RBM6通过GSK-3β/β-catenin调节途径对膀胱尿路上皮癌细胞发挥抗增殖和促进凋亡作用

RNA结合模体蛋白(RBM)家族几乎在所有细胞中均有表达,而且在进化上高度保守。以前的研究表明,RBM5在膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)组织中表达下调,由此引起的细胞凋亡减少,进而促进肿瘤的进展。然而,RBM5氨基酸序列与其同源的RBM6在膀胱尿路上皮癌中的作用及相关机制尚不清楚。本研究检测RBM6在膀胱尿路上皮癌中的表达,探索其在膀胱癌细胞系中过表达对细胞增殖和凋亡的影响。利用qRT-PCR和Western印迹等技术,研究发现,RBM6在人膀胱尿路上皮癌组织和所检测的2个膀胱癌细胞系中表达均显著下调,并且其下调程度与患者的预后不良呈正相关。MTS检测细胞增殖的结果显示,RBM6过表达导致细胞增殖活性下降。细胞克隆形成实验结果也表明,RBM6过表达抑制细胞克隆形成能力(P<0.01)。原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay, TUNEL染色)检测细胞凋亡表明,在RBM6过表达的细胞中,TUNEL阳性细胞数由对照组的17.17±3.27增加到44.00±8.04(P<0.05)。RBM6抗增殖及促凋亡的作用机制研究发现,在T24细胞中过表达RBM6后,β-联蛋白(β-catenin)和G1/S-特异性细胞周期蛋白-D1(G1/S-specific cyclin-D1,cyclin D1)mRNA表达水平分别降低65%和79%,对应的蛋白质水平分别降低60%和73%;反之,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A/p21)mRNA表达水平升高约1.9倍,对应蛋白质水平升高约1.8倍。重要的是,糖原合酶激酶3 beta(glycogen synthase kinase-3 beta,GSK-3β)磷酸化水平升高约2.4倍。细胞过表达β-联蛋白促进细胞增殖(P<0.05),而利用小分子化合物LY294002促进GSK-3β磷酸化后,抑制细胞增殖(P<0.05)。综上所述,RBM6通过GSK-3β/β-catenin调节途径对膀胱尿路上皮癌细胞发挥抗增殖和促进凋亡作用。干预该调节途径可能是治疗膀胱尿路上皮癌的潜在靶点。

TKTL1 mRNA、RBM6 mRNA在喉癌患者病灶组织中的表达及对预后的影响

目的探讨类转酮醇酶1(TKTL1)mRNA、RNA结合基序蛋白6(RBM6)mRNA在喉癌患者病灶组织中的表达及对预后的影响。方法选取喉癌患者102例作为研究对象,其中癌组织作为观察组,癌旁正常组织作为对照组。比较两组TKTL1 mRNA、RBM6 mRNA水平,分析TKTL1 mRNA与RBM6 mRNA相关性,评价两者与喉癌患者临床病理因素的关系,随访3年,统计喉癌患者3年生存率,对比不同TKTL1 mRNA、RBM6 mRNA表达患者3年生存率。结果观察组TKTL1 mRNA水平高于对照组,RBM6 mRNA水平低于对照组(P<0.05);TKTL1 mRNA与RBM6 mRNA呈负相关(P<0.05);喉癌患者临床分期、淋巴结转移、复发与TKTL1 mRNA呈正相关,与RBM6 mRNA呈负相关,组织学分化程度与TKTL1 mRNA呈负相关,与RBM6 mRNA呈正相关(P<0.05);TKTL1 mRNA高表达患者3年生存率低于低表达患者,RBM6 mRNA高表达患者3年生存率高于低表达患者(P<0.05)。结论TKTL1 mRNA、RBM6 mRNA在喉癌患者病灶组织中呈反向变化,且表达水平与临床分期、淋巴结转移、复发及预后生存关系密切,可能参与喉癌的恶性进展过程。

RNA结合蛋白RBM6的研究进展

RBM6(RNA binding motif protein 6)是一种RNA结合蛋白,存在5种可变剪接体。以往的研究发现:与正常组织相比,这些剪接体在肺癌和乳腺癌等肿瘤组织中的表达均有显著变化,但其功能尚不清楚。越来越多的研究显示,RBM6可能是肿瘤进展中的一个重要的调控因子。该文将从RBM6的基因与蛋白结构、作用机制以及与疾病的关系三个方面对RBM6的研究进展进行总结。

结合基序蛋白6在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨RNA结合基序蛋白6(RBM6)在结直肠癌(CRC)中表达水平及临床病理学意义。方法应用免疫组织化学方法检测92例配对的CRC及癌旁组织石蜡包埋标本RBM6表达水平,观察其与CRC病人临床病理学参数的关系;再以Western印迹和qRT-PCR检测28例配对冷冻保存的新鲜CRC及癌旁组织中RBM的蛋白和mRNA表达水平。结果免疫组化结果显示:RBM6在92例CRC表达明显高于癌旁组织表达水平(癌组织30.4%,28/92vs癌旁10.9%,10/92;P<0.01)。卡方检验显示:RBM6的表达与CRC肿瘤的大小、分化程度、浸润深度及淋巴结转移无明显相关性(P>0.05),但与患者TNM分期和远处转移呈正相关(P=0.026,P=0.021)。单因素分析发现:RBM6高表达CRC患者预后更差(P=0.024)。qRT-PCR和Western印迹结果显示:RBM6在CRC中蛋白和mRNA表达均高于配对癌旁组织(P<0.01;P=0.009)。结论 RBM6在CRC中呈高表达,并与患者临床分期、远处转移及不良预后相关,可能参与CRC的恶性进展。

RNA结合蛋白6对喉癌发生发展的调节作用及机制研究

目的探讨RNA结合蛋白6(RBM6)对喉癌发生发展的调节作用及机制。方法收集15例原位喉癌患者在术中的喉癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western Blot检测RBM6、表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)的表达。将携带RBM6基因(Lv-RBM6,RBM6组)或空质粒(Lv-Ctrl,对照组)的重组慢病毒载体转染入人喉癌细胞系LCC构建RBM6过表达喉癌细胞及对照细胞,采用CCK-8法和Transwell法分别检测细胞增殖、迁移和侵袭,并检测MMP-2、MMP-9、EGFR、ERK和p-ERK的表达。将稳定表达Lv-RBM6或Lv-Ctrl的LCC细胞注射于裸小鼠右侧颈背部皮下组织,建立Lv-RBM6过表达人喉癌裸小鼠移植瘤模型,每2天计算移植瘤体积。结果与癌旁组织对比,RBM6在喉癌组织中的表达显著降低(P<0.05),EGFR和p-ERK的表达显著增加(P<0.05),ERK无显著变化。RBM6在3/4期患者喉癌组织中的表达显著低于其在1/2期患者中的表达(P<0.05)。体外实验显示,与对照组相比,RBM6组细胞在12 h、24 h、48 h、72 h的细胞增殖活性均显著降低(P<0.05),迁移细胞数及侵袭细胞数均显著降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9、EGFR和p-ERK的表达显著降低(P<0.05),ERK无显著变化。异种移植瘤实验显示,与Lv-Ctrl组相比,Lv-RBM6组裸小鼠接种后12 d、14d、16 d、20 d、24 d、28 d肿瘤体积显著降低(P<0.05),EGFR和p-ERK的表达显著降低(P<0.05),ERK无显著变化。结论RBM6可抑制喉癌的生长和进展,作为肿瘤抑制因子抑制喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导其凋亡,其机制可能与抑制EGFR相关信号传导途径的活性有关。