猪PRLR和RBP4基因多态性与产仔性能的关系

采用PCR-RFLP方法,对莱芜黑猪、鲁莱黑猪、里岔黑猪、鲁烟白猪、新沂蒙黑猪5个山东地方/培育猪种和大约克夏、长白、杜洛克3个引进猪种共8个猪种323头繁殖母猪进行PRLR和RBP4基因的多态性检测,并采用最小二乘法分析其对产仔数影响的遗传效应。结果表明:两个基因位点在8个猪种的测定群体中均存在多态性,但山东地方/培育猪种与引进猪种间在基因型频率上存在较大差异。PRLR和RBP4基因对产仔数性状有显著影响(P<0.05),AA均为优良基因型。对于PRLR基因,山东地方/培育猪种内AA基因型母猪的总产仔数和活产仔数比BB基因型母猪平均多产1.03头和0.89头,引进猪种中AA基因型母猪比BB基因型母猪平均多产分别为1.26头和1.11头。对于RBP4基因,山东地方/培育猪种内AA基因型母猪的总产仔数和活产仔数比BB基因型母猪平均多产0.59头和0.51头,引进猪种中AA基因型母猪比BB基因型母猪平均多产分别为0.72头和0.64头。

大白猪、长白猪和杜洛克猪RBP4基因多态性及其与繁殖性能的相关分析

本试验通过PCR-RFLP技术对大白猪、长白猪和杜洛克猪的视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)基因第4外显子MspⅠ酶切位点进行多态性分析,并对各基因型母猪的第2、3胎次产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄的窝重及断奶成活率进行测定,进而分析RBP4基因多态性与繁殖性能的关系。结果表明,RBP4基因在3个品种中均存在多态位点;χ2适合性检验表明大白猪在该位点偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05),而长白猪和杜洛克猪在该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。其中,大白猪中优势基因型为BB基因型,而长白猪和杜洛克猪中优势基因型为AA基因型。在繁殖性能上,长白猪BB基因型群体第2胎总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生窝重、21日龄断奶窝重分别高于AA基因型0.97头、1.28头、0.92头、1.74kg和4.42kg,高于AB基因型0.92头、1.02头、0.98头、1.43kg和4.98kg;第3胎次中总体上BB基因型也为有利基因型。

ESR、OPN和RBP4基因多态性对大白猪繁殖性状的影响

为了探讨雌激素受体(estrogen receptor,ESR)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和视黄醇结合蛋白4(retinol binding proteins 4,RBP4)的多态性对大白猪繁殖性状的影响,本研究采用PCR-RFLP技术检测试验猪群ESR、OPN和RBP4基因的多态性,并分析其对大白猪总产仔数、产活仔数、健仔数、窝重、初生重、死胎、木乃伊、弱仔数和畸形数等性状的影响。结果显示,在大白经产母猪中,ESR和OPN基因的优势基因为A等位基因,RBP4基因的优势基因为B等位基因;ESR基因AB与BB基因型在总产仔数、产活仔数性状上均高于AA基因型;OPN基因在总产仔数性状上AA基因型最高,在产活仔数、健仔数、窝重性状上均为BB>AA>AB;RBP4基因在总产仔数、产活仔数、健仔数、窝重性状上均为AA>BB>AB;合并基因型分析发现ESR-RBP4最优的分子标记组合为ABAA;OPN-RBP4最优的分子标记组合为BBAA。因此,ESR、OPN和RBP4基因多态性与大白猪繁殖性状相关。

北京黑猪RBP4基因与繁殖性状的关联分析

以北京黑猪为研究对象,选取视黄醇结合蛋白4(Retinol-binding proteins 4,RBP4)基因为繁殖性状的候选基因,其扩增产物经MspⅠ酶切后,在北京黑猪群体中发现AA、AB和BB 3种基因型,其A、B等位基因的频率、多态信息含量、杂合度分别为0.529 6、0.470 4、0.374 1和0.498 2,表明该位点处于中度多态。χ2适合性检验表明北京黑猪群体该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。用SAS 8.0软件最小二乘法拟合线性模型,将不同基因型与总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)和出生重(WB)进行了关联分析,结果表明:经产母猪各基因型间的TNB、NBA、WB差异均不显著(P>0.05)。初产母猪BB型比AA和AB型个体的TNB分别多1.04(P<0.05)和0.31头;BB和AB型比AA型个体的NBA分别多1.47(P<0.05)和1.35头。基因效应分析结果表明,初产母猪该位点的B等位基因对TNB、NBA和WB都表现为正效应,分别使各性状增加了0.282 0头、0.408 5头和0.000 9kg,即B等位基因可能为北京黑猪繁殖性能的有利等位基因。

