流产布鲁氏杆菌RB51疫苗对性成熟公牛和怀孕青年母牛的生物安全性试验

选用 6头 3岁娟姗公牛和 7头怀孕中期杂种青年母牛，采用标准幼牛剂量的流产布鲁氏杆菌 RB51(RSB51)疫苗免疫后，检测菌落和菌群的情况。结果表明：试验牛中无一头分离出流产布鲁氏杆菌 (SRB51)疫苗菌体，公牛的配种可靠性正常，母牛的怀孕状态正常。宰杀剖检后，从公牛、母牛包括胎儿的任何组织中均分离不到 (SRB51)疫苗菌种，但血清学分析可检测到 SRB51特异性抗体。 (Am J Vet Res 1999;60:722－ 725)

合成七肽在牛种布鲁氏菌RB51株侵染人单核细胞系THP-1过程中对MAPK通路的影响

目的观察七肽LPAAQKT在布鲁氏菌侵染人单核细胞系THP-1过程中对MAPK通路的影响。方法通过MTT法检测合成七肽对THP-1的毒性;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测七肽对感染细胞凋亡的影响;通过CFU计数分析七肽对感染细胞内细菌数量的影响;采用qRT-PCR和Western blot检测牛种布鲁氏菌RB51感染THP-1不同阶段MAPK通路中ERK1/2、JNK1/2、P38的mRNA和蛋白活化及表达情况。结果合成七肽对THP-1无毒性作用;流式细胞术检测七肽对THP-1细胞凋亡作用的影响为:感染复数50∶1组4h时对细胞凋亡有促进作用,48h时对细胞凋亡有抑制作用;CFU计数显示在感染前预先加入七肽导致THP-1细胞内布鲁氏菌数少于未加七肽组;qRTPCR和磷酸化Western blot显示,感染4h时,七肽降低感染组中erk1的转录与蛋白活化,感染48h时七肽降低jnk1/2的转录与蛋白活化。结论环化七肽CLPAAQKTC参与感染细胞的凋亡过程,因此有望用于布鲁氏菌病治疗药物的研发。

PI3K/Akt信号通路在胞内布鲁氏菌存活中的作用

为了检测对PI3K/Akt信号通路在巨噬细胞内布鲁氏菌存活的影响,将布鲁氏菌粗糙型菌株RB51和光滑型菌株S2308分别侵染细胞,应用Western blot技术检测RB51和S2308和对巨噬细胞内p-Akt(S473)和p-Akt(T308)表达的影响;用MTT法检测抑制剂LY294002(LY)对细胞活性的影响;通过菌落计算法,检测抑制剂LY对胞内菌RB51和S2308存活的影响。结果表明,粗糙型菌株RB51和光滑型菌株S2308都可激活PI3K/Akt信号通路,但粗糙型菌株RB51的激活程度显著弱于光滑型菌株S2308(P<0.01);抑制剂LY在小于或等于20μmol/L浓度时不影响细胞活性;抑制剂LY(20μmol/L)可显著抑制光滑型菌株S2308的存活,但不影响粗糙型菌株RB51的存活。本研究表明,PI3K/Akt信号通路在光滑型菌株存活中发挥重要作用。

NF-κB信号通路调控布鲁氏菌胞内存活分子机制的初步研究

本试验用布鲁氏菌强、弱毒株侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,旨在探讨NF-κB信号通路与布鲁氏菌强、弱毒株在胞内生存的关系。采用光滑型牛布鲁氏菌2308、粗糙型牛布鲁氏菌RB51在不同感染复数下侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,侵染0、4、8、24h后,裂解细胞收集蛋白,Western blotting检测布鲁氏菌对激活NF-κB信号通路的影响。利用不同浓度的NF-κB信号通路抑制剂处理小鼠巨噬细胞RAW264.7,然后用布鲁氏菌在不同感染复数下侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,ELISA试剂盒检测细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达量;同时对胞内菌CFU进行计数。结果显示粗糙型牛布鲁氏菌RB51可以强烈激活NF-κB信号通路,光滑型牛布鲁氏菌2308对其激活作用较弱;同时对NF-κB信号通路的激活具有浓度依赖性,在感染复数为80∶1、侵染时间为8h时光滑型牛布鲁氏菌2308和粗糙型牛布鲁氏菌RB51对NF-κB激活程度最强,且该通路参与产生TNF-α、IL-1β和IL-6;NF-κB信号通路抑制剂BAY11-7082影响布鲁氏菌在胞内的生存。因此,粗糙型牛布鲁氏菌RB51胞内存活与NF-κB信号通路密切相关,为进一步研究布鲁氏菌的胞内致病机制奠定基础,也为布鲁氏菌新型药物的研发、家畜布鲁氏菌病预防和治疗提供科学依据。

一种无线数传系统设计

通过对目前几种近距离无线技术的分析比较,选用Nordic公司的nRF2401无线收发芯片和Atmel公司低功耗、高性能的8位CMOSMCUAT89C51RB2完成了近距离无线通信系统的硬件设计。该系统控制方便、工作稳定,能实现可靠的无线数据传输,可应用于无线鼠标、无线键盘、无线操纵杆、无缝接入、无线数据传输、汽车应用等领域。

基于P89V51RB2的超声波包络检测测距系统

设计了一种新型的超声波测距系统,该系统以单片机P89V51RB2为控制核心,利用包络检波电路构造回波包络,并通过微分过零点检测电路确定回波包络峰值点时间,进而确立超声波在被测距离上的传播时间。同时详细介绍了有关的硬件电路实现,包络法的采用有效得提高了测量的精度。

基于I^2C总线电子万年历的设计与实现

本文基于I2C总线,设计了电子万年历计时系统,给出了系统的硬件组成电路和软件设计方法。该系统以P89V51RB2作为系统主控芯片,飞利浦PCF8563实时时钟芯片构成时钟电路模块,用ZLG7290专用显示、按键驱动芯片构成显示电路模块和按键电路模块。与同类产品最大的不同的是使用了ZLG7290芯片,并利用I2C总线通信,使硬件电路大大简化。设计出的电子万年历实现时间、日期的8位LED数码管显示,时间、日期信息的键盘调节以及闹铃的功能,可以满足各种公共场合的计时需求。

牛种布鲁菌virB4基因酵母表达载体的构建

根据GenBank中的牛种布鲁菌RB51株virB4基因保守序列设计引物，扩增virB4基因，将其克隆到pMD18-T载体上，鉴定正确后与酵母表达载体pGBKT7进行连接，转化酿酒酵母菌Y187后进行PCR、酶切鉴定，阳性克隆测序分析后转化酿酒酵母菌Y187感受态细胞进行自激活和毒性检测。结果表明：克隆的基因包含了virB4完整编码区的2496bp核苷酸序列，成功地构建了包含pGBKT7-virB4诱饵质粒的酿酒酵母菌Y187表达菌。