产生抗D的DVI type 3型孕妇免疫血清学和RHD基因型分析

目的:对部分D表型孕妇进行免疫血清学和RHD基因型分析。方法:采用常规血型血清学方法鉴定孕妇RhD血型,并进行血型特异性抗体筛查和鉴定;采用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reactionsequence specific primer,PCR-SSP)鉴定孕妇RHD基因型;采用多重连接依赖的探针扩增技术(multiplex ligationdependent probe amplification,MLPA)对孕妇及其配偶和女儿的RhD血型抗原进行基因分型及遗传分析。结果:该孕妇血清中检测出IgG抗-D,其抗体效价为1∶8。PCR-SSP结果显示,该孕妇RHD基因第3-6外显子缺失,经鉴定该孕妇RHD基因型为DVI type 3型。MLPA分析显示,该孕妇只有1条RHD等位基因,且缺失3-6外显子,其基因型为CDVIe/cde,其配偶为CDe/CDe纯合子基因型,女儿为CDe/CDVIe基因型。结论:准确的RhD血型鉴定对制定安全有效的临床输血策略和对育龄妇女采取恰当措施及预防新生儿溶血病具有重要意义。

马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇遮盖红细胞RhD抗原研究

[目的]马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇(MDPEG)修饰红细胞,遮蔽RhD抗原,使Rh+红细胞转变为Rh-红细胞。[方法]甲基苯甲酸和聚乙二醇单甲醚(分子量5000)为原料合成MDPEG(分子量5910)。红细胞修饰:3%～5%RBC+MDPEG+2-亚氨基硫烷(IT)、pH 7.4、室温2 h。盐水法进行红细胞与ABO血型、RhD血型血清学实验。血流变仪测定红细胞黏度等指数。盐水梯度法测定红细胞渗透脆性。[结果]30 mg/ml马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇能有效遮蔽3%～5%红细胞RhD抗原,红细胞与抗RhD抗体无凝集反应,光学显微镜观察红细胞无聚集,细胞形态正常。红细胞膜渗透性、红细胞聚集指数轻微升高,刚性指数轻微下降。[结论]马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇(MD-PEG)能完全遮盖RhD抗原,获得RhD阴性红细胞,细胞形态,结构正常。

保存期间试剂红细胞血型相关膜蛋白抗原性研究

目的研究红细胞膜蛋白抗原稳定性随保存时间变化。方法 D抗原、Fy^a抗原、Jk^a抗原、在保存节点（0、14、28、42 d）,对上述红细胞血型抗原抗原性进行检测。结果在标化后的抗体范围,使用国际标准抗体,应用流式细胞术,在42 d检出对比组之间的D抗原抗原性差异具统计学意义（下降11. 3%; P〈0. 05）; 42 d时,应用微柱凝胶卡,使用国际标准品（下降33%）、单克隆IgG-D（下降66%）、IgM-D（下降26%）,检出对比组之间的D抗原抗原性差异具统计学意义（P〈0. 01）,Fy^a抗原抗原性检出对比组之间的差异具统计学意义（下降33%,P〈0. 05）,Jk^a抗原抗原性未检出,对比组之间的差异具统计学意义。结论实验室应定期对谱细胞进行质控,对于弱抗体的检测宜使用较新鲜的谱细胞或新鲜细胞进行检测及确认。

流式细胞术测定红细胞存活率的方法建立

目的 :建立应用流式细胞术测定红细胞体内存活率的方法。方法 :献血者Rh表型ccDEE ,受血者为CCDEE ,以抗 c为一抗结合ccDEE的红细胞 ,两群细胞按设定的比例混合 ,以山羊抗人标记荧光素的IgGab段为二抗连接抗 c ,经流式细胞仪测定ccDEE表现型红细胞在两群细胞中所占的比例 ,并与实际的比例进行相关性比较。结果 :已知两群细胞数的比例与流式细胞仪测定的比例的相关系数r =99.87。结论

