RASSF1A及p53蛋白在胃黏膜病变中的表达及意义

Ras相关区域家族1A（RASSF1A）是新近发现的候选抑癌基因,其表达与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,与p53基因的相关性也日益受到广大学者的关注。本研究检测胃癌及相应正常组织中RASSF1A与p53蛋白的表达情况,以分析RASSF1A与p53在胃癌发生、发展中的作用。

Ras/ERK信号转导通路在肝纤维化发生发展中的作用

在肝纤维化的发病机制中,肝星状细胞(HSC)发挥关键的作用。各种细胞因子的分泌,引起胞外信息变化。细胞因子与HSC上的相应受体结合,激活多条信号转导通路,将胞外信息转导入核,调控基因的转录和表达,从而引起胶原分泌增多、细胞基质降解和沉积失衡。在参与肝纤维化发生发展的信号转导通路中,Ras/ERK信号转导通路介导的信号转导促使了肝纤维化的发生发展。

Ras/Raf/MEK/ERK通路靶点药物联合治疗新进展

Ras/Raf/MEK/ERK通路的异常与肿瘤的发生密切相关,由于其导致细胞增殖失控和凋亡受阻,因此可作为肿瘤治疗的一个靶点。目前在研究各靶点单药疗效的同时,更多的研究侧重于将对应Ras/Raf/MEK/ERK通路各靶点的药物与一般的放化疗、其他靶点药物和内分泌治疗等联合应用,并且取得了一定的进展。

HB-EGF对HSC-T6细胞Ras/ERK通路的激活及对MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)激活肝星状细胞(HSC)过程中Ras/ERK信号通路的变化和对金属基质蛋白酶(MMP)及其抑制物的影响。方法传代培养HSC-T6细胞,分空白对照组、HB-EGF处理组(20,40,80ng/mL),采用QRT-PCR法检测MMP-2、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)及表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达,并确定HB-EGF刺激HSC-T6Ras/ERK通路(ERK1、ERK2、P38MAPK)活化的最佳浓度及最佳时间,检测该通路活化情况。结果 QRT-PCR检测提示,MMP-2的表达随HB-EGF干预时间的延长增加,TIMP-1的表达随干预时间的延长递减;40ng/mL HB-EGF培养HSC-T6 48h后,EGFR mRNA的表达较空白对照组明显上调(P<0.05);选择40ng/mL HB-EGF培养48h为最佳刺激时间与浓度,该处理组ERK1mRNA的表达较空白对照组明显上调(P<0.05),但ERK2、P38MAPK的变化无统计学意义;Western-blot检测提示该处理组ERK1蛋白的表达较空白对照组上调(P<0.05)。结论HB-EGF可影响HSC-T6的MMP-2、TIMP-1的表达;HB-EGF通过促进HSC-T6表达EGFR、ERK1,有效激活细胞内Ras/ERK信号通路。

肿瘤候选抑制基因RASSF1A

新克隆的RASSF1A基因位于 3p2 1 3,是新的肿瘤候选抑制基因 ,能明显抑制肿瘤细胞生长。RASSF1A失表达见于多种实性肿瘤组织 ,与RASSF1A启动子甲基化密切相关。RASSF1A启动子甲基化检测可能是很有用的临床指标。

睾丸精原细胞瘤中p27^(kip1)、p21^(ras)、p16的表达及其临床意义

目的 探讨 p2 7kip1、p2 1ras、p16在精原细胞瘤中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化 S- P法检测 4 6例精原细胞瘤组织、10例正常睾丸组织 p2 7kip1、p2 1ras、p16蛋白的表达情况。同时用 PCR法检测 2 7例精原细胞瘤组织 p16和 p2 1基因的缺失情况。结果 p2 7kip1在精原细胞瘤组织中的阳性表达率为 4 8.9% (2 2 / 4 5 ) ,显著低于正常睾丸组织的 90 .0 % (P<0 .0 5 ) ,p2 7kip1蛋白在精原细胞瘤组织中的阳性表达与淋巴结和远处器官转移相关 (P<0 .0 5 ) ,与组织学分型无关 ;p2 1ras、p16蛋白在精原细胞瘤组织中的阳性表达率分别为 4 2 .2 % (19/ 4 5 )和 6 0 .0 % (2 7/4 5 ) ,与正常睾丸组织比较 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 p16、p2 1ras蛋白在精原细胞瘤组织中的表达与组织学类型及淋巴结转移无相关性 (P>0 .0 5 )。p2 1基因无纯合子缺失。p16基因纯合子缺失率为 4 4 .4 % (12 / 2 7) ,其缺失率与精原细胞瘤的组织学类型、淋巴结和远处器官转移无关。p2 7kip1、p2 1ras及 p16阳性表达率之间有相关性 (P<0 .0 5 )。结论 p2 7kip1蛋白的低表达或缺失可能与精原细胞瘤的发生、浸润转移有关 ,可作为估计精原细胞瘤预后的良好指标。 p16基因的缺失和表达下降可能是精原细胞瘤发生的早期事件。

