RASSF1基因在胃癌中的表达及其临床意义

背景与目的:探讨RAS相关结构家族基因1(RAS association domain family gene 1,RASSF1)在胃腺癌组织细胞中的表达及其临床意义。材料与方法:用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测胃癌BGC-823细胞系、50例胃癌组织及相应癌旁正常组织中RASSF1A、RASSF1B和RASSF1C mRNA的表达,以及30例胃癌高危人群、可疑胃癌病人胃黏膜活检标本中的RASSF1基因表达情况;用PCR法检测上述50例胃癌组织中的幽门螺杆菌(Hp)感染率。结果:RASSF1A在胃癌组织中的转录表达缺失率为52%(26/50),其表达缺失率与胃癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05),但与其组织学类型无相关性。RASSF1A在胃癌高危人群及可疑胃癌病人胃黏膜活检标本中的表达缺失率为20%(6/30),胃癌组织中Hp感染率为64%(32/50),RASSF1A的表达缺失与Hp感染组之间无相关性(P>0.05)。RASSF1B在胃癌组织中的转录表达缺失率为22%(11/50),RASSF1C则全部表达,RASSF1B和RASSF1C在胃癌高危人群及可疑胃癌病人胃黏膜活检标本中全部表达,并且两者与胃癌的组织学类型、分化程度、TNM分期均无相关性。结论:RASSF1A在胃癌组织中存在较高的表达缺失,RASSF1A的表达与胃癌的临床分期和病理分级具有相关性,RASSF1A在胃癌高危人群及可疑胃癌患者胃黏膜活检标本中存在表达缺失,因此有望作为胃癌早期检测的标志物,RASSF1A的表达缺失与Hp感染之间无相关性,它们可能是两个独立的致病因素。

RASSF1基因在胃癌组织和细胞中的表达及意义

目的研究RASSF1基因的3种剪接体(RASSF1A、RASSF1B、RASSF1C)在胃癌组织及细胞中的表达特点。方法应用生物信息学分析RASSF1基因的3种剪接体的结构特点;同时利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织及不同胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中3种剪接体的mRNA表达水平。结果 RASSF1基因3种剪接体在胃癌不同分化程度的细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中均有表达,在60例胃癌组织中RASSF1A、RASSF1B表达缺失率分别为60.2%(37/60)、25%(15/60),RASSF1C基因在胃癌组织及癌旁组织表达率相近约为86.7%(55/60)。结论 RASSF13种剪接体在胃癌组织中的表达下调,RASSF1B和RASSF1C在胃癌中的表达差异无显著性,其余基因比较差异有显著性。RASSF1B的表达可能与细胞的分化程度有关。

RASSF1基因SNP与陕西地区结直肠癌发病风险关系的研究

目的:探讨RASSF1基因第三外显子G133T和第六外显子A315G单核苷酸多态性(SNP)与陕西地区汉族人群结直肠癌(CRC)易感性的关系。方法:采用基于人群的病例对照研究,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测61例CRC和122例健康对照个体RASSF1基因多态位点的基因型频率分布,比较不同基因型与CRC发生风险的关系。结果:RASSF1基因G133T多态的T等位基因频率在CRC患者组为24.6%,显著高于健康对照组的6.1%(P=0.00)。与G/G基因型相比,携带G/T基因型的个体CRC的发病风险显著增加,经性别、年龄、吸烟状况、GIC家族史校正后的OR值为2.33(95%CI=1.05-5.15)。RASSF1基因A315G多态的G等位基因频率在CRC患者组为25.4%,显著高于健康对照组的11.9%(P=0.00)。根据个体吸烟状况进行分层分析发现,与A/A基因型相比,携带A/G基因型和G等位基因(A/G+G/G基因型)可显著增加吸烟个体CRC的发病风险,经性别、年龄、GIC家族史校正后的OR值为4.5(95%CI=1.65-12.28)。根据GIC家族史进行分层分析发现,与A/A基因型相比,携带A/G基因型或G等位基因(A/G+G/G基因型)可显著增加GIC家族史阳性个体CRC的发病风险,经性别、年龄、吸烟状况校正后的OR值为3.78(95%CI=1.39-10.19)。结论:携带RASSF1基因G133T多态的T等位基因(G/T+T/T基因型)可能显著增加陕西地区人群CRC的发病风险。携带RASSF1基因A315G多态的G等位基因(A/G+G/G基因型)可能显著增加陕西地区人群CRC的发病风险。分层分析发现,G等位基因(A/G+G/G基因型)可能显著增加吸烟个体和GIC家族史阳性个体CRC的发病风险。

