基于PTEN/PI3K/Akt信号通路探讨糖通饮对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨糖通饮对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞损伤的保护作用。方法高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(STZ)多次注射建立DN大鼠模型,并随机分为模型组、厄贝沙坦组(13.5mg/kg)和糖通饮低、中、高剂量组(930、1860、3720mg/kg),另设置正常组,各组灌胃给予相应剂量药物,每天1次,连续8周。检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、24h尿蛋白(24-hUP)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平,HE染色观察各组大鼠肾组织病理形态学改变,透射电子显微镜观察肾足细胞超微结构变化,RT-qPCR法检测肾组织PTEN、PI3K、Akt、nephrin、podocin、CD2APmRNA表达,Westernblot法检测肾组织PTEN、PI3K、Akt、p-Akt、nephrin、podocin、CD2AP蛋白表达。结果与模型组比较,糖通饮各剂量组FBG、24-hUP、Scr、BUN水平降低(P<0.05,P<0.01),肾组织病理形态和足细胞超微结构得到改善,PTEN、nephrin、podocin、CD2APmRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),p-Akt蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);糖通饮中、高剂量组PI3K、AktmRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论糖通饮对DN大鼠肾组织足细胞有保护作用,其机制可能与调节PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

基于PTEN与JAK对PI3K/Akt信号通路的影响探讨加味小蓟饮子治疗急性放射性膀胱炎的作用机制

目的:探讨加味小蓟饮子治疗急性放射性膀胱炎的作用机制。方法:50只ICR小鼠随机分为空白组12只和造模组38只。采用X射线辐照仪造模,造模后随机取2只小鼠处死鉴定模型是否成功。将剩余造模组小鼠随机分为模型组、小蓟饮子组和加味小蓟饮子组各12只。空白组、模型组、小蓟饮子组、加味小蓟饮子组分别予0.9%氯化钠、0.9%氯化钠、小蓟饮子药液,加味小蓟饮子药液灌胃处理,每日1次,连续7 d。末次灌胃后24 h处死取材,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)含量。Western Blot法检测小鼠膀胱丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)、E钙粘着蛋白(E-Cadherin)、内皮素-1(ET-1)、JAK激酶(JAK)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、人第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)、Smad蛋白2(Smad2)、Smad蛋白3(Smad3)、转化生长因子β1(TGF-β1)、尿斑蛋白3(Upk3)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白相对表达水平;实时荧光免疫定量-聚合酶链式反应法(RT-PCR)法检测小鼠膀胱微RNA-21(MicroRNA-21,miR-21)、PTEN、JAK、PI3K、AKT、Nrf2信使核糖核酸(mRNA)相对表达水平。结果:相较模型组,加味小蓟饮子组小鼠体内SOD、GSH-Px、T-AOC、AKT、E-Cadherin、JAK、Nrf2、PI3K、Upk3含量升高(P<0.05),MDA、ET-1、PTEN、Smad2、Smad3、TGF-β1、VEGF含量下降(P<0.05);与模型组和小蓟饮子组比较,加味小蓟饮子miR-21 mRNA表达升高(P<0.05)。结论:加味小蓟饮子组可能通过上调miR-21表达,同调PTEN、JAK蛋白以激活下游PI3K/AKT/Nrf2信号通路治疗急性放射性膀胱炎。

血必净注射液通过PTEN/PI3K/Akt/mTOR信号通路对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨血必净注射液对肺缺血再灌注损伤的保护作用及其相关机制。方法:选择18只健康成年雄性大鼠,随机分为正常对照组(Sham组)、肺缺血再灌注组(LIR组)、血必净注射液组(XBJ组),采用开胸夹闭左肺门构建肺缺血再灌注损伤大鼠模型,苏木素—伊红染色观察各组大鼠肺组织病理学改变,检测各组大鼠肺组织湿/干重比(W/D)及肺组织炎症因子IL-1β、TNF-α水平,Western Blot检测各组肺组织PTEN、PI3K、Akt、mTOR、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62蛋白表达,qRT-PCR检测各组肺组织PTEN、PI3K、Akt、mTOR mRNA表达。结果:血必净注射液可显著减轻肺缺血再灌注大鼠肺组织损伤,降低缺血再灌注大鼠肺组织W/D及IL-1β、TNF-α含量(P<0.05)。与Sham组相比,LIR组、XBJ组PTEN、PI3K、Akt、mTOR、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62表达均升高(P<0.05);与LIR组相比,XBJ组PTEN、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62表达降低(P<0.05),PI3K、Akt、mTOR表达升高(P<0.05)。与Sham组相比,LIR组、XBJ组PTEN、PI3K、Akt、mTOR mRNA表达升高(P<0.05);与LIR组相比,XBJ组PTEN mRNA表达降低(P<0.05),PI3K、Akt、mTOR mRNA表达升高(P<0.05)。结论:血必净注射液可能通过抑制PTEN,激活PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制肺缺血再灌注损伤自噬水平,从而改善肺缺血再灌注损伤,达到保护肺组织的作用。

