改进RBB染色法初步筛选几丁质酶基因chiA的表达

对RBB(Remazol Brilliant Blue)底物染色方法进行产几丁质酶细菌的酶活性筛选,应用几丁质胶体平板诱导表达的筛选取得好的效果.粘质沙雷氏菌几丁质酶基因chiA在E.coli中的异源表达过程:首先从质粒pMD-chiA(DH5α)中切出含粘质沙雷氏菌几丁质酶基因chiA的片段,将其插入到表达载体pET-22b(+)内,构建成几丁质酶表达质粒pET-chiA.然后,转化进入DH5α感受态细胞内,鉴定正确后将pET-chiA质粒转入BL21(DE3)pLysS中进行表达,并进行初步筛选.

基于弹性蛋白-RBB底物的弹性蛋白酶活力检测方法研究

以Remazol brilliant blue R染色牛颈韧带弹性蛋白粉,制成染色弹性蛋白。底物稳定性好,在较宽pH范围内染料不易洗脱。以弹性蛋白-RBB为底物,建立了一种能在较宽pH范围内测定制革蛋白酶的弹性蛋白水解活力方法。确定酶活测定条件:反应时间为30min,温度为40℃,基于5mg底物量,待测酶液中弹性蛋白酶活在90～160U/mL范围内,水解液的吸光度与酶的浓度呈良好的线性关系。方法重线性较好。几种常用制革蛋白酶在不同pH下测定的结果表明,一些细菌蛋白酶显示出较高的弹性蛋白酶活力,最适作用pH值在9左右。

Rbb4l促进TGF-β/Nodal信号转导和斑马鱼胚胎的背部发育

TGF-β/Nodal信号通路在斑马鱼胚胎背腹分化过程中发挥重要作用。为了进一步探究该信号通路的功能及作用机制,文章采用酵母双杂交的方法,以斑马鱼Smad2/3a为诱饵蛋白筛选得到一系列Smad2/3a的互作蛋白,其中之一为Rbb4l(Retinoblastoma binding protein 4,like)。已有的报道表明,Rbb4l的人类同源蛋白RBBP4(Retino blastoma binding protein 4)是染色质修饰相关的复合体的组成成分,但它在脊椎动物胚胎发育过程中的作用还知之甚少。文章通过体外及体内的一系列实验表明,Rbb4l能直接与Smad3a互作,增强TGF-β/Nodal信号。在斑马鱼胚胎中过表达rbb4l导致胚胎的背部化,伴随着背部标记基因表达区域的扩大和腹部标记基因表达区域的缩小。相反,在胚胎中下调rbb4l的表达,可以导致胚胎在24 hpf(hours post-fertilization)左右出现腹部化的表型。文章进一步通过一系列的挽救实验,证明在缺少Nodal信号的情况下,rbb4l的过表达不能引起胚胎的背部化。综上所述,Rbb4l可以增强Nodal/Smad2/3信号,并且这种正向调节的功能依赖于Nodal信号本身。

erbB4/HER4在乳腺癌的表达研究

目的检测第四人体表皮生长因子受体(HER4)在乳腺癌组织中的表达,探讨HER4过度表达与乳腺癌临床病理的关系。方法采用免疫组化的方法检测89例乳腺癌组织中HER4的表达。结果 HER4在正常乳腺细胞中呈阴性表达,HER4在乳腺癌细胞中呈强阳性表达,且HER4在乳腺癌肿瘤细胞中主要定位于细胞核和细胞质,乳腺癌组织中HER4的过度表达率为70.78%,乳腺癌中HER4的过度表达仅与淋巴结转移及TNM分期有关联性。结论 erbB4基因是乳腺癌生长的一个调控基因,干预HER4蛋白的过度表达可能是治疗乳腺癌的有效方法。

人溶菌酶活性两种检测方法的比较研究

为了比较琼脂平板扩散法和RBB-R染料标记比色法测定溶菌酶活性的灵敏度和可重复性,分别以人溶菌酶标准品建立标准曲线,用两种方法对不同稀释倍数的人溶菌酶进行5次重复测定,并分析测定结果的标准差、变异系数和误差率。结果表明:两种方法测定溶菌酶的灵敏度分别为1.5和0.5μg·mL-1,RBB-R染料法标准差、变异系数、误差率均小于琼脂平板扩散法。用RBB-R染料标记比色法测定的正常鸡蛋清中溶菌酶含量为2.84-4.19mg·mL-1,与报道的相符,说明RBB-R染料标记比色法具有操作简便、定量准确和重复性好等优点,适合大批样品及微量样品的检测。

