稳定表达RAS鸟苷酸释放因子2肺癌细胞株的建立

目的构建带有GFP标签的RAS鸟苷酸释放因子2(RAS guanine nucleotide releasing factor 2,RASGRF2)真核表达质粒,并建立稳定表达RASGRF2的肺癌细胞株。方法用SgfⅠ和NotⅠ双酶切RASGRF2-pCMV6-Myc-DDK质粒,回收RASGRF2基因片段,亚克隆入pCMV6-GFP载体中,构建重组表达质粒RASGRF2-pCMV6-GFP,转染肿瘤细胞H1299,倒置荧光显微镜下观察RASGRF2蛋白的定位。经G418筛选并建立稳定表达RASGRF2的细胞株,RT-PCR及Western blot法检测RASGRF2的表达。结果经双酶切及测序证实RASGRF2基因成功克隆至真核表达载体pCMV6-GFP中;重组RASGRF2-GFP蛋白在H1299细胞中主要在胞质中表达;经RT-PCR及Western blot证实,RASGRF2在H1299细胞中稳定表达。结论成功建立了稳定表达RASGRF2基因的肺癌细胞株,为进一步研究RASGRF2基因的功能奠定了基础。

Ras鸟苷酸释放蛋白家族的功能研究新进展

Ras鸟苷酸释放蛋白家族(Ras guanyl nucleotide releasing proteins,Ras GRPs)是鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factors,GEFs)中的一员,由4种类型的蛋白质组成。Ras GRPs能通过交换鸟嘌呤核苷酸将Ras蛋白从无活性的GDP形式变成有活性的GTP形式,从而活化Ras。4种不同类型的Ras GRP蛋白拥有共同的分子结构。其结构包括一个由Ras交换中心和CDC25区域组成的催化中心,同时还拥有一对非典型的EF臂及C1端。异常表达的不同Ras GRP蛋白在不同的疾病发病过程中发挥作用。

Ras鸟苷酸释放蛋白1、垂体同源框1、消皮素D在皮肤黑色素瘤中的表达及相关性研究

目的探讨Ras鸟苷酸释放蛋白1(RASGRP1)、垂体同源框1(PITX1)、消皮素D(GSDMD)在皮肤黑色素瘤中的表达及诊断价值。方法选取2013年1月至2019年12月在该院诊治的72例皮肤黑色素瘤患者为研究组,对其癌组织、癌旁组织标本进行免疫组化染色,同时选取同期在该院进行整形手术的皮肤正常者40例为对照组。对待测标本中RASGRP1、PITX1、GSDMD表达进行检测,对比、分析RASGRP1、PITX1、GSDMD在不同临床特征皮肤黑色素瘤中的表达,探讨三者间的相关性及对皮肤黑色素瘤的诊断价值。结果与对照组比较,研究组癌组织中RASGRP1、PITX1表达降低,GSDMD表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。RASGRP1、PITX1、GSDMD的表达与皮肤黑色素瘤患者性别、年龄无关(P>0.05),与肿瘤最大径、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、其他部位转移、预后情况、临床分期有关(P<0.05),且肿瘤最大径≥2 cm、ClarkⅢ~Ⅴ期、低分化、淋巴结转移、其他部位转移、预后不良、Ⅳ期皮肤黑色素瘤患者RASGRP1、PITX1表达较低,GSDMD表达较高(P<0.05)。Pearson相关分析显示,RASGRP1与PITX1呈正相关(r=0.523,P=0.001),RASGRP1与GSDMD呈负相关(r=-0.612,P=0.001),PITX1与GSDMD呈负相关(r=-0.569,P=0.001)。RASGRP1、PITX1、GSDMD联合检测对皮肤黑色素瘤的诊断价值优于单项检测(P<0.05)。结论RASGRP1、PITX1在皮肤黑色素瘤组织中低表达,GSDMD呈高表达,RASGRP1、PITX1、GSDMD可作为皮肤黑色素瘤的检测指标。