RASSF1基因单核苷酸多态性与食管癌的发病风险

目的:探讨RASSF1基因第三外显子G133T和第六外显子A315G单核苷酸多态性(SNP)与陕西地区汉族人群食管鳞状细胞癌(ESCC)易感性的关系。方法:采用基于人群的病例对照研究,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测120例ESCC和122例健康对照个体RASSF1基因多态位点的基因型频率分布,比较不同基因型与ESCC发生风险的关系。结果:RASSF1基因G133T多态的T等位基因频率和A315G多态的G等基因频率在ESCC患者组分别为17.5%和23.8%,显著高于健康对照组的6.1%和11.9%。根据个体吸烟状况进行分层分析发现,携带G/T基因型或T等位基因(G/T+T/T基因型)和携带A/G基因型或G等位基因(A/G+G/G基因型)可显著增加吸烟个体ESCC的发病风险,经性别、年龄、GIC家族史校正后的OR值分别为11.7和5.02(95%CI=3.95-34.9和2.09-12.06)。GIC家族史分层分析发现,携带G/T基因型或T等位基因(G/T+T/T基因型)和A/G基因型可显著增加GIC家族史阳性个体和GIC家族史阴性个体ESCC的发病风险,经性别、年龄、吸烟状况校正后的OR值为5.08和3.51(95%CI=1.85-13.92和1.69-7.21)。结论:携带RASSF1基因G133T多态的T等位基因(G/T+T/T基因型)可能显著增加陕西地区人群ESCC的发病风险。携带RASSF1基因A315G多态的G等位基因(A/G+G/G基因型)可能显著增加陕西地区人群ESCC的发病风险。

RASSF1基因在肿瘤细胞中的转录表达及其临床意义

目的:研究RASSF1基因在各种肿瘤细胞中的表达情况以及分析RASSF1各成员与肿瘤发生的相关性。方法:设计特异性的引物,用RT-PCR方法检测5种肿瘤细胞中RASSF1家族7种不同转录本mRNA的表达情况。结果:同源序列分析表明,转录本A、D、E序列最长,同源性较高,推测是起主要功能的一类基因,而B、C、F和G等缺失部分较大,可能是细胞突变引起;转录本A、D和E在各种肿瘤细胞中均未见表达,而其他转录本B、C和F在肿瘤细胞中有转录。结论:RASSF1基因7种转录本在被测试的5种肿瘤细胞中的表达存在明显差异,转录本RASSF1的A、D和E等在几种肿瘤细胞中均未表达,说明这几个转录本可能作为抑癌的候选基因。

阿帕替尼靶向治疗联合TACE对晚期原发性肝癌患者的疗效及外周血RASSF1A基因甲基化的影响

目的分析阿帕替尼靶向治疗联合肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗晚期原发性肝癌患者疗效及对外周血Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化的影响。方法64例晚期肝细胞癌(HCC)患者分为单一组(n=32)与联合组(n=32),单一组行TACE治疗,联合组行阿帕替尼靶向治疗联合TACE治疗,两组患者均行标准疗程TACE治疗,于治疗1个月(1 mo)及3个月(3 mo)评估临床疗效,比较治疗前后肝功能[白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]、血清标志物[甲胎蛋白(AFP)、血管内皮生长因子(VEGF)、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)]、外周血RASSF1A基因甲基化、不良反应及TACE抵抗发生率。结果单一组治疗3 mo时的客观缓解率(ORR)较治疗1 mo时下降(P<0.05),且低于联合组(P<0.05);两组患者治疗3 mo时的ALT、AST均较治疗前下降(P<0.05),且联合组低于单一组(P<0.05),两组患者治疗3 mo时的AFP均较治疗前显著降低(P<0.05);联合组治疗3 mo时的VEGF较治疗前降低(P<0.05)、Caspase-8较治疗前升高(P<0.05),联合组治疗3 mo时AFP、VEGF低于单一组(P<0.05),Caspase-8高于单一组(P<0.05);联合组治疗3 mo时RASSF1A基因甲基化阳性率明显低于治疗前(P<0.05),而单一组组内比较差异无统计学意义(P>0.05);联合组手足综合征、高血压发生率高于单一组(P<0.05),TACE抵抗发生率略低于单一组、但差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿帕替尼靶向治疗联合TACE对晚期HCC效果及安全性良好,且对减少RASSF1A基因甲基化有利。

