点组织芯片2枚，140例胃癌中有118例符合分析要求（组织芯片利用率为84．3％）。PTEN阳性率为76．3％（90／118），Survivin阳性率为52．5％（62／118），p21ras阳性率为78．8％（93／118）。PTEN与患者年龄，肿瘤浸润深度、组织学分型相关（均P〈0.05）。Survivin与UICC淋巴结分期、组织学分型相关（均P〈0．05）。p21ras与年龄相关（P〈0．05）。PTEN与Survivin、PTEN与p21ras、Survivin与p21ras均呈正相关（均P〈0.05）。Cox回归模型多因素分析，UICC淋巴结分期与预后相关（P〈0．05）。结论 PTEN蛋白表达是推测进展期胃癌的分子标志物。Survivin蛋白表达是推测胃癌淋巴结转移及转移程度的分子标志物。PTEN及Survivin蛋白表达与胃癌组织学分型有关。PTEN及p21ras蛋白表达与胃癌患者年龄有关。PTEN蛋白、Survivin蛋白及p21ras蛋白在胃癌中呈正相关关系。UICC胃癌淋巴结分期是重要的预后指标。

Ras蛋白信号途径及其对线虫生长发育的调控作用

Ras蛋白是一个分子质量为21kD左右的单体GTP酶,具有两种构象:GTP结合构象(Ras.GTP)及GDP结合构象(Ras.GDP),这两种构象在一定条件下可发生互变。由生长因子介导的Ras信号传导途径是诸多信号途径中与细胞增殖、分化密切相关的重要信号途径。受体型TPK/Ras/MAPK信号转导途径是是目前研究的最为清楚的受Ras蛋白调节的信号传导途径,该途径包括受体型酪氨酸蛋白激酶(RTK)、接头蛋白、鸟苷酸释放因子(GNEF)、Ras蛋白以及MAPK级联反应体系。目前,TPK/Ras/MAPK信号转导途径在秀丽杆线虫(Caenorhabolitis elegans中研究的最为清楚:Ras信号途径对于许多发育进程是必需的,包括阴门、子宫、交合刺、P12以及排泄管细胞的诱导分化;控制着性肌原细胞迁移、轴突导向;对细胞减数分裂粗线期具有促进作用。对C.elegans的研究加深了对TPK/Ras/MAPK信号途径结构、突变体表型以及与其他信号途径的互作的了解,将会促进Ras信号途径对植物寄生线虫调控作用的研究。

Ras蛋白激活物类似物-1基因在胃癌细胞株中的表达及生物学意义

目的:研究Ras蛋白激活物类似物-1基因(Ras protein activator like-1,RASAL1)在正常胃黏膜上皮细胞、胃癌细胞株中的表达情况及其生物学意义。方法:采用RT-PCR和Western blot分别检测高分化胃腺癌细胞株MKN-28、中分化胃腺癌细胞株SGC-7901、低分化胃腺癌细胞株BGC-823和正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中RASAL1基因在mRNA水平和蛋白水平的表达,应用基因测序法检测上述3种胃癌细胞株中K-Ras基因第一外显子第12密码子点突变情况,并分析其意义。结果:RT-PCR和Westernblot检测结果显示,与正常胃黏膜上皮细胞相比,在3种不同分化胃腺癌细胞株中,RASAL1基因的表达在mRNA水平和蛋白水平均下调(P<0.05),分化程度越低表达下调越明显;测序结果表明3种胃腺癌细胞株中均未发现K-Ras基因第一外显子第12密码子点突变。结论:RASAL1基因在含野生型K-Ras的胃癌细胞中呈低表达状态,其表达水平与胃癌的恶性程度有一定的关系。