细胞浓度对血型血清学试验灵敏度的影响

目的探索在常用血型血清学试验细胞浓度范围内,浓度的上限和下限对直接血凝试验及间接抗球试验的检测灵敏度是否有影响。方法采用单克隆Ig M及Ig G抗-D分别与1%、2%、3%、4%、5%、6%的R1R2细胞反应,通过试管法结合流式细胞术,检测抗体与不同浓度红细胞的反应效价,以及同一抗体浓度下不同浓度红细胞的抗体结合效率的差异。并采用酶联免疫吸附(ELISA)方法对单克隆抗体浓度进行定量。结果单克隆Ig M抗-D及Ig G抗-D的效价随着红细胞浓度的下降而依次降低,在常用血清学红细胞浓度范围内,2%红细胞与两类抗体的反应效价皆是5%的4倍。在相同抗体浓度下,细胞结合抗体平均荧光强度(MFI)随细胞浓度下降而升高。其中当Ig M、Ig G抗-D浓度分别为(25.50±1.1)μg/m L和(2.71±0.08)mg/m L时,2%红细胞结合Ig M抗-D及Ig G的MFI分别比5%红细胞高出104.2%和67.8%。结论在常用血型血清学试验细胞浓度范围内,血型血清学试验检测灵敏度随红细胞浓度下降而升高。

用于RhD抗原流式细胞检测的固定透化方法评价

目的寻找具有回收率高且适于RhD抗原荧光检测的红细胞固定透化方法。方法分别采用4%甲醛、4%多聚甲醛、2%戊二醛对红细胞进行固定,同时采用4%甲醛-Triton X-100、4%多聚甲醛-Triton X-100、2%戊二醛-Triton X-100对红细胞进行透化固定,未处理红细胞作为对照。冰上固定20 min,洗涤后计算红细胞回收率。在各组红细胞中加入1∶128的RhD Ig G单克隆抗体,同时设组内空白对照,37℃孵育30 min。PBS洗涤3次后加入1∶200的FITC荧光抗体,37℃孵育30 min,PBS洗涤3次后流式细胞仪检测。结果 2%戊二醛及2%戊二醛-Triton X-100 2组的回收率分别为72.83%与72.80%,高于对照组(58.32%),甲醛及多聚甲醛2组的回收率在4.00%左右,远低于对照组。流式检测结果显示,不同固定剂的荧光本底均高于未处理红细胞。与对照组相比甲醛与多聚甲醛会减弱RhD抗原荧光强度,而戊二醛不影响RhD荧光强度,戊二醛-Triton X-100可增强RhD抗原检测的灵敏度。结论2%戊二醛-Triton X-100固定透化法不仅可得到较高的红细胞回收率,且RhD荧光检测的灵敏度也得到提升,是荧光检测RhD抗原较理想的固定透化方法。

mPEG-SPA对红细胞A、B抗原的遮蔽及稳定性初步研究

目的探讨mPEG-SPA修饰对A、B、AB三种血型红细胞上A、B抗原的遮蔽效果及稳定性。方法采用合适浓度的mPEG-SPA修饰不同血型红细胞,并分别保存在O型血浆中以观察红细胞凝集情况、保存在原血浆和MAP液中以测定游离血红蛋白。结果连续保存45d,显微镜下观察mPEG-SPA修饰的红细胞在O型血浆中未见凝集,在原血浆中保存21d时血浆游离血红蛋白≤0.29g/L;在MAP液中保存35d时游离血红蛋白≤1g/L。结论在保存期内,经mPEG-SPA化学修饰的A、B、AB三种血型红细胞的抗原遮蔽效果稳定、游离血红蛋白指标均符合临床输血要求。

血型抗原在亲子纠纷案中的应用

本文报告用白细胞抗原(HLA)和红细胞抗原(ABO,MN,P和 Rh)测定技术,判定亲子纠纷案六起,此六起亲子纠纷案全部可根据单独白细胞抗原的测定结果作判定,其中有五起也可根据白细胞抗原和红细胞抗原两个系统测定的结果进行判定,说服力更强,无一案是单独根据红细胞抗原测定结果判定的。血型抗原在亲子纠纷案鉴定中的意义,以白细胞抗原的测定为最重要,红细胞抗原测定结果侧重于排除作用。当然以采用多系统联合鉴定为最佳,本文报告之六起亲子纠纷案,经过多系统联合鉴定所判断的结果,被指控人均已向公安局承认,说明判定结果全部正确。