SHOX2和RASSF1A基因甲基化在消化道肿瘤诊断和预后预测中价值的研究进展

消化道肿瘤发病率较高,由于其早期诊断较为困难,导致患者预后较差,因此对高危人群的筛查、早期诊断和及时治疗尤为重要。近年来,表观遗传学在肿瘤发病机制中的作用受到了广泛关注并取得了突破性研究进展。促癌基因矮小同源盒基因2(SHOX2)和抑癌基因Ras相关结构域家族1A(RASSF1A)甲基化作为生物标志物在消化道肿瘤诊断和预后预测中的敏感度和特异度较高,有较高的应用价值。该文就SHOX2和RASSF1A基因甲基化在消化道肿瘤诊断和预后预测中价值的研究进展作一综述。

RASSF1基因不同转录本在肺癌组织中的转录表达及临床意义

目的 探讨RASSF1基因 3种不同转录本在肺癌中的表达情况及其临床意义。方法采用RT PCR方法检测 5 1例肺癌癌组织及相应癌旁正常组织中RASSF1A、RASSF1B及RASSF1CmRNA的表达情况。结果 (1) 3种不同转录本在癌旁正常肺组织中均表达 ;在癌组织中 ,RASSF1A及RASSF1B存在较高的表达缺失 ,其表达缺失率分别为 5 4 .9% (2 8/ 5 1)和 37.3% (19/ 5 1) ,RASSF1C则全部表达。 (2 )RASSF1A表达与肺癌淋巴结转移及病理分期有关 ,淋巴结转移者及晚期病例均存在较高的RASSF1A表达缺失 (P <0 .0 5 )。 (3)RASSF1B和RASSF1C表达与肺癌分期、组织学类型、分化程度及吸烟指数等均无显著相关性 (P >0 .0 5 )。结论 RASSF1基因 3种不同转录本在肺癌中的表达存在明显差异 ,其中转录本A与肺癌淋巴结转移及病理分期相关 ,是一新型肺癌抑癌基因。

RASSF1A基因在肺癌中的作用分析

肺癌作为发病率最高的恶性肿瘤之一,严重影响患者的生活质量和生存时间。RASSF1A基因是最早发现的抑癌基因之一,研究人员对RASSF1A基因的结构和位置进行相关研究。作为肿瘤抑制因子,RASSF1A基因却在肺癌患者中经常因为甲基化而失活,RASSF1A基因的缺失通过各种途径促进了RAS基因诱导肿瘤发生。研究表明,RASSF1A基因甲基化水平与肺癌临床病理特征相关,可以用作肺癌的诊断手段之一。各项预后相关研究表明RASSF1A高甲基化与肺癌的预后密切相关,RASSF1A基因高甲基化与患者低生存率存在密切联系。本综述主要就RASSF1A基因与肺癌发生、发展和预后的关系展开讨论。

抑癌基因RASSF1A与RASSF1B基因的关系

目的:研究RASSF1基因2个转录本基因在胃癌组织及相对应的癌旁组织中表达情况以及RASSF1 2个转录本基因与肿瘤发生的相关性。方法:设计特异性的引物,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测胃癌及癌旁组织中RASSF1家族中2种不同转录本mRNA的表达情况。结果:40例胃癌组织中RASSF1A基因表达缺失率为60.2%(24/40),RASSF1B基因表达缺失率为37.5%(15/40)。结论:RASSF1A和RASSF1B2种转录本在胃癌组织中的表达下调,RASSF1A基因在胃癌的发展中起重要的抑制作用,RASSF1B的表达还可能与细胞的分化程度有关。

三氧化二砷对前列腺癌DU-145细胞RASSF1A基因的去甲基化作用

目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对激素非依赖性前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对RASSF1A基因去甲基化和蛋白表达的影响。方法应用MTT法检测不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、12.0、20.0μmol/L)的As2O3不同作用时间(24、48、72 h)对DU145细胞的生长抑制作用;应用甲基化特异性PCR(MSP)和West-ern blot检测As2O3对DU145细胞RASSF1A基因甲基化状态及蛋白表达的影响。结果 As2 O3可抑制DU145细胞的增殖,在一定范围内随着药物浓度的增高,抑制作用逐渐增强(F=838.089,P<0.05);同一浓度作用时间越长,抑制率越高(F=8.849,P<0.05);且As2O3可使RASSF1A基因甲基化逆转,蛋白重新表达。结论 As2O3可以逆转前列腺癌DU145细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的异常甲基化,诱导该抑癌基因的重新表达,抑制前列腺癌DU145细胞的增殖。