AML病人骨髓miRNA-106b-5p和Rab10表达及意义

目的 探讨急性髓细胞白血病(AML)病人骨髓中miRNA-106b-5p和Rab10的表达及其临床意义。方法 收集AML初诊病人(初诊组)、完全缓解病人(缓解组)以及健康供者(对照组)的骨髓标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测3组标本miRNA-106b-5p和Rab10的表达。比较各组miRNA-106b-5p和Rab10的表达水平,分析初诊AML病人miRNA-106b-5p表达与Rab10表达之间的相关性,分析miRNA-106b-5p和Rab10表达水平与初诊AML病人临床指标的相关性。结果 对照组、初诊组、缓解组间miRNA-106b-5p和Rab10相对表达量比较差异有显著性(F=16.956、6.094,P<0.05);初诊组二者表达较对照组显著增高,缓解组较初诊组显著下降(t=2.122~6.608,P<0.05)。动态观察3例病人治疗前后miRNA-106b-5p和Rab10表达的变化,经治疗完全缓解后病人骨髓中二者的表达水平均显著降低(t=3.533、5.014,P<0.05)。通过多个microRNA靶基因预测网站预测得出Rab10为miRNA-106b-5p的下游靶基因。初诊AML病人骨髓中miRNA-106b-5p表达与Rab10表达呈正相关(r=0.919,P<0.05)。miRNA-106b-5p和Rab10的表达水平与初诊AML病人骨髓原始细胞比例、白细胞数、血小板数、血红蛋白含量及染色体核型均无相关性(P>0.05)。结论 miRNA-106b-5p和Rab10的表达与AML病情密切相关,miRNA-106b-5p可能作用于Rab10在AML的发病中发挥重要作用。

亚慢性铝染毒对大鼠海马长时程增强及小G蛋白RAS和细胞外调节蛋白激酶的影响

目的研究在亚慢性铝染毒致大鼠海马长时程增强（Long-term potentiation，LTP）损害的过程中，小G蛋白RAS及其下游的细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）活力的变化。方法健康成年雄性Wistar大鼠24只，随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组6只。采用腹腔注射麦芽酚铝[Al（mal）3]的方式对大鼠进行染毒，对照组给予生理盐水，低、中、高剂量组的染毒剂量分别为15、30和45 μmol/kg，连续染毒5 d后休息2 d，持续8周。染毒结束后采用在体海马CA1区LTP记录技术，记录兴奋性突触后电位（fEPSP）；然后断头取海马，并提取总蛋白，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）分别测定RAS和ERK活力。结果LTP检测结果显示，对照组在高频刺激（HFS）后1、30和60 min fEPSP幅度分别为1.90±0.19，1.64±0.15和1.54±0.08；低剂量组在60 min时fEPSP幅值是1.40±0.06，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0.05）；中剂量组在30 min和60 min时fEPSP幅值分别下降到1.33±0.20和1.12±0.07，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0.05）；高剂量组在30 min和60 min fEPSP幅值进一步下降到1.05±0.05和0.91±0.10，分别与对照组、低剂量组和中剂量组比较，差异有统计学意义（P〈0.05），在高频刺激后，随着染铝剂量的增加fEPSP幅值出现剂量依赖性的降低。ELISA检测结果显示，对照组、低、中、高剂量组大鼠的RAS活力分别为12 245±765、11 567±531、8 560±476和6 578±608，ERK的活力分别为0.35±0.02、0.31±0.03、0.23±0.02和0.16±0.02，与对照组和低剂量组比较，中剂量组与高剂量组RAS和ERK活力降低，差异有统计学意义（P〈0.05）；与中剂量组比较，高剂量组RAS和ERK活力降低，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论RAS及ERK与铝抑制大鼠海马LTP的机制有关，RAS-MAPK通路可能是铝致学习记忆损害的作用机制之一。