氟对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度的氟化物对体外培养的成骨细胞Ras蛋白表达的影响。方法:采用酶消化法分离乳鼠成骨细胞,经剂量分别为0、2.5、5.0、10.0和20.0mg/L的氟化钠(NaF)作用后,采用免疫组织化学法和Western blot法检测染氟后小鼠成骨细胞中Ras蛋白表达水平。结果:免疫组织化学法结果显示0、2.5及5.0mg/L实验组成骨细胞中Ras均有较强阳性表达,其余实验组的为弱阳性表达;各染氟组阳性表达细胞数与0mg/L比较差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠细胞的Ras蛋白相对定量结果显示:2.5、5.0mg/L染氟组大于0mg/L,其它染氟组均小于0mg/L,染氟组的蛋白相对表达量有随着剂量增加而逐渐降低的趋势。结论:氟作用于成骨细胞后可以影响Ras蛋白的表达,表现为双向作用,即低剂量的氟促进Ras的蛋白表达,高剂量抑制Ras的蛋白表达。

Ras蛋白在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的探讨Ｒａｓ蛋白在中耳继发性胆脂瘤上皮中的表达，分析其与胆脂瘤上皮增生调节中的可能作用。方法应用免疫组化ＳＰ染色法和计算机图像分析法，检测２２例胆脂瘤上皮和１０例正常外耳道皮肤中Ｒａｓ蛋白的表达情况。结果胆脂瘤上皮各层细胞均存在Ｒａｓ蛋白的较强表达，其中１５／２２为胞膜着色，５／２２胞膜胞浆均着色，２例仅胞浆着色，正常外耳道表皮中Ｒａｓ蛋白主要表达于胞膜，以基底层显色为主；两种组织Ｒａｓ蛋白阳性表达的平均积分吸光度分别为０．８７０和０．４６３，差异呈高度显著性。结论中耳继发性胆脂瘤上皮中存在Ｒａｓ蛋白的高表达，说明胆脂瘤上皮具有高度增生性。

Ras蛋白与肝细胞癌变过程中的信号转导

细胞信号转导(signal transduction)是指胞间通讯的激素以及外界环境因子作用于细胞表面(或胞内受体),跨膜形成胞内第二信使,通过信息分子级联传递,诱导基因表达和引起生理反应的过程。细胞信号转导在应答环境因素和调节基因表达、生理反应的同时,不仅维持着细胞的正常代谢,而且最终决定了细胞增殖、生长、分化、衰老和死亡等生命的基本现象。 肝细胞癌变的主要特征是肝细胞异常增殖,癌基因的激活和抑癌基因失活是引起肝细胞癌变的原因,而癌基因和抑癌基因的变异引起细胞内信号转导途径异常激活则是肝细胞癌变的主要机制之一。 RasP21是肝细胞增殖信号传导的关键因子。

尼古丁对脐静脉内皮细胞蛋白激酶C和Ras蛋白活性及胞浆钙浓度的影响

为研究尼古丁对血管内皮细胞胞内游离钙、蛋白激酶C(PKC)和Ras蛋白的作用 ,用激光共聚焦显微镜观察细胞内游离钙离子浓度的变化 ,用γ 32 P ATP掺入法检测PKC活性 ,用GST RBD沉淀并纯化活化的Ras蛋白和Western印迹杂交法检测Ras蛋白含量。观察到 (1～ 5 ) 10 - 4 mol L尼古丁使人脐静脉内皮细胞 [Ca2 + ]i 迅速增加 ,峰值约超过基础值 5 0 %～ 2 0 0 % ,钙通道阻滞剂尼莫地平可拮抗尼古丁的此种效应 ;10 - 4 mol L尼古丁作用 1～ 12h后胞浆PKC活性明显降低 ;而胞膜PKC活性则升高。 10 - 4 ～ 10 - 3 mol L尼古丁作用于人脐静脉内皮细胞 10～ 30min可使活化的Ras蛋白含量增加。以上结果提示尼古丁可使人脐静脉内皮细胞 [Ca2 + ]i