痰标本FHIT、P16、MGMT、RASSF1A、APC基因甲基化在肺癌诊断中的作用

目的探讨肺癌患者痰标本中FH IT、P16、MGMT、RASSF1A和APC等抑癌基因启动子异常甲基化及其联合检测在肺癌筛查及早期诊断中的价值。方法采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法,检测47例肺癌组织及对应的痰标本FHIT、P16,MGMT、RASSF1A和APC基因启动子区甲基化状态。24例肺良性疾病患者痰标本作为对照。结果 47例肺癌组织标本中FHIT、P16、MGMT、RASSF1A、APC基因启动子区甲基化检出率分别为40.4%(19/47)、53.2%(25/47)、36.2%(17/47)、21.3%(10/47)和38.3%(18/47);对照的痰标本中五者甲基化检出率分别为38.3%(18/47)、48.9%(23/47)、36.2%(17/47)、17.0%(8/47)和29.8%(14/47),两组甲基化检出率存在着一致性[P>0.05;κ(0.8～1.0)]。24例肺良性病变痰标本中未检测到任何异常甲基化,与肺癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)。五项指标联合检测可明显提高肺癌检测的灵敏度(80.9%)和特异度(100.0%)。FHIT和P16基因痰标本甲基化检出率与患者吸烟指数有相关性(P<0.05)。结论痰标本中多个肺癌相关基因甲基化联合检测有望成为肺癌筛查、早期诊断简便有效的指标。

诱导痰RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化在肺癌诊断中的价值

目的:探讨诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区异常甲基化及其联合检测在肺癌诊断中的价值。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测82例肺癌患者诱导痰和对应肿瘤组织以及25例肺部良性病变组织中RASSF1A,p16和DAPK3种基因启动子区甲基化改变,并分析三者与临床病理资料的关系。结果:肺癌病理组织中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化检出率分别为63.4%,59.8%和58.5%,对应的诱导痰三者甲基化检出率分别为54.9%,48.8%和51.2%;肺部良性病变组织中甲基化检出率均为零,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF1A基因甲基化检出率在中高分化和无淋巴结转移的肺癌中明显低于低分化和未分化及有淋巴结转移者(P<0.05),与年龄、性别、吸烟指数、临床分期及病理类型无关,而p16和DAPK基因甲基化检出率与上述因素均无明显相关性(P>0.05);联合检测3种基因甲基化的检出率为73.2%。结论:联合检测诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区高甲基化有可能作为诊断肺癌及评估预后的简便有效的指标,并能提高检出率。

RASSF1A基因启动子甲基化与非小细胞肺癌关系的meta分析

背景与目的肿瘤发生、发展过程中,抑癌基因启动子区域Cp G岛异常甲基化起着重要的作用。已有研究显示RAS相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)基因,作为一个抑癌基因其启动子区域甲基化与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的发生发展密切相关。在NSCLC患者癌组织中RASSF1A基因启动子往往表现为异常高甲基化。本研究采用meta分析的方法探讨RASSF1A基因启动子甲基化与NSCLC发生之间的关系。方法通过检索Medline、EMBASE、CNKI和万方数据库,按照已拟定的纳入与剔除标准筛选收集公开发表的关于RASSF1A基因启动子甲基化与NSCLC相关性的研究。以比值比(odds ratio,OR)和95%置信区间(confidence interval,CI)为效应指标,分析RASSF1A基因启动子甲基化与NSCLC的关系。结果共有23篇文献纳入本研究,RASSF1A基因启动子甲基化率在NSCLC患者肺部组织和对照组中分别为41.50%(95%CI:34%-49%)和5.58%(95%CI:2%-9%),meta分析显示肿瘤组织中的甲基化率高于对照组(OR=8.72,95%CI:4.88-15.58,P<0.05);亚组分析显示:肿瘤组织中的甲基化频率高于血浆(OR=10.99,95%CI:2.48-48.68)和正常对照组织(OR=8.74,95%CI:4.39-17.41)。结论 NSCLC患者肺癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化率高于对照组,组织中RASSF1A基因启动子甲基化率对肺癌的发生更具影响,RASSSF1A甲基化可能与肺癌的发生存在相关并可作为肺癌诊断的潜在标志物。