Ras蛋白在Lovastatin预适应心肌保护中的作用及其机制的研究

目的研究Ras蛋白在洛伐他汀（Lovastatin）预适应心肌保护中的作用机制。方法将24只Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为3组（n=8）：模型对照组（C）；洛伐他汀（Lovastatin）组（L），胃管直接灌注洛伐他汀15mg／（kg·d）2周；洛伐他汀（Lovastatin）复合L-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）组（N），洛伐他汀15mg／（kg·d）直接灌注2周同时腹腔注射L-NAME 30mg／（kg·d）；2周后建立在体急性缺血再灌注心脏模型，观察心肌组织Ras-GTPase蛋白表达以及心肌细胞凋亡情况。结果洛伐他汀预适应明显抑制缺血再灌注时期心肌组织Ras-GTPase蛋白表达（t=2．32，P〈0．05），并且减少缺血再灌注导致的心肌细胞的凋亡数（t=2．25，P〈0．05）。加用NO非选择性抑制性抑制剂L-NAME不影响上述结果。结论洛伐他汀（Lovastatin）预适应对大鼠心脏急性缺血再灌注时具有延迟性心肌保护作用。抑制Ras-GTPase蛋白表达及其信号传导可能是其心肌保护作用的机制，并且此心肌保护作用与NO无关。

PAX8、PAX2、p53和RAS蛋白在卵巢及输卵管组织中的表达对于高级别卵巢浆液性癌起源的意义

目的探讨配对盒基因8抗体（PAX8）、配对盒基因2抗体（PAX2）、p53和ras癌基因（RAS）蛋白在高级别卵巢浆液性癌（HGSC）患者的卵巢及输卵管组织中的表达，并分析其对于HGSC起源的意义。 方法 （1）组织标本：收集2015年1月—2016年1月广西医科大学附属肿瘤医院收治的34例卵巢恶性肿瘤患者的组织标本，以同期因卵巢良性疾病等行手术治疗患者的卵巢和输卵管无病变区域的组织标本10份作为对照。其中，卵巢组织标本的取材按左、右侧区分，输卵管组织标本的取材按左、右侧区分并按伞部、壶腹部、峡部解剖分段取材。34例卵巢恶性肿瘤患者中，上皮性恶性肿瘤29例（包括浆液性癌27例、黏液性癌1例、子宫内膜样腺癌1例）、非上皮性恶性肿瘤5例（均为性索-间质肿瘤）；27例卵巢浆液性癌患者中，HGSC 23例、低级别卵巢浆液性癌（LGSC）4例。（2）组织芯片：采用由山东大学齐鲁医院制作并赠送的组织芯片，该芯片收集了2005—2013年手术切除并经病理诊断明确为卵巢浆液性癌的组织标本153份。采用免疫组化SP法检测上述组织标本和组织芯片中PAX8、PAX2、p53和RAS蛋白的表达，（1）分析HGSC患者和对照妇女的卵巢和输卵管组织中PAX8、PAX2、p53及RAS蛋白的定位表达差异；（2）比较不同病理类型卵巢恶性肿瘤患者的卵巢和输卵管组织中PAX8、PAX2、p53及RAS蛋白表达水平的差异；（3）分析PAX8、PAX2、p53、RAS蛋白在HGSC患者输卵管组织中的表达水平与其对应卵巢组织中表达水平的相关性；（4）采用单因素生存分析法对组织芯片中卵巢浆液性癌患者的预后影响因素进行分析。结果（1）对照妇女的正常卵巢上皮细胞中PAX8、PAX2、p53、RAS蛋白均呈阴性表达，而正常输卵管上皮分泌型细胞中PAX8、PAX2、p53、RAS蛋白均呈棕褐色强阳性表达。HGSC患者的输卵管上皮分泌型细胞中及卵巢和输卵管的癌细胞中PAX8、PAX2、p53、RAS蛋白均呈棕褐色强阳性表达。（2）上皮性卵巢恶性肿瘤患者的输卵管组织中p53、RAS蛋白的表达水平均明显高于非上皮性卵巢恶性肿瘤患者（P〈0.05）；但两者的输卵管组织中PAX8、PAX2蛋白以及卵巢组织中PAX8、PAX2、p53、RAS蛋白的表达水平比较均无明显差异（P〉0.05）。HGSC患者的卵巢组织中PAX8、PAX2和p53蛋白的表达水平均明显高于LGSC患者（P〈0.05），RAS蛋白的表达水平明显低于LGSC患者（P〈0.05）；而两者的输卵管组织中PAX8、PAX2、p53、RAS蛋白的表达水平分别比较均无明显差异（P〉0.05）。（3）PAX8、PAX2蛋白在HGSC患者输卵管组织中的表达水平与其对应卵巢组织中的表达水平均呈明显正相关（r=0.422，P=0.045；r=0.693，P=0.000）；但p53和RAS蛋白在输卵管组织中的表达水平与其对应卵巢组织中的表达水平均无相关性（r=0.058，P=0.793；r=-0.190，P=0.384）。（4）单因素生存分析显示，卵巢浆液性癌患者的无进展生存时间与PAX8、PAX2、RAS蛋白表达均明显相关（P〈0.05）；而与年龄、手术病理分期、病理分化程度、淋巴结转移状态、术前化疗以及p53蛋白表达均无关（P〉0.05）。卵巢浆液性癌患者的总生存时间与PAX8蛋白表达有关，而与年龄、手术病理分期、病理分化程度、淋巴结转移状态、术前化疗以及PAX2、p53、RAS蛋白表达均无关（P〉0.05）。结论PAX8、PAX2、p53、RAS蛋白对于研究HGSC的起源定位于输卵管上皮分泌型细胞有着重要的意义，HGSC可能来源于输卵管，但需更深入的研究来证实；PAX8、PAX2、p53、RAS蛋白有望作为卵巢浆液性癌患者预后的预测指标。

