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RB1-C磷酸化位点突变体与Sedlin的共定位研究 被引量:1
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作者 潘林鑫 徐涛 +1 位作者 范礼斌 钱成 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第6期839-844,共6页
目的研究人视网膜母细胞瘤蛋白1羧基端(RB1-C)磷酸化位点突变体的蛋白表达和细胞定位情况及其与迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白(Sedlin)共定位的变化情况。方法设计RB1-C磷酸化位点突变体的引物,以质粒pcDNA3.1-FLAG-RB1-C为模板,利用PC... 目的研究人视网膜母细胞瘤蛋白1羧基端(RB1-C)磷酸化位点突变体的蛋白表达和细胞定位情况及其与迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白(Sedlin)共定位的变化情况。方法设计RB1-C磷酸化位点突变体的引物,以质粒pcDNA3.1-FLAG-RB1-C为模板,利用PCR技术分别扩增出pcDNA3.1-FLAG-RB1-C-S788A、S795A、S807A、T811A、T821A、T826A共6个突变体,并对各位点进行测序。分别将以上突变体单独转染至HEK 293T、COS7细胞中,利用Western blot和免疫荧光(IF)技术观察其蛋白表达和细胞定位情况;分别将以上突变体及Sedlin共同转染至COS7细胞中,利用IF技术观察二者在细胞内的共定位情况,并与野生型RB1-C的结果进行比较分析。结果测序结果显示RB1-C的6个磷酸化位点均突变成功,并能够在真核细胞内正常表达,且与野生型RB1-C的细胞定位基本一致,即主要定位在细胞核内。与野生型RB1-C相比,RB1-C-S788A、S795A、T821A、T826A与Sedlin的共定位未发生改变,即主要共定位在细胞核内;但RB1-C-S807A、T811A与Sedlin的共定位发生了显著变化,除了共定位于细胞核外,在细胞质中也存在共定位现象。结论RB1-C磷酸化位点突变体成功构建并表达,其中S807A、T811A两个磷酸化位点的突变能够显著改变RB1-C与Sedlin在细胞中共定位区域,表明它们是RB1-C和Sedlin结合的关键位点之一,为进一步研究RB1-C和Sedlin的相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤蛋白1 磷酸化 迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白 共定位
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高效液相色谱法定量分析竹节参中人参皂苷Rb_1的含量 被引量:2
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作者 刘少静 杨黎彬 +1 位作者 王小宁 康辛莉 《应用化工》 CAS CSCD 2012年第6期1089-1091,共3页
用RP-HPLC测定竹节参中人参皂苷Rb1的含量,采用Venusil ABS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm5,μm),以乙腈-水(35∶65)为流动相,流速1 mL/min,检测波长203 nm。结果表明,人参皂苷Rb1在25~500μg/mL间线性关系良好(r=0.999 4),平均加样回... 用RP-HPLC测定竹节参中人参皂苷Rb1的含量,采用Venusil ABS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm5,μm),以乙腈-水(35∶65)为流动相,流速1 mL/min,检测波长203 nm。结果表明,人参皂苷Rb1在25~500μg/mL间线性关系良好(r=0.999 4),平均加样回收率为99.64%,RSD=1.52%。该方法快速、准确、重现性好,可用于竹节参中人参皂苷Rb1的含量测定。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 竹节参 人参皂苷rb1 含量测定
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微生物转化人参皂苷Rb1为C-K的研究 被引量:2
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作者 金艳 尹成日 金恩华 《人参研究》 2010年第4期7-10,共4页
利用23种菌株对人参皂苷Rb1进行生物转化研究,发现一种灰绿毛状GH-9菌株使人参皂苷Rb1有效地转化为C-K。经形态学和内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)基因序列分析,该菌株属于青霉属(Penicillium),且接近于Penicillium dip... 利用23种菌株对人参皂苷Rb1进行生物转化研究,发现一种灰绿毛状GH-9菌株使人参皂苷Rb1有效地转化为C-K。经形态学和内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)基因序列分析,该菌株属于青霉属(Penicillium),且接近于Penicillium dipodomyicola。 展开更多
关键词 人参皂苷rb1 人参皂苷C-K 生物转化
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一株植物内生菌Coniochaeta sp.对三七总皂苷中人参皂苷Rb_1的特异性转化含量测定 被引量:13
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作者 郭从亮 杨晓艳 +4 位作者 陈子明 武双 王承潇 黄璐琦 崔秀明 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1075-1078,共4页