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的:探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法:运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Westernblotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果:在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例(70.83%)、11例(22.92%)和6例(12.50%)发生了甲基化,喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血(P<0.05)。在48例喉癌组织中27例(56.25%)不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例(16.67%),喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例(73.53%)呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例(14.29%),两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论:RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。

孕妇血浆中胎源性RASSF1A基因在无损性产前诊断中的应用研究

本研究旨在探讨运用非性别依赖的甲基化表观遗传学标记RASSF1A基因作为孕妇血浆中循环游离胎儿DNA存在的通用性标志的可行性。采用2种方法提取孕妇血浆游离DNA,选用其中效果较好的用磁珠法提取20例标本的游离DNA;采用RT-PCR方法扩增SRY基因以及甲基化酶处理后的RASSF1A基因,且对酶处理后RASSF1A基因的扩增体系进行条件优化。结果表明,在20例标本中11例检测有SRY基因,且与胎儿出生后性别相符;选用优化后的PCR体系扩增甲基化酶处理后的RASSF1A基因,在18例标本中检测有RASSF1A基因,在2例标本中未检测到此基因。结论:甲基化RASSF1A基因与SRY基因相比,不受胎儿性别限制,可作为广泛性胎儿特异性表观遗传学标记物,用于临床无损性产前诊断。

RASSF1A基因在前列腺癌中甲基化检测及其表达

目的探讨RASSF1A基因在中国人前列腺癌和前列腺增生组织中的表达及其甲基化检测。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测33例前列腺癌、28例前列腺增生和5例癌旁组织中的RASSF1AmRNA表达,并采用甲基化特异性PCR法分析其甲基化状态。结果48.5%的前列腺癌组织和17.9%的前列腺增生组织中RASSF1A表达缺失,66.7%的肿瘤组织中发现甲基化,高前列腺特异性抗原(PSA)和高TNM者启动子区甲基化的频率明显高于低PSA和低TNM者(P=0.01和0.049)。启动子区甲基化与发病年龄、细胞分化不相关,仅在2例前列腺增生组织中发现甲基化。结论RASSF1A甲基化可作为一个分子标志物,成为诊断肿瘤和预后的新方法。

宫颈癌中RASSF1A基因杂合性丢失及HPV感染状态的研究

[目的]研究RASSF1A基因的杂合性丢失(loss of heterozygosity,LOH)及人乳头瘤病毒(human papillo-mavirus,HPV)感染与宫颈癌临床病理参数之间的关系。[方法]选择3p上2个微卫星位点,对110例宫颈组织进行LOH及HPV感染状态的分析。[结果]宫颈癌及CIN中RASSF1A基因LOH阳性的比例明显高于正常宫颈(P﹤0.05);宫颈癌Ⅲ期和Ⅳ期LOH的阳性率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期(P﹤0.05);低分化宫颈癌的LOH阳性率明显大于高中分化宫颈癌(P﹤0.05);随CIN级别的增加LOH阳性率也呈逐渐递增趋势,高级别CIN(CINⅢ及原位癌)明显高于低级别CIN(CINⅠ/Ⅱ)(P﹤0.05)。宫颈癌中HPV感染阳性率明显高于CIN组及正常宫颈组(P﹤0.05);RASSF1A的LOH阳性率在HPV感染阳性组明显高于阴性组(P﹤0.05)。[结论]RASSF1A基因的改变是宫颈癌发生过程中的较晚期事件,RASSF1A基因的LOH对于宫颈癌的筛查、早期诊断及判断预后可能具有临床实用价值。HPV感染与RASSF1A基因的LOH共同作用在宫颈癌发展过程中更有意义。

RASSF1A基因甲基化在上皮性卵巢肿瘤中的检测及临床意义

卵巢癌是严重威胁女性健康的一种恶性肿瘤,由于缺乏早期诊断方法,70%的患者就诊时已是晚期,5年生存率仅为20%～30%。因此,如何早期诊断卵巢癌已是当前的研究热点。DNA甲基化是肿瘤发生的早期事件,