鸟苷酸解离抑制因子-2真核表达载体构建及稳定转染A549细胞株的建立

目的构建Rab蛋白鸟苷酸解离抑制因子-2(GDI2)真核表达载体并建立稳定转染A549细胞株。方法聚合酶链反应(PCR)扩增GDI2基因片段,构建pcDNA3.1-GDI2真核表达载体,经酶切、PCR、测序验证其正确性,脂质体法转染真核细胞A549,G418筛选建立稳定转染的细胞株。免疫印迹法检测稳定转染的细胞株。结果构建了真核表达载体并建立了稳定转染的A549细胞株,成功表达GDI2蛋白。结论 GDI2真核表达载体成功构建及稳定转染A549细胞株的建立,为研究GDI2过度表达对肿瘤侵袭和转移的影响奠定了实验基础。

RasGRP1启动子区甲基化对脂多糖诱导人T淋巴细胞炎症的作用及机制

目的探讨RAS鸟苷酸释放蛋白1(RasGRP1)启动子区甲基化对脂多糖(LPS)诱导人T淋巴细胞炎症的作用及机制。方法人T淋巴细胞白血病细胞JurkatE6-1培养至对数生长期,分为对照(完全培养基,C)组、1 mg/L(低浓度)LPS(L1)组、10 mg/L(高浓度)LPS(L2)组及10μmol/L甲基化转移酶抑制剂5-Aza-2′-脱氧胞苷+10 mg/L LPS(LA)组,干预5 d,置于荧光显微镜下观察细胞形态变化;离心收集细胞、留取上清液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和比色法检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中RasGRP1、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、TNF-α、IL-6、DNA甲基转移酶(DNMT)1、DNMT3a mRNA的表达,采用Western blotting法检测各组细胞RasGRP1、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白的表达,采用甲基化特异性PCR(MSP)法和琼脂糖凝胶电泳检测RasGRP1启动子区甲基化状态。结果光学显微镜结果显示,C组JurkatE6-1细胞生长状态良好,L1组、L2组细胞数量明显减少,细胞形态趋于碎片化,死亡细胞逐渐增加,随LPS浓度增加而增加;LA组较L2组细胞数量及形态明显好转;与C组比较,L1组JurkatE6-1细胞炎症因子表达升高(P<0.05),细胞RasGRP1、p-ERK1/2表达升高(P<0.05),DNMT1和DNMT3a mRNA表达无差异(P>0.05),RasGRP1启动子区未检测到甲基化表达;与L1组比较,L2组细胞炎症因子表达升高(P<0.05),细胞RasGRP1、p-ERK1/2表达降低(P<0.05),DNMT1和DNMT3a mRNA表达升高(P<0.05),RasGRP1启动子区呈现高甲基化表达;与L2组比较,LA组细胞炎症因子表达降低(P<0.05),细胞RasGRP1、p-ERK1/2表达升高(P<0.05),DNMT1和DNMT3a mRNA表达降低(P<0.05),RasGRP1启动子区未检测到甲基化表达;各组间ERK1/2总量比较无差异(P>0.05)。结论抑制RasGRP1启动子区高甲基化可减轻LPS诱导的人T淋巴细胞炎症损伤,其机制可能是与调控下游ERK信号通路有关。

Rho鸟苷酸解离抑制因子-2过表达载体的构建与慢病毒包装

目的:为研究β2肾上腺素能受体减敏的机制,构建Rho鸟苷酸解离抑制因子-2(Rho GDI2)过表达慢病毒载体。方法:GenBank搜索Rho-GDI2基因序列(Gene ID:14570,序列号:NM_008113),设计PCR引物扩增目的基因,双酶切后凝胶电泳回收酶切产物。质粒双酶切获得线性载体,将目的基因和线性载体进行琼脂糖凝胶电泳分离回收目的条带。再行目的基因和载体的连接,连接产物转化感受态细胞;菌液PCR阳性克隆鉴定并抽提质粒并测序。最后293T细胞内包装慢病毒质粒并测其病毒活力与滴度。结果:通过DNAStar SeqMan软件对测序结果进行分析,测序结果与目标序列一致。病毒质粒转染细胞效率较高,病毒活力较高,通过标准曲线测得病毒滴度pLenti-GDI慢病毒液:1.22×108vp/mL。结论:成功构建了Rho GDI2过表达慢病毒载体。