黄芩清热除痹胶囊通过PTEN/PI3K/AKT信号通路改善痛风性关节炎大鼠的炎症反应及尿酸、脂质代谢失衡

目的探究黄芩清热除痹胶囊(HQC)对痛风性关节炎(GA)大鼠炎症反应及尿酸、脂质代谢的影响,并探讨其可能机制。方法随机将60只SD大鼠分为6组:正常组,模型组,HQC低、中、高剂量组,秋水仙碱组(n=10);以单钠尿酸盐注射右踝关节腔进行GA大鼠造模,HQC低、中、高剂量组及秋水仙碱组予相应剂量药物灌胃,模型组予等量生理盐水,连续7 d。造模后4、8、24、48、72 h检测各组大鼠足趾肿胀度;HE染色法进行滑膜组织学分析;ELISA检测血清中白细胞介素(IL)-10、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β1、脂联素(APN)、瘦素(LP)、抵抗素(RS)、内脂素(VF)的表达,检测滑膜中APN、LP、RS、VF的表达;生化法检测血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血尿酸(BUA)的水平;RT-qPCR检测滑膜中磷酸酶与紧张素同源物(PTEN)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)mRNA的表达;Western blotting检测PTEN、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果与正常组比较,模型组足趾肿胀度升高(P<0.05),且在48 h达到高峰;HE染色显示大量炎性细胞浸润和滑膜组织增生;TNF-α、TGF-β1、IL-18、TC、TG、LP、RS、VF、BUA、p-PI3K、p-AKT的表达增加(P<0.05),IL-10、APN、HDL-C、PTEN的表达降低(P<0.05)。与模型组比较,HQC和秋水仙碱可降低TNF-α、TGF-β1、IL-18、TC、TG、LP、RS、VF、BUA、p-PI3K、p-AKT的表达(P<0.05),升高IL-10、APN、HDL-C、PTEN的表达(P<0.05),减轻滑膜组织病理损伤,改善足趾肿胀度。结论HQC可改善GA大鼠炎症反应及尿酸、脂质代谢失衡,可能与抑制PTEN/PI3K/AKT信号通路有关。

阿魏酸通过调节PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制急性T淋巴细胞白血病进展

目的探究阿魏酸是否可通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路在体内外抑制急性T淋巴细胞白血病进展。方法将急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞分为对照组、阿魏酸处理组和LY294002处理组进行体外实验,对照组正常培养;阿魏酸处理组分别给予不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、80、160µmol/L)阿魏酸,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,筛选实验浓度;LY294002处理组给予50µmol/L PI3K/AKT抑制剂LY294002,采用克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭情况,采用Western blot检测核蛋白Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、PTEN、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白相对表达量。使用30只雄性BALB/c裸鼠建立移植瘤裸鼠模型,平均分为正常组和阿魏酸处理组进行体内实验,正常组接种Jurkat细胞后以生理盐水灌胃,阿魏酸处理组接种Jurkat细胞后以75 mg/kg阿魏酸灌胃,比较移植瘤质量和体积变化,并检测肿瘤组织中Ki67、cleaved caspase-3/caspase-3、E-cadherin、N-cadherin、PTEN、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT水平。结果体外实验中,与对照组比较,5、10、20µmol/L阿魏酸处理组和LY294002处理组细胞克隆形成率、细胞侵袭数、Ki67、PCNA、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT明显降低/减少(P<0.05),细胞凋亡率、cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9、E-cadherin、PTEN明显升高(P<0.05)。体内实验中,与正常组比较,阿魏酸处理组裸鼠肿瘤质量减轻,肿瘤体积减小,肿瘤组织中Ki67、N-cadherin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT明显降低,cleaved caspase-3/caspase-3、E-cadherin、PTEN明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论阿魏酸在体内外均可抑制急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖及侵袭,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与调控PTEN/PI3K/AKT信号通路有关。