RBP4基因的多态性及其与母猪窝产仔性状的相关性

基于生物信息学方法,发现并验证了与RBP4基因LS性状(litter size)候选分子标记MspⅠRFLP(SNP G1223C)临近的SNP A1027G(SNPs,single nucleotide polymorphisms),并对大白猪和湖南黑猪群体的RBP4多态性与母猪LS性状的相关性进行了研究。结果表明:RBP4基因SNP G1223C在2个群体中均与母猪LS性状显著相关(P<0.05);RBP4基因SNP A1027G在混合群体中与母猪LS性状显著相关(P<0.05);这2个多态性位点构建的单倍型也与母猪LS性状显著相关(P<0.05),其优势单倍型母畜的LS性状值明显优异于单个SNP位点优势基因型的LS性状值。在分子标记辅助育种中采用RBP4单倍型作为LS性状重要候选基因的分子标记比采用单个多态性位点更具价值。

八个猪种PRLR和RBP4基因PCR-RFLP检测及群体遗传特性研究

本研究采用PER—RFLP方法，对莱芜黑猪、鲁莱黑猪、里岔黑猪、鲁烟白猪、新沂蒙黑猪5个山东本地猪种和大约克夏、长白、杜洛克3个引进猪种共八个猪种323头繁殖母猪进行PRLR和RBP4基因的多态性检测，并对其遗传多样性进行分析。结果表明：两个基因位点在八个猪种的测定群体中均存在多态性，在三种基因型中AB基因型出现频率最高，山东本地猪种与引进猪种间基因型频率存在显著差异（P〈0．05）。八个猪种PRLR和RBP4基因位点的期望杂合度分别在0．3265～0．5062和0．2655～0．5019之间，多态信息含量分别在0．2688～0．4268和0．2264—0．3736之间。研究结果提示：杜洛克猪在这两个基因位点的杂合度最低，其遗传一致性最好，其余猪种均表现为中度多态，表明这些猪种具有较为丰富的遗传多态性。

猪的RBP4基因部分序列的克隆及多态性分析

在猪的RBP4基因的第1外显子和第3外显子处设计引物,成功扩增了该基因的第1内含子和第2内含子,与人和鼠的同源性分别为80%和78%,说明扩增正确。采用PCR-RFLP法对大白猪、杜洛克、长白猪、民猪和杂种猪的RBP4基因进行多态性检测。结果表明:该基因经限制性内切酶MspⅠ酶切后获得3种带型:AA,BB和AB型;除大白猪与民猪、长白猪与杂种猪外,其余各猪种间RBP4基因的基因型频率分布均差异极显著(P<0.01);该基因在长白、大白和杂种猪的MspⅠ位点处于群体不平衡状态,在杜洛克和民猪处于群体平衡状态;基因多态信息含量(PIC)计算,大白、长白、杜洛克、民猪和杂种猪均表现为中度多态性(0.5>PIC>0.25),民猪的B等位基因为优势基因,推测B等位基因与猪的高产性状相关。

河南地方绵羊品种RBP4基因的多态性研究

采用PCR-SSCP方法分析了RBP4基因在大尾寒羊和小尾寒羊中的多态性,以期探索该基因对于河南地方绵羊品种繁殖力的影响。结果表明:在2个绵羊品种中,RBP4基因检测出2个基因型,即BB和AB,没有检测到AA基因型。在小尾寒羊和大尾寒羊中BB基因型频率分别为0.840和0.583,AB基因型频率分别为0.160和0.416。在小尾寒羊和大尾寒羊中A等位基因频率分别为0.080和0.209,B等位基因频率分别为0.920和0.791。研究为进一步从分子水平探索河南地方绵羊品种的高繁殖力遗传机制提供了参考。