鸟苷酸环化酶C及尾型同源盒转录因子-2在胃腺癌中的研究进展

研究发现,鸟苷酸环化酶C(GC-C)与尾型同源盒转录因子-2(CDX-2)在胃黏膜异位表达,与胃腺癌及其发生的早期事件肠化生关系密切,这为我们在胃腺癌的早期发现、一级预防、治疗及预后研究方面提供了新思路。

鸟苷酸交换因子C3G过表达对高糖诱导心肌细胞H9C2凋亡的影响及机制

目的观察鸟苷酸交换因子C3G过表达对高糖诱导心肌细胞H9C2凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的心肌细胞随机分为2组,每组备3份,分别用空白试剂、阴性病毒、过表达C3G慢病毒感染24 h,将上述其中一组培养基置换为含5. 5 mmol/L D-葡萄糖的培养基,标记为空白组、阴性病毒组、过表达C3G组;另一组培养基置换为含33. 3 mmol/L D-葡萄糖的培养基,标记为空白+高糖组、阴性病毒+高糖组、过表达C3G+高糖组;采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中C3G、接头蛋白L(Crk L)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)表达。结果与空白组、阴性病毒组比较,过表达C3G组细胞凋亡率降低,而空白+高糖组、阴性病毒+高糖组细胞凋亡率增加(P均<0. 05);与空白+高糖组、阴性病毒+高糖组比较,过表达C3G+高糖组细胞凋亡率降低(P均<0. 05)。与空白组、阴性病毒组比较,过表达C3G组C3G、p-ERK1/2蛋白表达均增加(P均<0. 05)而Crk L蛋白表达无差异,空白+高糖组、阴性病毒+高糖组C3G、p-ERK1/2和Crk L蛋白表达降低(P均<0. 05);与空白+高糖组、阴性病毒+高糖组比较,过表达C3G+高糖组C3G、p-ERK1/2蛋白表达均增加(P均<0. 05),而Crk L蛋白表达差异无统计学意义。结论 C3G过表达可显著抑制高糖诱导的心肌细胞H9C2凋亡,其作用机制可能与上调p-ERK1/2蛋白表达有关。

非肝炎病毒相关性肝细胞癌组织中鸟苷酸交换因子ECT2的表达变化及其意义

目的观察非肝炎病毒相关性肝细胞癌(以下简称肝癌)组织中鸟苷酸交换因子ECT2的表达变化,探讨其与肝癌患者临床病理特征的关系。方法 78例非肝炎病毒相关性肝癌手术切除标本,同时每例患者另取癌旁组织标本作为对照。采用免疫组织化学染色法检测肝癌及其癌旁组织中的ECT2蛋白,RT-PCR检测ECT2 mRNA,比较不同临床病理参数肝癌患者ECT2蛋白表达阳性例数。结果非肝炎病毒相关性肝癌及其癌旁组织ECT2蛋白表达阳性率分别为71. 8%(56/78)、38. 5%(30/78),ECT2 mRNA相对表达量分别为0. 53±0. 05、0. 38±0. 09,两者比较P均<0. 05。肝癌患者低肿瘤分化者、肿瘤直径≥5 cm者、甲胎蛋白水平≥100 ng/m L者、有微血管癌栓者均较中高肿瘤分化者、肿瘤直径<5 cm者、甲胎蛋白水平<100 ng/m L者、无微血管癌栓者ECT2蛋白表达阳性例数多(P均<0. 05)。结论非肝炎病毒相关性肝癌组织中ECT2表达高,ECT2蛋白表达可能与肝癌的复发、转移有关。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