黄芪甲苷靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR通路激活肺泡细胞自噬治疗肺纤维化

目的探究黄芪甲苷-IV(Astragaloside IV,AS-IV)靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR信号通路激活自噬,抑制特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis,IPF)发展进程的作用机制。方法通过气管注射10 mg·kg^(-1)博莱霉素造模小鼠IPF,分别以10、20、40 mg·kg^(-1) AS-IV及5 mg·kg^(-1)醋酸泼尼松连续治疗28 d。对肺样本进行伊红美蓝,马松染色,及透射电镜观察。实时荧光定量法(qRT-PCR)或蛋白免疫印迹法(Western blot)检测样本中miR-21、P62、Beclin^(-1)、LC3B、PTEN、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR等的表达。结果醋酸泼尼松及40 mg·kg^(-1) AS-IV可显著减少肺纤维组织增生与炎性细胞浸润,抑制嗜锇性板层小体变性,促进肺泡上皮细胞中自噬体的形成,显著上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例与Beclin^(-1)、PTEN蛋白表达,下调P62、miR-21表达,并抑制mTOR与AKT的磷酸化。但AS-IV治疗对PI3K表达无明显影响。结论AS-IV通过靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR信号通路激活,从而激活肺泡细胞自噬逆转IPF。

过表达CBX7调控PTEN/Akt信号通路干预上皮-间充质转化抑制胃癌细胞迁移、侵袭

目的探讨染色体盒蛋白同源物7(CBX7)对胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)、迁移、侵袭的影响及相关作用机制。方法将CBX7过表达质粒和阴性对照质粒、CBX7 siRNA和阴性对照siRNA转染至体外培养的人胃癌细胞SGC7901。采用qRT-PCR和Western blot法检测细胞中CBX7的mRNA和蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Transwell小室检测细胞侵袭情况,Western blot法检测细胞中EMT相关蛋白和磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白表达。结果与pcDNA-NC组比较,pcDNA-CBX7组SGC7901细胞存活率、迁移率及侵袭数均显著下降/减少,细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、PTEN蛋白表达量均显著升高,N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达量、p-Akt/Akt均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CBX7组SGC7901细胞存活率、迁移率及侵袭数均显著升高/增加,细胞中E-cadherin、PTEN蛋白表达量均显著下降,N-cadherin、Vimentin蛋白表达量和p-Akt/Akt均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达CBX7可通过抑制EMT进程抑制胃癌细胞迁移、侵袭,其作用机制可能与调控PTEN/Akt信号通路有关。

基于PTEN/PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨淫羊藿苷联合地塞米松对阿霉素诱导足细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨淫羊藿苷联合地塞米松对阿霉素诱导足细胞损伤的保护作用及分子机制。方法体外培养大鼠肾小球足细胞,阿霉素诱导建立足细胞损伤模型,分为:空白组、模型组、淫羊藿苷联合地塞米松组及氯喹组。免疫荧光法测定足细胞特异性骨架蛋白synaptopodin的表达;转染mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示体系,激光共聚焦显微镜观察足细胞内自噬流的强弱;透射电镜观察足细胞内自噬体、自噬溶酶体的变化;Western Blot法检测足细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62及自噬信号通路蛋白PTEN、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达。结果与模型组比,淫羊藿苷联合地塞米松组的synaptopodin的表达升高(P<0.05);足细胞内自噬流水平、自噬体及自噬溶酶体数量均增加(P<0.01);LC3-Ⅱ、PTEN的表达上调(P<0.01),但p62、pPI3K、p-Akt、p-mTOR的表达下调(P<0.01)。与淫羊藿苷联合地塞米松组比,氯喹组synaptopodin的表达降低(P<0.05);足细胞内自噬流的水平降低;自噬体数量增加(P<0.05),自噬溶酶体的数量减少(P<0.01);且LC3-Ⅱ和p62表达同步升高(P<0.05,P<0.01),但PTEN、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达无明显变化(P>0.05)。结论淫羊藿苷联合地塞米松可能通过激活PTEN,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,增强足细胞自噬水平,达到保护足细胞的作用。