湖南黑猪RBP4基因与产仔数的相关性分析

以湖南黑猪为研究对象,采用PCR-RFLP技术进行视黄醇结合蛋白4(Retinol-binding proteins 4,RBP4)基因多态性检测,并采用最小二乘分析法分析其对产仔数影响的遗传效应。结果表明:猪群中发现AA、AB和BB 3种基因型,A、B等位基因的频率、多态信息含量、杂合度分别为0.8649、01351、0.3960、0.2337,表明该位点处于中度多态。初产母猪AA型比BB型个体的总产仔数、产活仔数分别多1.66头、1.83头,差异显著(P<0.05);经产母猪AA型个体的总产仔数和产活仔数比AB、BB型分别多1.19头、1.48头(P<0.01)和0.96头、1.22头(P<0.05)。基因效应分析结果表明,初产、经产母猪在该位点上A等位基因对总产仔数和产活仔数都表现为正效应,各性状分别增加了0.1496头、0.1635头和0.1443头、0.1169头,即A等位基因可能为湖南黑猪繁殖性能的有利等位基因。

野猪RBP4基因的克隆、表达及变异初步研究

视黄醇结合蛋白是体内一类将维生素A从肝中转运至靶组织以实现维生素A的细胞内转运代谢的特异的运载蛋白,在协助维生素A发挥生理功能中起着不可替代的作用。它既是一个影响猪的繁殖性状的候选基因,同时也是一个研究维生素A代谢障碍及肥胖症的候选基因。为了进一步揭示其群体遗传变异,寻找新的遗传标记,本研究对野猪(Sus scrofa ussuricus)RBP4基因进行了克隆、表达和序列分析,并对所发现的点突变进行了基于限制性内切酶MspⅠ的PCR-RFLP分析。序列分析表明野猪与大白猪相比存在着4个SNPs;该基因在野猪的肝脏、肾脏、肺、大肠和肌肉中表达,在心脏、胃、脾、小肠和睾丸中不表达;对14头野猪的酶切多态性分析表明该突变位点是多态位点,并且3种基因型的分布符合Hardy-Weinberg定律。

松辽黑猪RBP4基因多态性及其与繁殖性状的关联分析

为探究松辽黑猪视黄醇结合蛋白4(RBP4)基因多态性及其与繁殖性状的关联性,试验选取132头松辽黑猪作为研究对象,以与猪繁殖性状相关的RBP4基因为候选基因,采用PCR-HRM分析与PCR产物直接测序相结合的方法检测松辽黑猪RBP4基因部分外显子的单核苷酸多态性(SNP),分析RBP4基因SNP与母猪总产仔数、产活仔数、乳头数及仔猪初生重、3周龄重、断奶重的关联性。结果显示,松辽黑猪RBP4基因第3、5外显子上各存在1个SNP位点,分别命名为为G45A和C170T,其中在G45A位点检测到GG、GA和AA 3种基因型,在C170T位点检测到CC和CT 2种基因型。群体遗传参数分析及卡方适合性检验结果显示,RBP4基因G45A位点在松辽黑猪群体中分布较为均匀,遗传变异程度处于中等水平,偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.01);C170T位点在松辽黑猪群体中分布不均匀,遗传变异程度较低,未偏离Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。关联分析结果表明,在RBP4基因G45A位点上,3种基因型的总产仔数及产活仔数均表现为:GG>GA>AA,其中GG基因型的总产仔数、产活仔数显著高于AA基因型(P<0.05);GG基因型仔猪3周龄重显著低于GA基因型(P<0.05);GG基因型仔猪断奶重显著低于GA及AA基因型(P<0.05);各基因型在仔猪初生重及母猪乳头数上未表现出显著差异(P>0.05)。在C170T位点上,不同基因型松辽黑猪的总产仔数、产活仔数、乳头数及仔猪初生重、3周龄重、断奶重均无显著差异(P>0.05)。综上,RBP4基因G45A位点对松辽黑猪产仔数具有显著影响,但该位点是否可作为松辽黑猪产仔数相关的遗传标记,有待进一步研究;RBP4基因C170T位点可能不是松辽黑猪繁殖性状相关的突变位点,在后期工作中需扩大群体做进一步验证。