目的:研究一株植物内生菌对三七总皂苷中人参皂苷Rb1的特异性转化结果,并对其转化产物进行测定。方法:选择入侵性植物内生菌作为活性转化菌株筛分目标,采用TLC、HPLC法对转化产物进行测定。结果:获得一株人参皂苷Rb1转化活性菌株,该菌... 目的:研究一株植物内生菌对三七总皂苷中人参皂苷Rb1的特异性转化结果,并对其转化产物进行测定。方法:选择入侵性植物内生菌作为活性转化菌株筛分目标,采用TLC、HPLC法对转化产物进行测定。结果:获得一株人参皂苷Rb1转化活性菌株,该菌株可特异性地转化三七总皂中的人参皂苷Rb1,获得人参皂苷Rd和稀有人参皂苷C-K,且发酵12 d后人参皂苷C-K的转化率高达11.62%。结论:该转化可增加三七总皂苷中稀有人参皂苷C-K的含量,该法有望成为大量获得活性人参皂苷C-K的新途径。 展开更多
关键词 Coniochaeta sp. 生物转化 人参皂苷rb1 人参皂苷C-K
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Immunohistochemical analysis of p53,cyclinD1,RB1,c-fos and N-ras gene expression in hepatocellular carcinoma in Iran 被引量:73
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作者 SJ Moghaddam EN Haghighi +4 位作者 S Samiee N Shahid AR Keramati S Dadgar MR Zali 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2007年第4期588-593,共6页
AIM: To study the effect of some genes especially those involved in cell cycle regulation on hepatocellular carcinoma. METHODS: Paraffin-embedded tissue samples of 25 patients (18 males and 7 females) with hepatocellu... AIM: To study the effect of some genes especially those involved in cell cycle regulation on hepatocellular carcinoma. METHODS: Paraffin-embedded tissue samples of 25 patients (18 males and 7 females) with hepatocellular carcinoma were collected from 22 pathology centers in Tehran during 2000-2001, and stained using immunohistochemistry method (avidin-biotin-peroxidase) for detection of p53, cyclinD1, RB1, c-fos and N-ras proteins. RESULTS: Six (24%), 5 (20%), 12 (48%) and 2 samples (8%) were positive for p53, cyclinD1, C-fos and N-ras expression, respectively. Twenty-two (88%) samples had alterations in the G1 cell-cycle checkpoint protein expression (RB1 or cyclinD1). P53 positive samples showed a higher (9 times) risk of being positive for RB1 protein than p53 negative samples. Loss of expression of RB1 in association with p53 over-expression was observed in 4 (66.7%) of 6 samples. Loss of expression of RB1 was seen in all cyclinD1 positive, 20 (90.9%) N-ras negative, and 11 (50%) C-fos positive samples, respectively. CyclinD1 positive samples showed a higher (2.85 and 4.75 times) risk of being positive for c-fos and N-ras expression than cyclinD1 negative samples. CONCLUSION: The expression of p53, RB1 and c-fos genes appears to have a key role in the pathogenesis of hepatocellular carcinoma in Iran. Simultaneous overexpression of these genes is significantly associated with their loss of expression during development of hepatocellular carcinoma. 展开更多
关键词 免疫组织化学 肝癌 伊朗 肿瘤 组织病理学
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微生物转化人参主要皂苷Rb1为C-K的研究 被引量:13
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作者 武伦鹏 白龙律 +4 位作者 韩春峰 金恩华 马正赫 郭德山 尹成日 《人参研究》 2016年第2期7-11,共5页
从人参根部土壤分离的菌株对人参主要皂苷进行微生物转化,结果发现一株真菌GH26能有效地将人参主要皂苷Rb1转化为人参稀有皂苷C-K。同时对最佳转化条件进行了测定,在YB培养基,pH为4.0~8.0,温度为60℃时,菌株GH26生成C-K的最大转化率为76... 从人参根部土壤分离的菌株对人参主要皂苷进行微生物转化,结果发现一株真菌GH26能有效地将人参主要皂苷Rb1转化为人参稀有皂苷C-K。同时对最佳转化条件进行了测定,在YB培养基,pH为4.0~8.0,温度为60℃时,菌株GH26生成C-K的最大转化率为76.6%,经形态学和内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)基因序列分析,该菌株属于真菌属Fungal。 展开更多