miR-21靶向PTEN调控AKT/FoxO1信号通路对胃癌细胞凋亡的机制研究

目的:探究miR-21靶向PTEN调控AKT/FoxO1信号通路对胃癌细胞凋亡的影响。方法:将胃癌SGC-7901细胞分为miR-NC inhibitors组(SGC-7901细胞中转染miR-NC inhibitors质粒)、miR-21 inhibitors组(SGC-7901细胞中转染miR-21 inhibitors质粒)、miR-21 inhibitors+sh-PTEN组(SGC-7901细胞中转染miR-21 inhibitors和sh-PTEN质粒);Control组(不转染任何质粒的SGC-7901细胞)。qRT-PCR检测细胞中miR-21 mRNA表达;采用CCK-8、Transwell小室法和流式细胞仪检测细胞增殖、侵袭能力和凋亡率;蛋白质印迹检测细胞中PTEN、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、FoxO1蛋白表达;双荧光素酶报告检测miR-21和PTEN的靶向关系。结果:人正常胃黏膜上皮细胞GES-1(1.00±0.10)相比,胃癌细胞SGC-7901中miR-21(1.89±0.17)表达明显升高(P<0.05)。Control组相比,miR-21 inhibitors组细胞中miR-21表达(0.83±0.10)、增殖率(45.31±4.92)%、侵袭数目(62.34±5.83)个和p-PI3K/PI3K(0.42±0.05)、p-AKT/AKT(0.51±0.05)比值均明显降低,细胞凋亡率(23.48±3.51)%、PTEN(0.98±0.10)和FoxO1(0.76±0.08)蛋白表达明显升高(P<0.0001)。pcDNA-NC组相比,pcDNA-PTEN组细胞增殖率(48.26±5.01)、侵袭细胞数(65.37±6.02)个和细胞中p-PI3K/PI3K(0.46±0.05)、p-AKT/AKT(0.55±0.06)比值均明显降低,细胞凋亡率(25.61±3.27)%及细胞中PTEN(0.91±0.09)和FoxO1(0.70±0.08)蛋白表达升高(P<0.05)。预测发现PTEN的3'UTR端与miR-21有碱基互补结合点位。miR-NC组相比,转染野生型PTEN(PTEN-WT)时miR-21组(0.32±0.03)荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。miR-21 inhibitors组相比,miR-21 inhibitors+sh-PTEN组细胞增殖率(90.25±9.14)%和侵袭细胞数(125.69±10.31)个和细胞中p-PI3K/PI3K(0.80±0.08)、p-AKT/AKT(0.76±0.08)比值明显增加,细胞凋亡率(6.24±1.32)和细胞中PTEN(0.30±0.04)、FoxO1(0.38±0.05)蛋白表达降低(P<0.0001)。结论:敲减miR-21可靶向负调控PTEN表达,调控AKT/FoxO1信号通路,抑制胃癌细胞的增殖和侵袭,促进凋亡。

Notch/PTEN/AKT信号通路在跑台运动减轻db/db小鼠肾纤维化中的作用及机制研究

目的:探讨运动对2型糖尿病模型db/db小鼠肾损伤的保护作用及机制。方法:将8周龄的雄性db/db小鼠随机分为4组:db/db组(n=8)、db/db+跑台运动(Exe)组(n=7)、db/db+Exe+Notch抑制剂二苯并氮䓬(DBZ)组(n=7)和db/db+DBZ组(n=6);同月龄雄性m/m小鼠作为阴性对照(Con)组(n=10)。db/db+DBZ组和db/db+Exe+DBZ组小鼠进行DBZ干预(灌胃8周,每周5 d,0.04 mg/kg),db/db+Exe组和db/db+Exe+DBZ组小鼠进行跑台运动(运动8周,每周5 d;db/db+Exe+DBZ组小鼠在灌胃2 h后进行运动)。HE染色和PAS染色评价肾组织形态学变化;Masson染色观察肾组织纤维化程度;试剂盒检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)水平;Western blot检测肾组织纤维化指标、Notch/PTEN/AKT信号通路相关蛋白和自噬相关蛋白的表达。结果:(1)与Con组相比,db/db组小鼠体重和血糖显著升高(P<0.01),运动干预后显著降低(P<0.05)。(2)与Con组相比,db/db组小鼠BUN和SCr水平显著升高(P<0.01),组织学染色显示肾组织损伤加重,运动干预后BUN和SCr水平均显著降低(P<0.01),肾组织损伤减轻。(3)Western blot结果显示,与db/db组相比,db/db+Exe组I型胶原(Col-I)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达显著减少(P<0.05),Col-Ⅲ和转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))表达有下降趋势,免疫荧光显示小鼠肾脏中α-SMA、Col-I和纤连蛋白荧光染色阳性信号显著减弱;db/db+DBZ组TGF-β_(1)蛋白表达下降(P<0.01);db/db+Exe+DBZ组Col-I、α-SMA、Col-Ⅲ和TGF-β_(1)蛋白表达有下降趋势,但差异无统计学意义。(4)与db/db组相比,db/db+Exe组和db/db+DBZ组Notch1、Hes1和Hey1表达水平及p-AKT/AKT比值均显著降低(P<0.05),PTEN蛋白表达上调(P<0.05),而db/db+Exe+DBZ组Notch1、Hes1、Hey1和p-AKT/AKT蛋白表达无显著差异,PTEN蛋白显著升高(P<0.01)。(5)与db/db组相比,db/db+Exe组和db/db+DBZ组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P<0.01),p62表达显著减少(P<0.01);db/db+Exe+DBZ组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(P<0.01),p62表达无显著差异。(6)与db/db+DBZ组相比,db/db+Exe组Hey1蛋白下调(P<0.05);与db/db+Exe组相比,db/db+Exe+DBZ组PTEN蛋白上调(P<0.01)。结论:运动减轻db/db小鼠肾功能损伤和肾纤维化,其机制可能与其抑制Notch/PTEN/AKT信号通路而促进细胞自噬有关。