羊RBP4基因DNA池测序分析

选择黔北麻羊、内蒙古白绒山羊、关中奶山羊3个山羊品种构建品种DNA池。对RBP4基因部分CDS区和3’UTR进行PCR产物扩增,并采用直接测序法进行测序。结果表明:所选山羊品种RBP4基因分CDS区和3’UTR区,无突变位点存在。序列分析表明,山羊与其他物种RBP4基因的同源性很高,其中以牛最高,达到98.8%。系统进化分析表明,羊和牛在同一进化支上。生物信息分析表明:RBP4基因所表达蛋白氨基酸序列中有5个磷酸化位点。因此,山羊RBP4基因在进化过程中是高度保守的。研究结果可为进一步分析山羊RBP4基因功能遗传变异提供借鉴。

川中黑山羊RBP4基因cDNA克隆及序列分析

以川中黑山羊肝脏组织总RNA为模板,通过RT-PCR技术对黑山羊RBP4基因进行克隆测序及序列分析。结果表明,所克隆的665 bp片段为预期的川中黑山羊RBP4基因cDNA序列,包含整个CDS区,该编码区长为606 bp,编码201个氨基酸。用DNAMAN软件进行同源性比对,结果显示,川中黑山羊RBP4基因编码区与GenBank中报道的牛、猪、马、黑猩猩、小鼠、大鼠、人的同源性分别是98.5%、91.3%、92.2%、91.4%、83.0%、82.3%、91.3%;氨基酸序列同源性分别为97.5%、91.5%、93.5%、91.5%、83.6%、83.6%、91.5%。利用NJ法和MP法以该基因编码区核苷酸序列构建物种间分子进化树,其结果基本一致。聚类结果与遗传距离大小一致,表明RBP4基因编码区适用于构建物种间分子系统进化树。

RBP4基因多态性与贵州黑山羊产羔性状关联性分析

为研究RBP4基因单核苷酸多态性与贵州黑山羊产羔性状之间的关系,本研究采用混合DNA池测序和直接测序法筛选SNPs位点,进行生物信息学和群体遗传参数分析,并收集118头贵州黑山羊母羊1~4胎产羔数据,分析SNPs位点与产羔性状之间的关联性。结果显示:共检测到2个SNPs位点,为g.4527G>T和g.4744C>T。生物信息学分析发现g.4744C>T位点变异会使mRNA二级结构最小自由能增大,结构稳定性降低;群体遗传参数分析发现,g.4527G>T位点基因型频率差异较大,G为优势等位基因;g.4744C>T位点C为优势等位基因;χ2检验显示两位点均处于Hardy-Weinberg平衡。基因型与产羔数关联性分析发现,g.4527G>T位点在2、3、4胎次,野生型产羔数显著高于突变型;g.4744C>T位点在第1胎次,突变型母羊产羔数显著高于野生型。本研究揭示了RBP4基因对贵州黑山羊产羔数存在显著影响,g.4527G>T和g.4744C>T可能是影响贵州黑山羊产羔性状的重要SNPs位点。

RBP4基因在绵羊性成熟前后附睾中表达的研究

试验旨在研究视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)基因在绵羊性成熟前和性成熟后附睾中的表达水平,探讨其在绵羊生殖机能调控方面的作用。以绵羊性成熟前和性成熟后附睾为材料,采用实时荧光定量PCR方法检测RBP 4基因mRNA在绵羊性成熟前、后附睾中表达量的差异,采用免疫组化技术检测RBP4基因在绵羊性成熟前、后附睾头和附睾尾中蛋白的表达水平。结果显示,RBP4基因在绵羊附睾中性成熟前的表达量为1.3368,性成熟后的表达量为0.6450,虽然二者间的表达量差异不显著(P>0.05),但性成熟前的表达量高于性成熟后的表达量。RBP4蛋白在性成熟前、后附睾头上皮层、平滑肌层、组织间质中均有阳性表达,主要位于上皮细胞质、平滑肌细胞质;在附睾尾上皮层、组织间质中有阳性表达,主要位于上皮细胞质。推测RBP4基因可能与附睾主细胞分泌功能和附睾头处的收缩功能有关,预示RBP4可能参与附睾微环境的调控,有利于精子成熟、运动和储存。