关键词 人参皂苷rb1 人参皂苷C-K 生物转化
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人参皂甙Rb1对应激大鼠肝脏热休克蛋白70和蛋白激酶C的影响及相关性研究 被引量:4
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作者 许利刚 李宁 《浙江中医药大学学报》 CAS 2009年第4期480-482,共3页
[目的]研究人参皂甙Rb1对应激大鼠肝脏HSP-70(热休克蛋白质70)和PKC(蛋白激酶C)的影响及两者的关系。[方法]56只SD(Sprague-Dawley)大鼠分为人参皂甙组、生理盐水组、假手术组,均采用大鼠肝脏缺血再灌注制作应激模型,手术后于30min、60... [目的]研究人参皂甙Rb1对应激大鼠肝脏HSP-70(热休克蛋白质70)和PKC(蛋白激酶C)的影响及两者的关系。[方法]56只SD(Sprague-Dawley)大鼠分为人参皂甙组、生理盐水组、假手术组,均采用大鼠肝脏缺血再灌注制作应激模型,手术后于30min、60min及180min定点处死实验动物,收集肝脏标本,应用ELISA法测定大鼠肝细胞HSP70的表达及PKC的水平。[结果]人参皂甙30min组和60min组与生理盐水组比较,HSP70表达明显较高(P<0.05);人参皂甙60min组PKC水平较生理盐水组高,有显著性差异(P<0.05);大鼠肝脏的PKC水平与HSP70的表达进行线性回归分析显示两者呈显著的正相关。[结论]人参皂甙Rb1可以提高应激时大鼠肝脏HSP70的表达和PKC水平提高,且HSP70的表达与PKC水平的变化呈正相关。 展开更多
关键词 人参皂甙rb1 应激 热休克蛋白质70 蛋白激酶C
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三七皂苷Rg_1、Rb_1对大鼠局灶性脑缺血后c-fos、c-jun表达的抑制作用分析 被引量:6
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作者 张路 张霞 武凡 《临床合理用药杂志》 2012年第34期18-20,共3页
目的探讨三七皂苷Rg1、Rb1对大鼠局灶性脑缺血后c-fos、c-jun的表达与细胞凋亡的关系。方法将雄性Wistar大鼠60只随机分为单纯缺血30min再灌流0、0.5、1、3、6、12、24、48天8个时点组和正常对照组、假手术组,每组6只大鼠。用线栓法造... 目的探讨三七皂苷Rg1、Rb1对大鼠局灶性脑缺血后c-fos、c-jun的表达与细胞凋亡的关系。方法将雄性Wistar大鼠60只随机分为单纯缺血30min再灌流0、0.5、1、3、6、12、24、48天8个时点组和正常对照组、假手术组,每组6只大鼠。用线栓法造成大鼠局灶性脑梗死模型。用Tunel法检测脑细胞凋亡,用免疫组化法测定转录因子c-fos、c-jun在肝内的表达。结果 Tunel法检测出细胞凋亡在缺血再灌后24~48h达高峰,c-fos在3h达高峰,c-jun持续增加,24h达高峰。三七皂苷Rg1、Rb1显著抑制c-fos、c-jun的表达。结论 c-fos、c-jun的表达与细胞凋亡有关,提示三七皂苷Rg1、Rb1可通过抑制c-fos、c-jun的表达降低脑细胞凋亡。 展开更多
关键词 脑缺血 局灶性 c-fos C-JUN 三七皂苷RG1 三七皂苷rb1
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人参皂苷Rb1对糖氧剥夺所致SH-SY5Y细胞凋亡的影响及机制研究
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作者 高丽 兴芝博 +2 位作者 陆斌 刘磊 栾永昕 《中国实验诊断学》 2016年第9期1425-1428,共4页
目的为了探讨人参皂甙Rb1(GRb1)对糖氧剥夺(OGD)所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及GRb1的保护作用机制。方法采用体外培养SH-SY5Y细胞,应用MTT法、TUNEL染色、流式细胞仪、Western Blotting等方法检测GRb1对糖氧剥夺所致SH-SY5Y细胞凋亡... 目的为了探讨人参皂甙Rb1(GRb1)对糖氧剥夺(OGD)所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及GRb1的保护作用机制。方法采用体外培养SH-SY5Y细胞,应用MTT法、TUNEL染色、流式细胞仪、Western Blotting等方法检测GRb1对糖氧剥夺所致SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用。结果 GRb1预处理能增强OGD损伤细胞的生存能力,抑制OGD诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。进一步研究显示GRb1能抑制由OGD线粒体膜电位的降低和线粒体内细胞色素C(cyct C)的释放。结论研究表明GRb1对OGD诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用与其对线粒体功能的保护有关。 展开更多
关键词 人参皂苷rb1 糖氧剥夺 线粒体 细胞色素C
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竹节参中人参皂甙含量分析 被引量:4
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作者 向其柏 欧惠英 +1 位作者 乐美麟 邬安珍 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 1992年第4期54-56,共3页
本文报道了竹节参中二种主要皂甙(R_(b1)和R_(g1)的HPLC定性和定量测定法。结果表明:人参皂甙R_(b1)和R_(g1)的含量较高。R_(b1)和R_(g1)的相对标准偏差分别为3.05%和3.18%,R_(b1)和R_(g1)的回收率分别为86.5~110.1%和94.7~102.7%。
关键词 竹节参 人参皂甙Rb1 Rg1 高效液相色谱法
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