Ras/MAPK信号通路参与Galectin-3介导大肠癌细胞系LoVo增殖调控的研究

目的:探讨Ras/MAPK信号通路是否参与了Galectin-3介导的大肠癌细胞系LoVo增殖的调控。方法:以未转染的及转染空质粒的LoVo细胞分别作为阴性对照组和阳性对照组,以前期实验中构建的Galectin-3shRNA序列并成功转染的LoVo细胞作为实验组,免疫印记方法分别检测Ras/MAPK信号通路中的ERK1/2及phospho-ERK1/2、MEK1及phospho-MEK1、K-Ras及PKC信号蛋白在干扰前后的表达情况。结果:ERK1及ERK2在干扰组表达水平与对照组相比明显减弱,F值分别为43.650和20.727,P<0.05。phospho-ERK1及phospho-E-RK2在干扰组表达水平与对照组相比明显减弱,F值分别为838.029和627.082,P<0.05。MEK1及phospho-MEK1、K-Ras、PKC蛋白激酶在干扰组的表达水平与对照组比较均显著减弱,F值分别为159.101、656.148、5737.496和663.855,P<0.05。两对照组比较差异无统计学意义。结论:ERK1/2及phospho-ERK1/2、MEK1及phospho-MEK1、K-Ras及PKC蛋白激酶在Galectin-3基因沉默中表达明显减弱,提示Ras/MAPK信号通路可能参与Galectin-3介导LoVo增殖的调控。

Kras、EGFR、BRAF基因突变检测及其应用研究进展

大量与药物治疗效果相关基因的发现推动了个体化医学的发展，同时也使得个体化治疗基因检测的重要性彰显出来。本文对人V—Ki—ras2Kirsten大鼠肉瘤基因（Kras）、表皮生长因子受体基因（EGFR）、鼠类肉瘤病毒菌癌同源物B1（BRAF）3个基因突变的检测及其与肿瘤治疗效果间的关系进行综述。

硫酸肝素对人肝癌HepG2细胞系增殖和凋亡的影响

目的 :探讨硫酸肝素对人肝癌HepG2细胞系增殖和凋亡的影响。方法 :体外观察硫酸肝素作用于人肝癌细胞系 (HepG2 )的细胞增殖、凋亡效应和细胞ras基因表达的变化关系。结果 :硫酸肝素能下调细胞HepG2的增殖能力及其细胞ras基因蛋白的表达并上调其细胞的凋亡率。结论 :硫酸肝素对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响与ras基因蛋白介导的信号转导有关。

肺癌中p21和p53的表达及其临床意义

目的 探讨 p2 1、p5 3在肺癌中的临床意义及其相互关系。方法 采用流式细胞术检测 30例冻存的肺癌及 10例相应远离肿瘤部位的肺组织中 p2 1、p5 3的表达。 结果 肺癌组织中p2 1、p5 3的阳性率分别为 73 3%、76 7% ,各指标相对含量 (FI值 )明显高于远癌肺组织 (P <0 0 1) ,两者表达无显著性相关 (P =0 0 6 ) ,且均与肺癌分型、分期、分化程度等无关联。p5 3表达在吸烟患者 (94 1% )高于不吸烟患者 (5 3 8% ,P <0 0 5 )。p5 3阳性者术后 4～ 5年存活率较低 ,p2 1与 p5 3共阳性者术后生存期更短 (P <0 0 5 )。 结论 p5 3异常表达与肺癌术后生存相关 ,联合考虑p2 1时 ,仍然有预后意义。