红细胞抗原免疫印迹法在抗SSA抗体分型中的应用

建立了以人红细胞为ＳＳＡ抗原来源的免疫印迹法（ＲＢＣ－ＩＢＴ）检测ＳＳＡ抗体。此法的敏感性略低于常规的对流免疫电泳法（ＣＩＥ），但可检出部分ＣＩＥ中阴性的ＳＳＡ抗体阳性血清，而且尚可鉴定出ＳＳＡ抗体的两种亚型（５２ＫＤ和６０ＫＤ）。检测了干燥综合症（ＳＳ）、系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）及类风湿性关节炎（ＲＡ）等三组病人血清，其中ＳＳ和ＳＬＥ两组在ＳＳＡ抗体亚型的分布上差异显著。抗５２ＫＤＳＳＡ抗体主要分布于ＳＳ组（Ｐ＜０．０５），而抗６０ＫＤＳＳＡ抗体主要见于ＳＬＥ组（Ｐ＜０．０５），ＲＢＣ－ＩＢＴ中，非特异或不明显色带极少见，而ＳＳＡ抗体带清晰、易辨。

鸡新城疫抗体水平检测技能大赛及其流程

鸡新城疫抗体水平测定是全国高职院校的一个传统职业技能大赛,同时也是全国行业大赛设立的赛项之一,大部分的养殖业都需要此类技术人才;举行鸡新城疫抗体水平检测技能大赛有助于提高学生学习的积极性和技能水平,通过竞赛,使学生熟练掌握此门技术,便于就业,更好的为社会服务.因此,熟悉鸡新城疫抗体水平检测技能大赛及其流程很有必要.

血型基因定型用于辅助鉴定高频抗原抗体的研究——附1例稀有血型Di(a+b-)产生疑似抗-Di^b鉴定报告

目的利用红细胞基因分型辅助鉴定对抗高频抗原的抗体(Antibody against high prevalence antigens)。方法对1例对抗高频抗原的抗体用血清学定型和基因定型(genotype),同时采用菠萝酶与巯基试剂(DTT)处理红细胞进行抗体鉴定。结果抗筛细胞与谱细胞反应均阳性、反应强度一致且直抗和自身对照阴性,患者血清中存在对抗高频抗原的抗体。用试剂抗体血清学方法未检出稀有血型抗原,而基因分型检出患者为稀有血型Di(a+b-),其血清中存在的高频抗原抗体高度怀疑为抗-Di^b。结论红细胞基因定型在辅助鉴定对抗高频抗原的抗体中有重要意义。

国内常用抗体筛选试剂红细胞抗原谱分析

目的分析国内广泛使用的抗体筛选试剂红细胞标识的抗原谱,探讨其抗原组合的合理性。方法收集4个国产厂家(G1、G2、G3、G4)和2个进口厂家(J1、J2)共68批次抗体筛选试剂红细胞的抗原谱,统计各个厂家不同批次抗体筛选试剂红细胞D、C、c、E、e、M、N、S、s、Fya、Fyb、Jka、Jkb、K、k、Lea、Leb、P1、Dia、Mur共20种抗原的表达率,及D、C、c、E、e、Fya、Fyb、Jka、Jkb、S、s、M、N共13种具有剂量效应抗原符合纯合子要求的比率。结果 6个厂家抗体筛选试剂红细胞的抗原谱均标识表达有D、C、c、E、e、M、N、s、Fya、Jka、Jkb、Lea、Leb;S在G2、G3分别仅有30%、67%的批次表达;Fyb在G1仅有29%的批次表达;P1在G4均未标识;K在G1、G4均未标识,在G2、G3均不表达;k在G1均未标识;Dia仅在G4所有批次表达;Mur在6个厂家所有批次的抗体筛选试剂红细胞均未标识。具有剂量效应的抗原仅在J1所有批次符合纯合子要求,其他厂家所有批次均不符合纯合子要求。结论所分析的6个厂家抗体筛选试剂红细胞应用于中国人群,抗原组合均存在一定缺陷,主要是缺乏部分抗原(如S、Fyb、K、Dia、Mur)和部分具有剂量效应的抗原(如Fyb、Jka、Jkb、S、M、N)不是纯合子,存在漏检有临床意义红细胞抗体的风险。

