人补体C3功能片段rC3B的克隆、表达和活性鉴定

本研究获取人类补体C3上与补体Ⅲ型受体(CR3)结合的功能区rC3B,并进行了表达、纯化和活性鉴定。用基因扩增法获得rC3B基因,并插入原核表达载体pQE30a,转化大肠杆菌E.coli M15进行表达;用SDS-PAGE电泳检验目的蛋白后以Ni2+螯合Sepharose Fast Flow层析进行纯化;用Western blot与单核细胞黏附试验初步确认蛋白活性。结果表明:钓取了人类补体C3的功能片段rC3B,构建了原核表达载体pQE30-rC3B并在E.coli中得了到高效表达;经Ni2+固相化的螯合Sepharose Fast Flow亲和层析纯化蛋白后,蛋白纯度达80%;Western blot检测证明rC3B具有抗原性,单核细胞的黏附试验初步确认了纯化后蛋白的活性。结论:确认了人类补体C3的这一活性区域,并获得了该蛋白的功能片段,为深入研究人类补体C3蛋白的功能和应用奠定了基础。

蛋白激酶C所致磷酸化对高迁移率蛋白Ⅰ与DNA结合活性的影响

从大鼠脑组织提纯高迁移率蛋白Ｉ（ＨＭＧ－Ｉ），并观察到ＨＭＧ－Ｉ在体外能被蛋白激酶Ｃ磷酸化。磷酸氨基酸分析表明，蛋白激酶Ｃ所致磷酸化反应位点是丝氨酸和苏氨酸残基。未磷酸化的ＨＭＧ－Ｉ能与ＲＣ３基因５′端上游ＤＮＡ片段结合，ＤＮＡ结合部位富含Ａ和Ｔ。经蛋白激酶Ｃ磷酸化后的ＨＭＧ－Ｉ与该片段ＤＮＡ的结合明显减弱。结果提示蛋白激酶Ｃ通过改变ＨＭｇ－Ｉ磷酸化状态影响ＨＭＧ－Ｉ的ＤＮＡ结合活性，进而有可能调节ＨＭＧ－Ｉ的生物学功能。