电针对佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜VEGF/Vav2/Rac1信号通路的影响

目的观察电针对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠膝关节滑膜组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、鸟嘌呤核苷酸交换因子2(vav guanine nucleotide exchange factor 2,Vav2)和Ras相关C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达的影响,探究电针干预类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)血管新生的可能机制。方法将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成4组(空白组、模型组、西药组和电针组),每组10只。除空白组,其他3组采用尾根部皮下注射完全弗氏佐剂制成AA大鼠模型。造模后第2天开始干预,电针组进行电针干预,以左侧足三里与关元穴配穴,右侧足三里与同侧阿是穴配穴,每次20 min,每天干预1次,共干预21次;西药组给予甲氨蝶呤灌胃给药,每周1次,共干预3次。观察各组体质量、关节红肿等一般情况,每3天测量1次大鼠后双侧足跖容积。干预结束后,通过大鼠一般情况、体质量、足跖容积分析各组大鼠足跖肿胀程度,HE染色观察AA大鼠膝关节滑膜组织的病理形态学,免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织内CD31表达变化,Western blot法检测大鼠膝关节滑膜组织VEGF、Vav2和Rac1蛋白表达量。结果与空白组相比,模型组大鼠第21天足跖容积均明显增大(P<0.01),膝关节滑膜组织出现显著性病理改变,CD31表达量明显升高(P<0.05),VEGF、Vav2、Rac1蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,西药组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Vav2表达量明显下降(P<0.05),Rac1蛋白表达量显著下降(P<0.01);电针组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Rac1表达量明显下降(P<0.05),Vav2蛋白表达量显著下降(P<0.01)。结论电针改善RA的作用机制可能与抑制VEGF/Vav2/Rac1信号通路,进而抑制血管新生有关。

RASGRF1基因多态性与先天性白内障合并高度近视的关系

目的 探讨Ras特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子(RASGRF1)基因多态性与先天性白内障(CC)合并高度近视的关系。方法 选取2020年4月至2022年3月该院的CC患儿186例为研究对象,根据是否合并高度近视分为两组,其中合并高度近视的105例患儿为A组,未合并高度近视的81例患儿为B组;另选取同期该院的体检健康者93例为对照组。比较CC患儿与体检健康者RASGRF1基因的单核苷酸多态性(SNP)分型与基因型频率,比较A、B两组RASGRF1基因的SNP分型与基因型频率及一般资料,采用Logistic回归分析RASGRF1基因rs8033417分型对CC合并高度近视患儿的独立作用。结果 CC患儿与体检健康者RASGRF1基因的SNP分型rs2870087、rs8033417、rs939658、rs4778879、rs12902831的基因型频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。A组与B组RASGRF1基因的SNP分型rs8033417的基因型频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。A组女性、年龄>12~14岁人数多于B组,眼轴长度、屈光度、黄斑区中心凹视网膜厚度大于B组,黄斑区上方、下方、鼻侧、颞侧视网膜厚度小于B组(P<0.05)。在未校正因素时,RASGRF1基因rs8033417分型为C/T-C/C的CC患儿发生高度近视的风险是T/T基因型患儿的0.476倍;在模型2、模型3中,RASGRF1基因rs8033417分型为C/T-C/C的CC患儿发生高度近视的风险分别是T/T基因型患儿的0.441倍、0.426倍(P<0.05)。结论 RASGRF1基因与CC密切相关,且其rs8033417分型是CC患儿发生高度近视的独立影响因素。当CC患儿RASGRF1基因rs8033417分型为C/T-C/C时,高度近视发生率较低。

结肠癌组织RASGRF1蛋白表达与基因甲基化状态变化及其临床意义

目的探讨结肠癌组织Ras蛋白特异性鸟苷酸释放因子1(RASGRF1)蛋白表达与基因甲基化状态变化及其临床意义。方法取手术切除的结肠癌组织及其配对的癌旁正常组织各81例份,采用免疫组化法检测RASGRF1蛋白表达,采用甲基化特异性PCR法检测RASGRF1基因甲基化状态。分析RASGRF1蛋白表达与基因甲基化状态以及二者与患者临床病理特征的关系。结果结肠癌组织RASGRF1蛋白阳性表达率明显低于癌旁正常组织(χ^2=51.995,P<0.01),RASGRF1基因甲基化阳性率明显高于癌旁正常组织(χ^2=44.100,P<0.01)。结肠癌组织RASGRF1蛋白阳性表达与RASGRF1基因甲基化阳性呈负相关关系(ρ=-0.486,P<0.05)。结肠癌组织RASGRF1蛋白阳性表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤直径、组织分化程度无关(P均>0.05);结肠癌组织RASGRF1基因甲基化阳性与肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤直径、组织分化程度无关(P均>0.05)。结论结肠癌组织RASGRF1蛋白低表达、RASGRF1基因甲基化异常升高,二者呈负相关关系,且均与肿瘤TNM分期和淋巴结转移有关。