中国哈尔滨地区满族人群11个红细胞血型系统24种稀有血型抗原的基因多态性研究

目的:初步了解中国哈尔滨地区满族人群的11个红细胞血型系统24种抗原基因的多态性特征。方法:采用聚合酶链式反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)技术,对200例哈尔滨地区满族人群进行GYPB(S/s)、Duffy、Kell、Dombrock、Diego、,Kidd、Scianna、Colton、Lutheran、Yt、Mur等11个血型系统的S、s;Fy^a、Fy^b;K、k;Do^a、Do^b;Di^a、Di^b;JK^a、JK^b;Sc1、Sc2;Co^a、Co^b;Lu^a、Lu^b;Yt^a、Yt^b;Kp^a、Kp^b;Mur1、Mur2等共计24个抗原基因进行检测和分型。结果:哈尔滨地区满族人群GYPB(S/s)血型系统基因频率为:S=0.0625,s=0.9325;Duffy血型系统基因频率为:Fya).0525,Fyb_=0.9475;Dombrock血型系统基因频率为:Do^a=0.1250,Do^b=0.8750;Diego血型系统基因频率为:Di^a=0.0275,Di^b=0.9725;Kidd血型系统基因频率为:JK^a=0.5650,JK^b=0.4350;Mur血型系统基因频率为:Mur1=0.0050,Mur2=0.9950;Kell、Scianna、Colton、Lutheran、Yt血型系统抗原基因频率不具有多态性,基因型分别为kkKp^bKp^b,Sc1Sc1,Co^aCo^a,Lu^bLu^b,Yt^aYt^a。结论:哈尔滨地区满族人群GYPB(S/s)、Duffy、Dombrock、Diego、Kidd和Mur血型系统抗原基因频率具有多态性,而Kell、Scianna、Colton、Lutheran、Yt血型系统呈抗原基因频率单态性分布。

流式细胞术检测红细胞嵌合体在异基因造血干细胞移植中的研究

目的:研究异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后红细胞嵌合体的动态改变。方法:采用流式细胞术(FCM)对14例进行allo-HSCT的血液病患者的ABO血型和Rh血型进行分析,检测时间分别为术后的15d、30d和60d。结果:所有患者均在allo-HSCT后15~30d内表达供者红细胞抗原,移植物抗宿主反应(GVHD)和ABO血型不合均不影响RBC嵌合体的表达。结论:FCM可用于RBC嵌合体的定量检测,是allo-HSCT后RBC嵌合体动态分析的理想方法。

Human RBCs blood group conversion from A to O using a novel α-N-acetylgalactosaminidase of high specific activity

α-N-acetylgalactosaminidase (αNAGA) can convert group A human red blood cells (RBCs) to group O. One novel αNAGA gene was cloned by PCR from Elizabethkingia meningosepticum isolated from a domestic clinical sample. Pure recombinant αNAGA was obtained by genetic engineering and protein purification with a calculated molecule of 49.6 kD. αNAGA was selective for terminal α-N-acetylgalacto-samine residue with a high specific activity. αNAGA could completely remove A antigens of 1 U (about 100 mL) group A1 or A2 RBCs in 1 h at pH 6.8 and 25℃ with a consumption of 1.5 or 0.4 mg recombinant enzyme. Enzyme-converted group A RBCs did not agglutinate after being mixed with monoclonal anti-A or sera of groups A,B,AB and O. Other blood group antigens except ABO had no change. FCM analy-sis showed that A antigens and A1 antigens disappeared while H antigens increased. It indicated that αNAGA successfully converted human blood group A RBCs to universally transfusable group O RBCs without the risk of ABO-incompatible transfusion reactions. This αNAGA was suitable for producing universal RBCs to increase clinical transfusion safety,improve the RBCs supply,and to decrease transfusion cost and support transfusion service in case of emergency.