结核分枝杆菌重组Bb-MPT64疫苗的构建、鉴定及表达

目的:构建和鉴定结核分枝杆菌重组双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb)-MPT64疫苗。方法:以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到MPT64抗原编码基因序列,定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-MPT64;用电穿孔法将该质粒导入Bb及BL21(DE3),构建结核分枝杆菌重组双歧杆菌-MPT64疫苗。用IPTG诱导重组BL21(DE3)菌表达MPT64/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Westernblot对表达产物进行鉴定。结果:PCR成功扩增出688bp的MPT64目的基因;双酶切证实MPT64目的基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-MPT64疫苗构建成功。免疫印迹分析发现重组质粒pGEX-MPT64的表达产物在相对分子量(50ku)处有明显的蛋白表达条带,且能被活动性结核病人血清特异识别。结论:成功构建了结核分枝杆菌rBb-MPT64疫苗,为发展新型结核病疫苗奠定了基础。

转基因小鼠乳汁中重组人溶菌酶活性的检测

目的:摸索精确检测本室制备的人溶菌酶(hLYZ)转基因小鼠乳汁中重组酶表达量的方法。方法:对溶菌酶检测的两种常规方法—琼脂平板扩散法和光学比浊法进行了改进,并以hLYZ标准品为检测对象,比较了改进后两种方法的优缺点。采用改进后的琼脂平板扩散法对转基因小鼠乳汁中表达的重组hLYZ进行检测。结果:在敏感性和可重复性方面,此两种方法无明显差别,但琼脂平板扩散法无特殊要求且简便易行。结论:改进的琼脂平板扩散法是一种更适宜于检测大批量微量样品中LYZ活性的良好方法。

残差块形自助法在非对称单位根检验中的适用性

非对称单位根检验已成为时间序列分析中重要研究领域之一。而当随机干扰项之间具有一般性的自相关时,非对称单位根检验式中,由于不同的滞后阶会对统计量检验势产生至关重要的影响,因此采用残差块形自助法(RBB)对非对称单位根EG检验进行有效的改进研究,并对RBB法的适用性进行了模拟。结果表明:RBB法不仅在一定程度上降低了检验水平扭曲,而且大大提高了EG法的检验势。

RBM方法及其在万国邮联战略规划中的应用

RBM是一种管理方法论 ,在许多组织得到了广泛应用。文章简要介绍了RBM的思想。

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗诱导BALB/c鼠脾细胞增殖、亚群及细胞因子的动态变化

目的观察日本血吸虫重组Bb（p GEX-Sj32）疫苗诱导免疫鼠脾细胞免疫应答的动态变化,探讨该重组疫苗的免疫机制。方法 88只BALB/c鼠随机分为口服组和滴鼻组,口服组小鼠经口服单次接种106克隆形成单位（CFU）重组疫苗,滴鼻组小鼠经滴鼻单次接种105CFU重组疫苗;于免疫后0~20周内间隔2周每组随机剖杀4只小鼠,取脾并制备脾细胞悬液,分别经未刺激（脾细胞悬液）、Sj AWA刺激和Con A刺激培养。MTT法检测脾细胞增殖效率,流式细胞术检测脾CD4＋T细胞和CD8＋T细胞亚群变化,双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中TNF-α、IL-10和IL-12表达水平。结果与0周相比,未刺激、Sj AWA刺激和Con A刺激时,口服组和滴鼻组脾细胞均分别在免疫后2~16周和2~18周发生极显著增殖（P〈0.01）;两组CD4＋T细胞亚群均于免疫后2~12周显著升高（P〈0.01）,CD8＋T细胞亚群在观察期间升高不明显;不同培养条件下,口服组脾细胞因子TNF-α、IL-10和IL-12水平均分别在免疫后2~14周、2~18周和2~14周升高,于8周、10周和6周达峰值;滴鼻组3者分别在免疫后2~14周、2~18周和2~18周升高,于8周、10周和8周达峰值。结论日本血吸虫重组Bb（p GEX-32）疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。

多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗诱导小鼠细胞因子变化的研究

目的:研究多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对原头蚴攻击小鼠细胞因子变化的影响。方法:将重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种和口服接种免疫BALB/c小鼠12周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,取脾脏制备淋巴细胞悬液体外培养,分别以多房棘球绦虫抗原(EmAg)、刀豆素A(ConA)刺激诱生白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素10(IL-10)和干扰素γ(IFN-γ);以脂多糖(LPS)刺激诱生肿瘤坏死因子α(TNF-α)。常规ELISA测定脾细胞培养上清液中IL-12、IL-10、IFN-γ和TNF-α水平。结果:与对照组相比,疫苗免疫组IFN-γ、IL-12、TNF-α水平增加,IL-10水平降低,EmAg刺激组和ConA或LPS刺激组细胞因子水平明显高于相应的原液组。结论:多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗可诱导攻击感染小鼠产生Th1型细胞免疫应答,增强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应。