桦菌芝多糖对HepA小鼠抑瘤率、HepA瘤细胞N-ras蛋白表达、SDS-PAGE血清蛋白组分的影响

目的:观察桦菌芝多糖对移植型腹水型肝癌(HepA)小鼠抑瘤率、HepA瘤细胞N-ras蛋白表达、SDS-PAGE血清蛋白组分的影响,为桦菌芝多糖抑瘤作用机制的揭示及临床应用提供实验依据。方法:将完整的肿瘤组织称重,计算抑瘤率;用SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中Ras蛋白的表达;通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,观察桦菌芝多糖对HepA瘤血清蛋白组分的影响。结果:桦菌芝多糖对HepA小鼠抑瘤率为39.75%;桦菌芝多糖组、猪苓多糖组Ras蛋白的表达量均明显低于阴性对照组(P<0.05);桦菌芝多糖对HepA小鼠血清蛋白组分有影响,在加样量相等的情况下,可使荷瘤阴性对照组与正常组比较在分子量140000处的特异深染组分变浅,并与正常组相近,说明桦菌芝多糖对此改变有恢复作用。结论:桦菌芝多糖对小鼠HepA瘤有明显的抑瘤效应,可降低Ras蛋白的表达,抑制HepA瘤细胞的增殖,使HepA小鼠血清异常蛋白组分(Mr140000)减少并趋于正常。

Ras蛋白异戊二烯化修饰与抗癌药物的设计

Ｒａｓ蛋白异戊二烯化修饰与抗癌药物的设计任力强（第四军医大学西京医院临床分子生物学研究室，西安７１００３２）关键词Ｒａｓ蛋白，抗癌药物哺乳动物细胞中的ｒａｓ基因编码一种ＧＴＰ结合蛋白，由于其第１２、１３或６１位密码子处的点突变使得它有转化哺乳动物细胞...

ras蛋白在食管癌及食管癌前病变组织中的表达

目的了解中国食管癌高发区食管癌变发生过程中癌基因ｒａｓ的变化。方法采用卵白素－生物素－辣根过氧化氢酶复合物（ＡＢＣ）方法测定食管癌高发区食管癌及癌前病变组织中癌基因ｒａｓ蛋白的表达状况。结果在正常食管上皮和癌前病变组织中未见ｒａｓ蛋白表达，而３６例食管癌组织有９例出现免疫阳性反应，其免疫阳性反应率为２５％。结论ｒａｓ癌基因表达是食管癌变晚期阶段的一个分子学变化。

Ras蛋白的异戊烯化和慢性肾脏病

异戊烯基团在相应转移酶的作用下，与机体特定的蛋白共价结合产生翻译后修饰，使该蛋白活化，具有生物活性。特别是Ras蛋白活化后锚定在细胞膜上，促进细胞信号转导，产生下游反应。其中蛋白共价的与异戊烯基团结合得到修饰就是异戊烯化。Ras蛋白的异戊烯化在机体生理病理的变化中起重要作用。

树舌多糖GF对HepA瘤细胞Ras蛋白表达的影响

研究应用免疫组化技术对HepA瘤细胞中Ras蛋白表达量进行分析 ,以进一步探讨树舌多糖抗肿瘤的机制。目的 :为探明树舌多糖GF对HepA瘤组织Ras蛋白表达的影响。方法 :用SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中Ras蛋白的表达。结果 :树舌多糖组、猪苓多糖组中Ras蛋白的表达量均显著低于模型组 (P <0 .0 1) ,树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论 :初步认为树舌多糖GF可通过降低Ras蛋白的表达 ,而抑制HepA瘤细胞的增殖。

食管鳞状细胞癌组织中Ras蛋白表达及其临床意义

目的探讨Ras蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法选取50例病理检查证实为食管鳞状细胞癌的患者,所有入选者均具有完整的临床资料,术前未接受过放射治疗、化学治疗及免疫治疗。采用免疫组织化学技术检测其组织中Ras蛋白的表达水平。结果 16例患者Ras蛋白高表达,阳性表达率为32.00%。Ras蛋白高表达者3 a生存率为12.50%(2/16),低表达者3 a生存率为44.11%(15/34),二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。Ras蛋白高表达者中位生存期为10.20个月,而低表达者中位生存期为26.04个月,相对危险度为0.373,95%可信区间为(0.175,0.793)。结论 Ras蛋白的表达程度可作为食管鳞状细胞癌患者预后的评价指标。