正肝方对二乙基亚硝胺诱导的肝癌前病变模型大鼠肝组织PTEN/PI3K/AKT信号通路的影响

目的观察正肝方对二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)诱导的肝癌前病变大鼠的生化指标和PTEN/PI3K/AKT信号通路的影响,探讨其对肝癌前病变大鼠的作用机制。方法将80只大鼠按照随机数字表法分为5组:空白对照组、DEN模型组、正肝方低、中、高剂量组(2 g/kg、4 g/kg、8 g/kg),每组各16只。为建立肝癌前病变大鼠模型,除空白组外,其余各组大鼠连续16周每周1次腹腔注射DEN(50 mg/kg)。同时,从造模第1周开始,空白对照组及模型组灌喂纯水10 ml/kg,正肝方低、中、高剂量组分别灌喂相应剂量的正肝方药液,1次/d,连续灌胃至第16周。禁食不禁水16 h后测量大鼠体质量,麻醉,心脏取血,称量肝脏、胸腺重量。全自动生化法检测肝功能指标,包括丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、白蛋白(Albumin,ALB)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT);HE染色观察肝组织病理改变,免疫组化和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)的阳性表达水平,蛋白质免疫印迹法检测肝组织中PTEN/PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平。结果与正常组比较,DEN模型组大鼠体质量明显降低,肝脏指数增加,胸腺指数下降,肝功能指标除ALB外均明显升高,HE染色可见模型组肝细胞出现不同程度的变性、坏死、排列紊乱、细胞多形性等癌前病变表现,肿瘤组织中AFP、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显升高,PTEN蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01);与DEN模型组比较,正肝方中、高剂量组肝脏指数均有降低,高剂量组较为明显,差异有统计学意义(P<0.05),各组胸腺指数表现出不同程度升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.001),血清ALT、ALP、GGT水平降低,ALB升高,肿瘤变性坏死区减少,AFP、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05),PTEN蛋白表达水平提高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论正肝方可改善肝功能指标和肝癌前病变状况,提高机体免疫力和PTEN抑癌蛋白的表达水平,降低组织中AFP、p-PI3K、p-AKT等癌症蛋白的表达,其机制可能与抑制PTEN/PI3K/AKT通路的激活,从而抑制癌前病变的发生发展相关。