面向FPGA的低功耗多路选择器设计方法

针对现场可编程门阵列(FPGA)因集成度与速度提高引起的功耗问题,提出一种适合于FPGA的低功耗多路选择器设计方法。该方法基于FPGA中被使用的多路选择器内存在大量闲置晶体管这一现象,采用反向衬底偏置技术对被使用多路选择器中闲置晶体管的泄漏电流进行优化。仿真结果表明:与传统结构多路选择器相比,在保证其他性能的前提下,采用该方法设计的多路选择器泄漏功耗可降低约28.97%。此外,该方法也可应用于FPGA中未被使用多路选择器泄漏电流的优化,可以进一步大幅度降低FPGA的静态功耗。

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj32)疫苗免疫BALB/c小鼠诱导免疫应答的动态研究

目的动态观察日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗免疫BALB/c小鼠后诱导的免疫应答,探讨该疫苗的免疫机制。方法将日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗分别经口服（PO）和滴鼻（IN）途径免疫BALB/c小鼠,在免疫后0~20周,每隔2周每组随机剖杀4只小鼠,取脾并制备脾细胞悬液,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测脾细胞增殖水平、流式细胞仪（FACsort）检测脾CD4＋和CD8＋T淋巴细胞亚群和脾细胞凋亡、双抗体夹心ELISA法检测血清及脾细胞培养上清液中细胞因子IL-10、IL-12和TNF-α水平和血清抗体IgG及其亚类、IgE和IgA的动态变化。结果当SjAWA和ConA刺激或不刺激时,PO组和IN组脾细胞增殖水平均于免疫后6周达最高水平,分别于6周和8周达最高脾细胞凋亡发生率,脾CD4＋T细胞亚群百分比分别在6周和8周达峰值,两组CD8＋T细胞亚群百分比在免疫后2~20周升高不显著,PO组脾细胞因子IL-10、IL-12和TNF-α水平均分别于10周、6周和8周达峰值,IN组分别在10周、8周和8周达峰值,口服组血清抗体IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgA水平均于8周达峰值,而IN组除IgG和IgA于8周达峰值外,其余均于12周达最高水平,IgE于14周达峰值,两组血清细胞因子IL-10、IL-12和TNF-α水平分别在免疫后（PO组）14、6和8周及（IN组）8、6和8周达最高水平。结论该疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。

丁基罗丹明B-AuI_4^-缔合纳米粒子体系的极谱猝灭效应研究(英文)

在 0 1mol/LH2 SO4介质中 ,丁基罗丹明B(RBB)在 - 0 5 9伏产生 1个单扫描极谱峰。当有AuI4- 存在时 ,AuI4- 与RBB+主要通过静电引力形成疏水性的AuI4- 2RBB缔合物分子。AuI4- 2RBB存在较强的分子间作用力和疏水作用力而生成紫红色的 (AuI4-RBB) n 纳米微粒 ,在 470nm处产生 1个瑞利散射峰 ,在 61 0nm处产生 1个共振瑞利散射峰 ;而在 - 0 5 9伏处的极谱峰降低。这是由于该紫红色复合纳米微粒形成所致。当纳米微粒体系加入乙醇后 ,体系的瑞利散射峰和共振瑞利散射峰消失 ,极谱峰、同步荧光峰和颜色恢复 ,由于乙醇而致使紫红色的 (AuI4-RBB) n 纳米微粒分解为红色AuI4-RBB分子。研究结果表明 ,紫红色 (AuI4-RBB) n 纳米粒子的形成是其极谱猝灭和共振瑞利散射效应的根本原因。