PRLR、RBP_4基因与苏姜猪繁殖性能的相关性分析

采用PCR-RFLP方法对71头苏姜猪的PRLR基因、RBP4基因的多态性进行了检测,分析不同多态性间繁殖性能的差异,探讨将PRLR基因、RBP4基因作为标记辅助选择用于苏姜猪核心群选育的可行性,从DNA水平上为苏姜猪的选育提供技术性支持。结果表明:PRLR、RBP4两个基因位点在苏姜五世代母猪中均存在多态性。在该试验中,PRLR基因、RBP4基因各自基因型的效应差异均不显著(P>0.05),合并基因型的效应显著(P<0.05),可以联合标记用于苏姜猪核心群的选育。

猪产仔数相关基因的研究进展

综述了与猪产仔数相关的基因:雌激素受体基因、卵泡刺激素β亚基基因、催乳素受体基因、视黄醇结合蛋白四基因等几种候选基因的研究进展;总结了产仔数的数量性状位点。

猪RBP4和ITGB1基因多态性对母猪繁殖性能的影响

用PCR-RFLP的方法检测了猪视黄醇结合蛋白4(RBP4)和整合素β1(ITGB1)基因在试验猪群中的多态性,同时分析其对大白猪产仔数、产活仔数、健仔数、初生窝重等性状的影响。结果显示:RBP4基因AA型产仔数、产活仔数、初生窝重显著高于AB、BB型(P<0.05),AA型健仔数极显著高于BB型(P<0.01),显著高于AB型(P<0.05)。ITGB1基因TT型产仔数、产活仔数、健仔数高于TC、CC型,差异均不显著(P>0.05)。RBP4与ITGB1基因9种合并基因型中AATT型产仔数、产活仔数、健仔数均高于其他合并基因型,差异均不显著(P>0.05)。

2型糖尿病易感基因研究的新进展

遗传因素在2型糖尿病（T2DM）的发生和发展中起着重要作用，在大多数病人中，T2DM的发生有着较多基因的改变，每一个基因都起着部分或累积的作用，而环境因素在加速或延缓T2DM发生方面起重要作用。与T2DM及其相关特征（如肥胖、高血压等）的相关基因的发现，有利于发现更好的治疗方法，改善病人的生活质量。本篇综述总结了近来发现的与T2DM发生有关的基因。

肥胖及2型糖尿病患者脂肪组织视黄醇结合蛋白4 mRNA的表达及调控

目的 研究肥胖及2型糖尿病患者皮下和腹内脂肪组织视黄醇结合蛋白4（RBP4）mRNA的表达差异,并探讨影响其表达调控的因素.方法 选取2007年1-6月因非代谢性疾病而接受腹部择期手术的正常体重正常糖调节、单纯肥胖、2型糖尿病患者各9例,取皮下和腹内脂肪组织,用RT-PCR法检测RBP4 mRNA的表达,并在体外对正常体重正常糖调节者腹内脂肪组织分别与一定浓度的胰岛素、地塞米松、棕榈酸、肿瘤坏死因子-α、吡咯列酮共培养,用RT-PCR法检测药物对腹内脂肪组织RBP4 mRNA表达的变化.结果 肥胖和2型糖尿病患者腹内脂肪RBP4 mRNA的表达均显著高于正常体重正常糖调节者（分别为2.10±1.84和1.54±0.46比0.75±0.28,P＜0.01和P＜0.05）,并明显高于相应的皮下脂肪组织;3组人群间皮下脂肪组织RBP4 mRNA的表达差异无统计学意义（1.05±0.15比0.99±0.14比1.13±0.07,P＞0.05）;药物胰岛素、地塞米松、吡咯列酮、棕榈酸能显著上调RBP4 mRNA的表达,与对照组相比,分别上升了2.13、0.84、2.04、4.88倍;肿瘤坏死因子-α显著下调RBP4 mRNA的表达,较对照组下降了38%.结论 肥胖和2型糖尿病患者腹内脂肪组织RBP4 mRNA的表达显著上升,正常体重正常糖调节者腹内脂肪组织RBP4 mRNA的表达受胰岛素、地塞米松等多种参与糖脂代谢及胰岛素抵抗因素的调控.