胃癌组织中RASGRF1基因甲基化及蛋白表达与其临床意义

目的:探讨胃癌组织中Ras蛋白特异性鸟苷酸释放因子1(RASGRF1)基因甲基化及蛋白表达以及临床意义。方法:收集80例胃癌病人病历资料,采用免疫组织化学法检测80例胃癌组织和相应癌旁组织中RASGRF1蛋白表达情况,采用甲基化特异性PCR检测RASGRF1基因甲基化状态,分析胃癌组织中RASGRF1基因甲基化及蛋白表达的相关性,并观察胃癌组织中RASGRF1基因甲基化状态及蛋白表达情况与病人临床病理参数的关系。结果:胃癌组织和相应癌旁组织中RASGRF1蛋白表达与基因甲基化表达情况差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,胃癌组织中RASGRF1蛋白表达与基因甲基化呈负相关关系(P<0.01);胃癌组织中RASGRF1蛋白表达与性别、年龄、肿瘤直径、组织学分化程度、发生远处转移无关(P>0.05),与肿瘤分期有关(P<0.05);胃癌组织中RASGRF1基因甲基化与性别、年龄、肿瘤直径、组织学分化程度无关(P>0.05),与肿瘤分期、发生远处转移有关(P<0.05和P<0.01)。结论:胃癌组织中RASGRF1基因甲基化和蛋白表达二者呈负相关关系,RASGRF1基因甲基化及蛋白表达与肿瘤分期、发生远处转移有一定关系。

Ras和Sos1蛋白在上皮性卵巢恶性肿瘤组织中的表达及临床意义

目的检测Ras和Sos1蛋白在上皮性卵巢恶性肿瘤中的表达,分析两种蛋白表达水平与上皮性卵巢恶性肿瘤临床病理指标的相关性。方法利用免疫组织化学SABC法检测62例上皮性卵巢恶性肿瘤组织、5例交界性上皮性卵巢肿瘤、15例卵巢上皮性囊腺瘤、18例正常卵巢组织中Ras与Sos1蛋白的表达情况,统计学分析两种蛋白表达水平与肿瘤恶性程度指标的相关性。结果 (1)Ras和Sos1在上皮性卵巢恶性肿瘤组织中的表达水平显著(P<0.05)高于在其它组织中的表达;(2)两种蛋白在上皮性卵巢恶性肿瘤细胞中的表达部位均以细胞膜和细胞浆同时表达为主;(3)Ras的表达程度(光密度值)与病理分型有相关性(P<0.05):其在浆液性卵巢癌的表达比在其他病理类型的表达更为显著,而Sos1蛋白表达与这些病理参数无相关性;(4)两种蛋白表达程度高的患者无瘤生存时间短,但不具有显著性。结论 Ras、Sos1这两种蛋白与上皮性卵巢恶性肿瘤的发生和发展可能存在内在联系;Ras蛋白的表达存在组织类型的差异,可用来支持卵巢浆液性腺癌的特异性诊断;统计学分析显示,两种蛋白表达程度高的患者,无瘤生存时间较低表达患者更短,但可能由于病例数较少有关,该结果不具备显著性,这需要扩大样本量进一步研究。