日本血吸虫重组Bb疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠不同时间诱导的免疫应答作用

目的：探讨日本血吸虫重组两歧双歧杆菌（rBb）疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠后不同时间诱导的免疫应答作用,阐明该疫苗的免疫应答机制。方法：将88只BALB/c小鼠随机分为2组,每组44只,分别经皮下注射（皮下注射组,SC组）和鼻腔黏膜（鼻腔黏膜接种组,IN组）接种免疫小鼠,在免疫后0-20周每2周每组随机取4只小鼠,无菌取脾,制备悬浮脾细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测脾细胞增殖活性,流式细胞仪（FACsort）检测T细胞亚群和脾细胞凋亡率,双抗体夹心ELISA法检测脾细胞上清液中干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）和白细胞介素17（IL-17）的动态变化。结果：与免疫0周时比较,SC组小鼠脾细胞增殖活性于免疫后8周达到峰值（P〈0.05）,IN组小鼠于免疫后4周达到峰值（P〈0.05）。与免疫0周时比较,SC组和IN组小鼠CD4＋T细胞均于免疫后8周达到峰值（P〈0.05）;CD8＋T细胞分别于8周和6周达到峰值,但差异无统计学意义（P〉0.05）。与免疫0周时比较,2组小鼠脾细胞上清液中IFN-γ水平均于免疫后2周达到峰值（P〈0.05）,SC组和IN组IL-17水平分别于免疫后14和12周达到峰值（P〈0.05）。与免疫0周时比较,SC组小鼠脾细胞凋亡率于免疫后2周达到峰值（P〈0.05）,IN组于4周达到峰值（P〈0.05）。IN组与SC组小鼠各检测指标比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：经皮下注射和鼻腔黏膜途径接种的日本血吸虫重组Bb疫苗早期即可诱导小鼠产生有效的免疫应答,以Th1型免疫应答为主,2种免疫途径所诱导的免疫应答无明显差异。

日本血吸虫重组Bb(pGEX-Sj26GST)疫苗免疫BALB/c小鼠脾细胞动态观察

目的观察日本血吸虫重组Bb（pGEX—Sj26GST）疫苗免疫BALB／c小鼠后脾细胞增殖、亚群和凋亡的动态变化。方法将疫苗分别经皮下注射（SC组）和鼻腔粘膜接种（IN组）免疫BALB／c鼠，在免疫后O～22周每2周每组随机剖杀4只小鼠，无菌取脾，制成单个悬浮脾细胞，用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测脾细胞增殖水平、用流式细胞仪（FACsort）检测T细胞亚群和脾细胞凋亡状况。结果未刺激及sjAWA刺激时SC组小鼠脾细胞增值水平于免疫后4～20周明显升高，ConA刺激时于4～18周显著升高，均于免疫后8周达最高水平；IN组脾细胞增殖水平原液组、SjAwA组和ConA组分别于2～18周、2～10周及14～18周、2～8周和12～18周显著升高，均于免疫后4周达最大值（P〈0．01或P〈0．05）。SC组和IN组CD＋T细胞分别于免疫后2～14周、2周及6～16周升高，并于8周达峰值（P〈0．01或P〈0．05）；两组CD＋T细胞均于2～20周轻微升高，分别于8周和6周达较高值（P〉0．05）。未刺激和ConA刺激时SC组脾细胞凋亡水平分别于免疫后2～4周、2～6周升高显著，均于免疫后2周达最大值（P〈O．01或P〈O．05）；IN组均于4周显著升高并达峰值（P〈O．01）。结论日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj26GST）疫苗可诱导脾细胞的增殖，增加cD＋T细胞的数目，抑制脾细胞的凋亡而发挥保护性免疫应答。

违章行为的分析与控制

运用分类分析的方法，依据违章时行为人所处的状况，确定违章行为的四种基本类型，并逐类分析其原因，提出了相应的控制防范要点。

有线电视接入网与ATM主干城市网的互连设计及协议

通过有线电视网（ＣＡＴＶ）为普通家庭提供ＡＴＭ网络服务越来越受到网络界的重视。它的总体性能比目前通过电话线拨号与城市主干网相连，为用户提供Ｉｎｔｅｒｎｅｔ服务的方式要好得多。本文介绍有线电视网与ＡＴＭ主干网互连的两种解决方案：ＡＴＭ论坛的ＲＢＢ和ＩＥＥＥ８０２．１４协议。

RAN技术在校园网中的应用

RA N( Residential A ccess N etw ork,居民接入网 )是目前较流行的网络热点技术 ,针对 RAN的概念、原理、技术实现方法等技术的分析 。

交联木聚糖制备工艺的优化和活性检测研究

交联木聚糖RBB-xylan是木聚糖酶在测定和筛选过程中常用的人工合成的色原底物,利用木聚糖和雷玛唑亮蓝制备RBB-xylan的传统方法得率较低.在传统方法的基础上采用改变单一变量对原有的实验方法逐步改进:将硫酸钠的滴加流速调整为0.8 m L/s,增加1 h陈化时间,将沉淀剂乙醇的用量提高3倍,从而使RBB-xylan得率从原来的50.5%提高到84.8%,效果显著.将RBB-xylan添加到平板可快速筛选出产木聚糖酶的菌株.结果表明,合成的RBB-xylan具有活性,可用于后续木聚糖酶的筛选及活性测定.