RAS蛋白的信号转导途径

细胞信号转导系统紊乱是肿瘤细胞生长的重要特征之一,ras基因及其编码的Ras蛋白参与体内多种细胞信号转导途径而发挥作用,本文着重介绍ras参与的几条信号转导途径及作用机制。

内镜下Lugol液染色联合ras蛋白检测对早期食管癌诊断的研究

目的探讨内镜下卢戈氏(Lugol)液染色联合ras蛋白检测对早期食管癌的诊断价值。方法将胃镜下有可疑食管病变的120例随机分为染色组和对照组,各60例。用复方碘溶液(Lugol)对染色组进行食管黏膜染色检查,并于不染色或淡染色区进行病理活检,行ras蛋白检测;对照组不行碘染色,仅根据临床经验进行病理活检。结果染色组不染色或淡染色38例,活检发现早期食管癌10例(16.67%),中重度异型增生12例(20.00%);对照组发现早期食管癌5例(8.33%),中重度异型增生6例(10.00%),两组食管癌诊断率比较差异有统计学意义(P<0.05)。在所有59例活检组织中,ras蛋白阳性18例(30.51%),其中中重度不典型增生和鳞癌组ras蛋白表达明显高于对照组(P<0.01)。结论通过染色内镜对高危易感人群进行筛检,对上述检查结果阳性患者行内镜下取活组织病理检查,同时进行ras蛋白分析,可以提高早期食管癌的诊断率。

Ras蛋白活化与肿瘤发生多药耐药的研究进展

Ras蛋白的异常激活或表达升高可能导致肿瘤的发生 ,近 10年来人们在Ras活化与肿瘤发生多药耐药 (MDR)关系的研究方面取得了明显进展。Ras活化诱发肿瘤MDR的机制主要集中在三个方面 :(1)Ras诱发P 糖蛋白高表达 ;(2 )Ras破坏细胞增殖与凋亡的稳态平衡 ;(3)Ras诱发谷胱甘肽S 转移酶高表达。

恶性浆膜腔积液脱落细胞中P21 ras蛋白表达状况及其意义

目的:检测浆膜腔积液脱落细胞P21 ras蛋白表达状况,探讨其对恶性浆膜腔积液的诊断价值．方法:将新鲜浆膜腔积液离心后收集脱落细胞。取部分细胞涂片进行常规细胞学诊断,据此将积液分为良性与恶性两组．对余下脱落细胞作“标准化”处理,包括去除红细胞、多聚甲醛固定、调整细胞浓度、制备细胞涂片,然后进行P21 ras蛋白免疫化学染色(SP法)．结果:共108例浆膜腔积液,恶性53例,良性55例．39例恶性积液P21 ras蛋白免疫化学染色阳性(73．6％),且多为强阳性或阳性;12例艮性积液P21 ras蛋白染色阳性(21．8％),且多为弱阳性或阳性,两组间阳性率(X2=29．02,P<0．001)及阳性强度(Uc=6．786,P<0．001)的差异均有显著性统计学意义．P21 ras蛋白免疫化学染色诊断恶性积液的敏感度为73．6％,特异度为78．2％,诊断符合率达75．9％．结论:浆膜腔积液中脱落细胞P21 ras蛋白免疫化学染色在肿瘤细胞多为阳性,良性细胞多为阴性,对恶性体腔积液的诊断有较大的价值．

ras蛋白的多碱性区、CAAX四肽与细胞膜的定位

哺乳动物的3种ras蛋白分子量皆为21000,分别称之为P21N-ras、P21K-ras和P21H-ras,它们经过转译后的加工过程,然后位于质膜的内面发挥作用。转译后的加工过程包括两大步骤:1.