基于PI3K/PTEN/Akt信号通路探讨Hp阳性萎缩性胃炎的作用机制

目的基于磷脂酰肌醇3-激酶/第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物/蛋白激酶B(PI3K/PTEN/Akt)信号通路探讨幽门螺旋杆菌(Hp)阳性萎缩性胃炎(CAG)的发生机制。方法70只Wistar大鼠,随机取50只用Hp感染联合水杨酸钠乙醇灌胃的方法建立Hp阳性CAG大鼠模型,剩余20只健康大鼠作为对照组。取对照组、模型组大鼠各10只为对照1组、模型组,检测胃液分泌量、胃蛋白酶活性;血清胃泌素(GAS)、胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、PGⅡ水平;PI3K、PTEN、Akt蛋白表达;另取10只对照组大鼠为对照2组,另40只模型大鼠分为阴性对照(NC)组,PI3K基因沉默(sh-PI3K)组,Akt基因沉默(sh-Akt)组、PTEN过表达(miR-PTEN)组,分别通过尾静脉注射空白载体、PI3K-shRNA、Akt-shRNA及PTEN慢病毒载体调节PI3K、PTEN、Akt表达。8 w后检测大鼠胃液分泌量、胃蛋白酶活性;血清GAS、PGⅠ、PGⅡ水平;Hp检测胃组织Hp阳性率;检测胃黏膜组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-9表达变化。结果与对照1组比较,模型组胃蛋白酶活性明显降低,胃液分泌量明显减少,血清GAS含量、PGⅠ/PGⅡ比值明显降低,PTEN蛋白表达显著降低、PI3K、Akt蛋白表达显著升高;调节PI3K、Akt、PTEN表达后,模型组胃蛋白酶活性明显提高,胃液分泌量明显增加,血清PGⅠ/PGⅡ、GAS含量明显升高,Hp阳性率明显降低,胃黏膜组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-9表达明显降低(P<0.05)。结论Hp阳性CAG大鼠存在PI3K、Akt、PTEN表达异常,调节PI3K、Akt、PTEN表达后可改善模型大鼠胃部病变,表明Hp阳性CAG的发生机制与PI3K/Akt/PTEN途径有关。

miR-10b-5p靶向JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力

目的探讨miR-10b-5p靶向Jumonji富含AT结合结构域2(JARID2)及磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调控人乳腺癌M.D.Anderson和MB代表转移性乳腺癌-231(MDA-MB-231)细胞增殖和迁移的影响。方法培养人正常乳腺细胞密歇根癌症基金会-10A(MCF-10A)及人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用Real-time聚合酶链式反应(PCR)法检测两种细胞中miR-10b-5p表达。将MDA-MB-231细胞分为对照组(Lip2000处理后正常培养细胞)、上调拟似物组(Lip2000+miR-10b-5p拟似物mimic转染)、上调转染组(Lip2000+mimic-miR-10b-5p共转染)、下调拟似物组(Lip2000+miR-10b-5p拟似物inhibitor转染)、下调转染组(Lip2000+inhibitor-miR-10b-5p共转染)。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞增殖情况,Transwell检测各组细胞迁移能力,Western blot法检测各组中JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路蛋白表达。结果MDA-MB-231细胞中miR-10b-5p表达量高于MCF-10A细胞(P<0.05)。上调转染组增殖抑制率低于对照组,下调转染组增殖抑制率高于对照组(P<0.05);上调拟似物组和下调拟似物组增殖抑制率与对照组比较差异无统计学意义。上调转染组细胞数量少于对照组,下调转染组细胞数量多于对照组(P<0.05);上调拟似物组和下调拟似物组与对照组细胞数量比较差异无统计学意义。上调转染组JARID2、PTEN蛋白表达量均高于对照组,PI3K、Akt蛋白表达均低于对照组(P<0.05);下调转染组JARID2、PTEN蛋白表达量均低于对照组,PI3K、Akt蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论miR-10b-5p可靶向JARID2及PTEN/Akt/PI3K信号通路表达,影响人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力。

miR-374a通过PTEN/AKT信号通路调节乳腺癌细胞增殖与凋亡作用分析

目的:探讨microRNA-374a(miR-374a)通过PTEN/AKT信号通路对乳腺癌细胞增殖与凋亡的调节作用。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对人乳腺癌细胞MCF-7和正常乳腺细胞Hs 578Bst中的miR-374a和PTEN mRNA转录水平进行检测。此外,通过蛋白免疫印迹(Western blot)方法,测定MCF-7和Hs 578Bst细胞以及对照组和MiR-374a抑制剂处理组中PTEN和AKT及其磷酸化形式蛋白的表达变化。采用CCK-8法和TUNEL法,分别评估对照组和MiR-374a抑制剂处理组的细胞增殖和凋亡情况。同时,利用Western blot技术检测两组细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9的表达变化。结果:在乳腺癌细胞中,MiR-374a的表达水平显著下调。通过转染技术抑制MiR-374a的表达后,乳腺癌细胞的增殖速率增快,凋亡率降低。同时,Western blot分析表明,抑制MiR-374a的表达导致PTEN蛋白水平下调,并伴随着AKT磷酸化水平的升高,从而激活PTEN/AKT信号通路。结论:MiR-374a通过靶向调节PTEN/AKT信号通路,对乳腺癌细胞的增殖和凋亡发挥重要的调节作用,为乳腺癌的治疗提供了新的潜在靶点和治疗策略。