2014年中国KRAS基因突变检测室间质量评价

目的为保证KRAS基因突变检测质量，加强所使用试剂和方法的性能验证，本研究对2014年中国KRAS基因突变检测室间质量评价的总体情况及存在问题进行了分析和讨论。方法2014年两次室间质评样本盘均包含5支样本。要求各参评实验室收到样本后在规定的时间内检测样本并将检测结果上传至向中心数据库。依据回报结果计算各实验室和各检测试剂的成绩，汇总和分析每份样本的总体符合率、假阴性率和假阳性率。结果2014年两次室问质评分别收到58份和57份有效回报结果。检测结果完全正确实验室分别为79．31％（46／58）和94．73％（54／57）。阳性样本总体符合率为93．53％（217／232）和96．49％（165／171），阴性样本总体符合率为100％（58／58）和98．25％（112／114）。样本检测假阴性率分别为1．29％（3／232）和0％，假阳性率分别为4．14％（12／290）和3．15％（9／285）。结论各实验室在KRAS基因突变检测总体符合率上有显著提高，但假阳性和假阴性结果是影响KRAS基因突变检测的主要问题。各实验室需要标准化基因突变检测流程，严格执行扩增产物污染防治措施；各试剂厂家需要通过改良试剂探针设计，优化结果判读标准，最终提高KRAS基因突变检测质量。

miRNAlet7、Ras在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨miRNAlet7（1et7）、Ras在非小细胞肺癌中的表达及临床病理学意义。方法利用原位杂交方法检测let7、免疫组化方法检测Ras在68例非小细胞肺癌（肺癌组）及20例癌旁正常肺组织（对照组）中的表达。结果let7在肺癌组中的阳性表达率（39．7％）低于对照组（75．0％）（P〈0．05）、Ras在肺癌组中的阳性表达率（66．2％）高于对照组（25．0％）（P〈0．01）；let7阳性率与患者年龄、性别及肿瘤组织类型、分化程度、分期无关（P〉0．05），Ras阳性率与吸烟史、患者性别及肿瘤组织类型有关（P〈0．01），与肿瘤分化程度、淋巴结转移及临床分期无关（P〉0．05）；let7与Ras在非小细胞肺癌组织中表达呈明显负相关（r=-0．627，P〈0．01）；let7阳性表达组2年生存率明显优于阴性表达组（X2=4．84，P〈0．05）；Ras阳性表达与阴性表达组2年生存率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论let7的低表达、Ras的高表达参与了肺癌的发生发展，let7阳性表达与预后密切相关；Ras可协同参与肺癌的发生发展。

真核表达载体pcDNA3．1-RASSF1的构建及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的构建pcDNA3．1－RASSFl真核表达载体，并检测其对肝癌细胞系HepG2凋亡的影响。方法应用聚合酶链反应技术从人RASSFlcDNA中扩增出RASSF1基因后，以内切酶XhoI和EcoRI进行双酶切，将其克隆人用相同酶处理的载体pcDNA3．1；将重组质粒pcDNA3．1－RASSF1转染肝癌HepG2细胞，应用Westernblot法检测RASSF1的表达水平；用AnnexinV／PI法检测细胞的凋亡情况。结果酶切和测序结果表明，重组质粒pcDNA3．1．RASSF1构建成功；Westernblot法结果表明转染pcDNA3．1-RASSF1后HepG2细胞中RASSFl表达升高；AnnexinV／PI法用流式细胞术检测凋亡，空白组、pcDNA3．1组和pcDNA3．1-RASSFl组HepG2细胞的凋亡率分别为（5．8±0．42）％、（7．48±0．68）％和（35．1±3．15）％。结论真核表达载体pcDNA3．1-RASSF1构建成功；RASSF1蛋白在HepG2细胞中高表达，并促进细胞凋亡。

法尼基转移酶抑制剂——CAAX四肽类似物

法尼基转移酶抑制剂(FTIs)是一类以细胞信号转导分子Ras蛋白的修饰酶——法尼基(异戊二烯)转移酶(FTase)为药靶的抗肿瘤先导物。FTase催化Ras蛋白的法尼基化修饰,疏水性的法尼基可引导法尼基化Ras蛋白靶向定位于含有疏水基团的细胞膜而介导细胞信号传导。若变异Ras蛋白持续处于活化状态,细胞信号传导紊乱,可致细胞持续增生而发生肿瘤。通过抑制FTase活性、阻断Ras蛋白靶向定位,FTIs能够有效抑制肿瘤细胞增殖。目前许多人工合成寡肽类似物被设计为FTIs,本文综述了基于CAAX四肽类似物的FTIs研究进展。