RASSF1A表达或缺失的两类早期肺腺癌组织差显蛋白的筛选与鉴定

目的:建立RASSF1A表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱,筛选并鉴定存在明显表达差异的蛋白质。方法:采用Western印迹技术,从RASSF1A转录缺失和RASSF1A转录正常的早期肺腺癌标本中筛选出RASSF1A表达和表达沉默的癌组织各5例。提取组织可溶性总蛋白,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白,建立两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱;PDQuest凝胶图像分析软件比较分析,筛选出差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱获得相应蛋白质点的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定差异表达的蛋白质。结果:建立了重复性较好的RASSF1A表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质双向电泳凝胶图谱;筛选出存在明显表达差异的蛋白质点17个,挖取其中的9个进行质谱分析,9个蛋白质点均得到了满意的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定出5种蛋白质,分别是:细胞色素b5(cytochrome b5),60S磷酸核糖体蛋白P2(60S acidic ribosomal protein P2),碳酸酐酶1(carbonic anhydrase-1),5-吡咯啉羧酸还原酶1(pyrroline-5-carboxylate reductase-1)和载脂蛋白A-Ⅰ前体蛋白(apolipoprotein A-Ⅰ precursor)。结论:成功建立了RASSF1A表达或表达缺失的两类不同早期肺腺癌组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱,从中鉴定出5种存在明显表达差异的蛋白质,为进一步研究RASSF1A作用的信号转导途径奠定了初步的基础。

RASSF1A蛋白在结肠癌中的表达意义

目的探讨结肠癌组织中RAS相关区域家族1A(RAS association domain family,RASSF1A)蛋白的表达意义。方法收集60例结肠癌及40例正常结肠黏膜组织,采用Western blotting检测RASSF1A蛋白在结肠癌组织中的表达情况(正常结肠黏膜组织为对照);利用免疫组织化学染色方法观察结肠癌及正常结肠黏膜组织中RASSF1A蛋白的表达情况,并分析其临床意义。结果①Western blotting结果显示,RASSF1A蛋白在正常结肠黏膜中表达高于结肠癌组织。②免疫组织化学染色结果显示,RASSF1A蛋白在正常结肠黏膜中的表达阳性率为95.0%(38/40),在结肠癌中为46.7%(28/60),正常结肠组织中RASSF1A蛋白的表达阳性率明显高于结肠癌组织(P<0.01)。Duke’s分期的A+B期RASSF1A蛋白表达阳性率为61.1%(22/36),而C+D期为25.0%(6/24);有淋巴结转移者RASSF1A蛋白表达阳性率为11.1%(2/18),而无淋巴结转移者为61.9%(26/42),RAS SF1A蛋白表达与Duke’s分期和淋巴结转移有关(P<0.01)。结论正常结肠组织中RASSF1A蛋白表达明显高于结肠癌组织,结肠癌中RASSF1A蛋白表达与Duke’s分期和淋巴结转移有关。