肠愈宁对溃疡性结肠炎大鼠PI3K/AKT信号通路作用机制的研究

目的探讨肠愈宁方对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路中PTEN、TLR2、Caspase-3、Caspase-9蛋白的作用机制。方法将70只SPF级大鼠适应性喂养7天后分为空白组10只和造模组60只,造模组大鼠采用TNBS/乙醇溶液灌肠诱导UC模型。将成功建立模型的大鼠随机分为模型组,美沙拉嗪组,肠愈宁高、中、低剂量组、肠愈宁高、中、低剂量组分别灌服相当于生药量为4 g·mL^(-1)、2 g·mL^(-1)、1 g·mL^(-1)的肠愈宁方溶液10 mL·kg^(-1),美沙拉嗪组灌服相当于生药量为0.2 g·kg^(-1)美沙拉嗪悬浊液10 mL·kg^(-1),空白对照组、模型组给予等量10 mL·kg^(-1)生理盐水灌胃。各组大鼠灌胃均每天1次,连续14天。末次给药后处死大鼠取材。评估疾病活动指数,HE染色观察结肠变化,进行结肠组织损伤指数评分,蛋白免疫印迹法检测结肠组织PI3K、AKT、PTEN、TLR2、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组PI3K、AKT、Caspase-3、Caspase-9及TLR2蛋白表达水平增高(P<0.05),PTEN蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,肠愈宁高剂量组PI3K、AKT、Caspase-3、Caspase-9、TLR2蛋白表达水平均明显下降(P<0.05),PTEN蛋白表达水平显著升高(P<0.05);美沙拉嗪组、肠愈宁中剂量PI3K、AKT、Caspase-3水平均降低(P<0.05),PTEN蛋白表达水平升高(P<0.05),在Caspase-9中表达无统计学意义;肠愈宁低剂量组在各蛋白表达情况与模型组无统计学意义。结论肠愈宁方治疗UC作用显著,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路及其相关蛋白PTEN、TLR2、Caspase-3、Caspase-9有关,能够有效缓解UC大鼠症状,减轻结肠病理损伤。

PTEN通过拮抗PI3K/Akt信号通路抑制神经干细胞增殖

目的探讨PTEN抑制神经干细胞增殖的作用,以阐明是否可以通过抑制PTEN蛋白表达来促进神经干细胞增殖。方法取新生24h昆明小鼠海马组织,分离培养原代神经干细胞,并采用免疫荧光检测鉴定;将所培养的传代神经干细胞随机分组:正常组、缺血模型组、低氧组(低氧+缺血模型组)、Lip2000组(低氧+缺血模型组+Lip2000空转染组)、PTEN转染组(低氧+缺血模型组+Ad5-PTEN转染组)、PTEN干扰组(低氧+缺血模型组+Lip2000+PTENsiRNA干扰组),检测0、6、24、36、48h不同时间点各组神经干细胞的增殖情况,同时检测PTEN转染后PTEN蛋白在各组神经干细胞的表达情况,以及对PI3K-Akt信号通路上标志性蛋白表达的影响。结果免疫荧光检测Nestin以鉴定神经干细胞球,在荧光显微镜下观察到绿色明亮且典型的细胞球,球内可见清晰结构。MTT测定发现低氧组、Lip2000组培养36h时神经干细胞出现明显增殖,与模型组、PTEN转染组及PTEN干扰组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其中PTEN干扰组的细胞增殖又较模型组、PTEN转染组明显,差异亦有统计学意义(P<0.05);与正常组细胞比较,模型组与PTEN转染组的PTEN表达升高(P<0.05),且均较正常组降低(P<0.05),其中低氧组、Lip2000组与PTEN干扰组降低的趋势相当(P>0.05)。PTEN质粒转染后各组总的Akt和bad未出现明显变化,但是与正常组比较,模型组与PTEN转染组的PI3K、p-Akt、p-bad表达降低(P<0.05),其中PTEN转染组的变化较为明显。低氧组、Lip2000组与PTEN干扰组的PI3K、p-Akt、p-bad表达升高(P<0.05)。结论低氧有助于促进神经干细胞增殖,PTEN对PI3K/Akt的抑制作用可能是成体神经干细胞增殖受阻的关键因素。