慢病毒介导Ras-GRF1调控肝癌干细胞干性维持与自我更新能力的机制

目的:探究Ras蛋白特异性的鸟苷酸释放因子1(Ras protein specific guanylate releasing factor 1,Ras-GRF1)在肝癌干细胞(cancer stem cells,CSC)生物学特性及自我更新中的作用,并初步探究其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人正常肝细胞系(HL-7702)和不同肝癌细胞系(Huh7、HepG2、Hep3B、CLC4、CLCl3、SMMC-7721)中Ras-GRF1表达水平;流式细胞术分选出肝癌干细胞,利用Ras-GRF1-pCMV6-GFP重组慢病毒感染肝癌干细胞,MTT法、EdU染色和平板克隆形成实验检测过表达Ras-GRF1对肝癌干细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验检测过表达Ras-GRF1后肝癌干细胞迁移与侵袭变化;成球实验检测过表达Ras-GRF1后肝癌干细胞的自我更新能力;蛋白免疫印迹(Western blot)检测肿瘤干细胞中Hippo信号通路关键蛋白大肿瘤抑制因子(large tumor suppressor,LATS)、Yes协同蛋白(Yes cooperative protein,YAP)和哺乳动物STE20样蛋白激酶(mammalian STE20-like protein kinase,MST)的蛋白及磷酸化表达水平。结果:不同肝癌细胞中Ras-GRF1 mRNA表达量较人正常肝细胞中显著降低(P<0.05);分离到的肝癌干细胞在感染Ras-GRF1-pC MV6-GFP重组慢病毒后,细胞中RasGRF1 mRNA表达量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);在两种肝癌干细胞HepG 2-CSC和SMMC-7721-CSC中,相较于空白对照组,Ras-GRF1-pC MV6组细胞增殖活性显著降低,EdU阳性染色数目和细胞克隆形成数目均显著减少,细胞迁移与侵袭数目也均显著减少,细胞成球能力明显降低,p-LATS/LATS、pYAP/YAP及p-MST/MST蛋白表达显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:通过慢病毒介导Ras-GRF1在肝癌干细胞中过表达后,能够抑制肝癌干细胞的增殖、迁移与侵袭,降低自我更新能力,其机制可能与调控Hippo信号通路相关。

首发精神分裂症患者血清RasGRP1与炎症因子水平和症状严重程度的关系

目的探讨首发精神分裂症(FES)患者血清Ras蛋白特异鸟嘌呤核苷酸释放因子1(RasGRP1)水平与炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平和精神症状严重程度的关系。方法选取48例FES患者(FES组)和30例健康人(对照组),采用酶联免疫吸附试验检测血清RasGRP1、IL-1β、IL-6、TNF-α水平,采用阳性与阴性症状量表(PANSS)评估精神症状严重程度。绘制ROC曲线,分析血清指标对FES的诊断价值。Pearson法分析FES患者血清RasGRP1水平与IL-1β、IL-6、TNF-α水平及PANSS评分的相关性。结果FES组血清RasGRP1、IL-1β、IL-6和TNF-α水平均高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,RasGRP1诊断FES的AUC高于IL-1β、IL-6和TNF-α(0.788 vs.0.614、0.695和0.547)(P<0.05)。FES患者血清RasGRP1水平与IL-1β、IL-6、TNF-α水平均呈正相关(r=0.587、0.701、0.412,P<0.05)。FES患者血清RasGRP1水平与PANSS阳性症状评分、阴性症状评分、总分均呈正相关(r=0.589、0.673、0.704,P<0.05)。结论FES患者血清RasGRP1水平升高,与IL-1β、IL-6、TNF-α水平呈正相关,并且与精神症状严重程度有关。

GSTP1和RasGRP1在乳腺癌中的表达及对MCF-7细胞增殖迁移能力的影响

目的探讨谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)和Ras鸟苷酸释放蛋白1(RasGRP1)在乳腺癌的表达及对MCF-7细胞增殖迁移能力的影响。方法收集80例病理确诊为乳腺癌的初诊患者的乳腺癌组织和对应的癌旁组织,采用免疫组织化学法检测GSTP1和RasGRP1的阳性表达,分析GSTP1和RasGRP1阳性表达与乳腺癌不同临床病理特征的关系。采用转染法将GSTP1和RasGRP1转染至MCF-7细胞,计算MCF-7细胞抑制率,Transwell法检测细胞迁移情况。Western blotting检测各组GSTP1和RasGRP1蛋白相对表达量。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织的GSTP1阳性表达升高(P<0.05),RasGRP1阳性表达降低(P<0.05)。有淋巴结转移患者GSTP1阳性率升高,RasGRP1阳性率降低(P<0.05);TNM分期越高,GSTP1阳性率越高,RasGRP1阳性率越低(P<0.05)。对照1组、阴性对照1组和GSTP1-siRNA组12 h、24 h和48 h的MCF-7细胞抑制率比较:(1)不同时间点的MCF-7细胞抑制率有差异(P<0.05);(2)3组的MCF-7细胞抑制率有差异(P<0.05),GSTP1-siRNA组较对照1组、阴性对照1组高;(3)3组的MCF-7细胞抑制率变化趋势有差异(P<0.05)。对照2组、阴性对照2组和RasGRP1-siRNA组12 h、24 h和48 h的MCF-7细胞抑制率比较:(1)不同时间点的MCF-7细胞抑制率有差异(P<0.05);(2)3组的MCF-7细胞抑制率有差异(P<0.05),RasGRP1-siRNA组较对照2组、阴性对照2组低;(3)3组的MCF-7细胞抑制率变化趋势有差异(P<0.05)。对照1组、阴性对照1组、GSTP1-siRNA组的MCF-7细胞透膜细胞数比较,差异有统计学意义(P<0.05),GSTP1-siRNA组MCF-7细胞透膜细胞数较对照1组、阴性对照1组减少(P<0.05);对照2组、阴性对照2组、RasGRP1-siRNA组的MCF-7细胞透膜细胞数比较,差异有统计学意义(P<0.05),RasGRP1-siRNA组的MCF-7细胞透膜细胞数较对照2组、阴性对照2组增加(P<0.05)。对照1组、阴性对照1组、GSTP1-siRNA组GSTP1蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),GSTP1-siRNA组GSTP1蛋白相对表达量较对照1组和阴性对照1组降低(P<0.05)。对照2组、阴性对照2组和RasGRP1-siRNA组RasGRP1蛋白相对表达量较,差异有统计学意义(P<0.05),RasGRP1-siRNA组RasGRP1蛋白相对表达量较对照2组和阴性对照2组降低(P<0.05)。结论GSTP1和RasGRP1蛋白在乳腺癌组织中呈异常表达,可影响MCF-7细胞增殖迁移能力。