结肠癌组织中PTEN蛋白表达与PI3K/AKT信号通路的关系

目的探讨抑癌基因PTEN与结肠癌发生发展的关系及其与PI3K/AKT信号传导通路的相关性。方法应用Western blot蛋白印迹技术和免疫组织化学方法检测32例结肠癌及癌旁正常组织中PTEN和p-AKT蛋白的表达。结果PTEN蛋白在结肠癌中表达的阳性率(31.25%)低于癌旁正常组织(96.87%)(P<0.01);而p-AKT蛋白在结肠癌中表达的阳性率(87.5%)高于癌旁正常组织(15.62%)(P<0.01);两种蛋白的表达呈负相关(r=-0.872,P<0.01),且表达水平与肿瘤的分化程度、Duke’s分期、有无淋巴结转移及远处器官转移有关(P<0.05)。结论PTEN蛋白表达缺失导致AKT信号传导通路持续活化可能在结肠癌的发生发展过程中起着重要作用。

姜黄素对食管癌Ec109细胞增殖和PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的:观察姜黄素对食管癌Ec109细胞增殖的抑制作用及肿瘤抑制基因/磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:体外培养人食管癌Ec109细胞,不同浓度姜黄素作用后,MTT法检测其对Ec109细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法分析肿瘤抑制基因(PTEN)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶-3(GSK3β)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)蛋白的表达情况。结果:MTT检测结果显示姜黄素能显著抑制Ec109细胞的增殖,且呈明显的剂量和时间效应关系;透射电镜观察发现姜黄素能诱导Ec109细胞发生凋亡;流式细胞仪分析显示随药物浓度的增加,Ec109细胞凋亡率明显升高;Western blot结果表明姜黄素可增强细胞中PTEN、GSK3β和Caspase 3的表达,抑制Akt的表达。结论:姜黄素通过上调PTEN、GSK3β和Caspase 3的表达,抑制PI3K/Akt信号通路,从而抑制食管癌Ec109细胞增殖。

达格列净对糖尿病大鼠血管内皮功能及PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的探究达格列净对糖尿病大鼠血管内皮功能及PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响。方法将30只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、达格列净组,各10只。模型组、达格列净组成功复制糖尿病模型后,达格列净组给予1 mg/(kg·d)达格列净灌胃处理,连续4周;模型组、对照组分别同时间灌胃等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。采用酶联免疫吸附试验检测血清内皮素1(ET-1)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)水平;苏木精-伊红染色观察大鼠主动脉血管组织病理学变化;Western blotting检测大鼠血管内皮组织PTEN/PI3K/Akt信号通路蛋白的表达。结果达格列净组大鼠一般情况好于模型组。达格列净组大鼠主动脉病理变化较模型组改善。与对照组比较,模型组、达格列净组大鼠血清ET-1、HIF-1α、VEGF水平升高(P<0.05),但达格列净组大鼠血清ET-1、HIF-1α、VEGF水平低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组、达格列净组大鼠血管内皮组织PTEN蛋白相对表达量降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量升高(P<0.05);但达格列净组较模型组大鼠血管内皮组织PTEN蛋白相对表达量升高(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论达格列净可能通过促进PTEN/PI3K/Akt信号通路活化,改善糖尿病大鼠血管内皮功能损伤,从而防治糖尿病及其并发症的发生。

miR-214通过PTEN调控AKT信号通路抑制鼻咽癌细胞凋亡

目的探讨miR-214通过PTEN调控下游AKT信号通路激活对鼻咽癌细胞凋亡的影响。方法miR-214抑制剂转染鼻咽癌5-8F和6-10B细胞。MTT法评估细胞增殖情况。Annexin-V/PI染色法检测两种鼻咽癌细胞凋亡情况。Western blot和real-time PCR检测miR-214抑制剂对PTEN基因转录和蛋白表达以及对AKT信号通路和凋亡相关蛋白表达水平的影响。检测shRNA沉默PTEN基因转录和蛋白表达后,miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞凋亡影响。结果miR-214抑制剂可抑制鼻咽癌细胞生长,诱导5-8F和6-10B细胞凋亡。miR-214通过靶向3'-UTR区域调控PTEN基因转录和蛋白表达。抑制miR-214可促进PTEN的表达,抑制AKT信号通路激活,进而调控下游细胞周期和凋亡相关蛋白表达。沉默PTEN基因转录和蛋白表达可逆转miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞AKT信号通路活性和凋亡的影响。结论miR-214可通过直接靶向PTEN基因转录促进AKT信号通路激活抑制鼻咽癌细胞凋亡。