RASGRF1和PGAM1在胃癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的:探讨Ras蛋白特异性鸟苷酸释放因子1(RASGRF1)和磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在胃癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法:选取2014年2月-2016年10月于本院行手术治疗的85例胃癌患者为研究对象,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌组织和对应的癌旁组织中RASGRF1和PGAM1的mRNA表达,免疫组织化学法检测RASGRF1和PGAM1蛋白表达,分析RASGRF1和PGAM1蛋白表达与患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier法分析RASGRF1和PGAM1蛋白表达与患者预后的关系。Cox比例风险模型分析影响胃癌患者预后的多因素。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中RASGRF1的mRNA和蛋白阳性表达率均显著降低(P<0.05),PGAM1的mRNA和蛋白阳性表达率均显著升高(P<0.05)。胃癌组织中RASGRF1和PGAM1的蛋白表达均与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05),而与患者年龄、性别和肿瘤直径无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,胃癌组织中RASGRF1阳性表达的患者3年生存率显著高于阴性表达患者(P<0.05),PGAM1阳性表达的患者3年生存率显著低于阴性表达患者(P<0.05)。Cox分析结果显示,RASGRF1和PGAM1均是影响胃癌患者预后的独立因素(P<0.05)。结论:胃癌组织中RASGRF1呈低表达,PGAM1呈高表达,二者均可能参与胃癌的发生发展,有望成为胃癌诊断和预后判断的生物标志物。

C3G/Rap1和Dock180/Rac1信号通路在卵巢癌浸润中的作用

目的探讨鸟嘌呤核苷酸交换因子C3G/Rap1酶和鸟嘌呤核苷酸交换因子Dock180/Rac1酶信号通路在卵巢癌浸润中的可能作用。方法 Western blot检测Dock180沉默的卵巢癌细胞SKOV3中C3G的表达,验证上皮性卵巢癌组织中Dock180与C3G的表达相关性;免疫组化比较卵巢癌组织中Dock180与C3G的表达趋势;免疫荧光观察SKOV3中Dock180与C3G及它们各自的下游蛋白Rac1/Rap1的定位。结果 Dock180基因沉默的细胞中C3G表达明显增强(P<0.05);Dock180与C3G在卵巢癌组织中的表达呈现相反趋势(P<0.05);C3G/Dock180均主要分布于细胞质,下游效应蛋白Rap1/Rac1在细胞膜和细胞质都有表达,但Rap1以细胞质为主,而Rac1可以伸展至细胞膜及细胞膜皱褶。结论卵巢癌细胞和组织中C3G与Dock180表达呈相反趋势,下游蛋白Rap1与Rac1在细胞内的定位分布差异,可能与C3G/Rap1和Dock180/Rac1信号通路在卵巢肿瘤浸润中的不同作用有关。