多孔微载体无血清培养rCHO细胞生产u-PA

在 30L搅拌式反应器中无血清培养分泌尿激酶型纤溶酶原激活剂 (u PA)的DNA重组CHO细胞 ,定期部分更换Cytopore多孔微载体 ,使生长在多孔微载体中的细胞不断更新繁殖 ,解决大规模细胞培养中的细胞凋亡问题。在 91d连接换液培养过程中 ,细胞密度可维持在 (1 3～ 2 6 )× 10 7/mL ,活细胞比率维持在 90 %以上。在7 5L搅拌罐中培养细胞 ,利用外部周期性压力振荡刺激并结合载体更新技术 ,可减轻密度效应对细胞生长和表达的影响 ,在一定程度上提高细胞在高密度培养条件下的表达水平。在 6 7d连续换液培养中 ,细胞最高密度为 2 6 4× 10 7/mL ,活细胞比率维持在 95 %以上。与稳压操作相比 ,利用周期变压刺激技术可提高产量 10 %～ 2 0 % ,且可降低葡萄糖厌氧代谢生成乳酸的转化率 ,利用 4步纯化工艺 ,从含u PA约 135g的 2 10 0L上清中获得约 80 gu PA(单链比例约为 90 % )。

用多孔微载体大规模培养rCHO细胞

多孔微载体是近年来发展起来的一种用于大规模高密度培养动物细胞的支持物，具有许多优点，如：容易固定细胞，适合于贴壁细胞和悬浮细胞的固定化连续灌流培养；细胞生长在载体内部，增加了细胞固定化的稳定性，可降低血清用量，适合长期培养；能保护细胞免受机械损伤，增...

rCHO细胞无血清适应及悬浮培养

考察了血清对rCHO(C28)细胞生长与产物(HBsAg)表达的影响,发现φ血清<0.01时细胞出现明显的代谢转换;考察了微量元素、氢化可的松、混合脂类与短多肽混合物(TL混合物)对细胞的影响,建立了适于rCHO(C28株)生长的无血清培养基MT-SFM;在将细胞从有血清转到无血清状态时,阶段性降血清比直接降血清更有利于rCHO(C28)细胞的无血清适应;当细胞适应了MT-SFM无血清培养基后,批培养中细胞的最大平均比生长速率可达0.65d-1,产物HBsAg的滴度在32～64之间。

血清浓度及溶氧对培养rCHO细胞生产尿激酶原的影响

在 30L搅拌式反应器中用多孔微载体培养分泌尿激酶原的DNA重组中国仓鼠卵巢细胞 (rCHO) ,研究了血清浓度及溶氧对细胞生长和表达的影响。结果表明 ,在 2× 10 5 ml低密度接种条件下 ,使用低 (无 )血清培养基会延长细胞生长延滞期并降低比生长速率 ,而细胞密度大于 10 6 ml时 ,血清浓度对细胞生长和产物表达的影响没有显著差别。溶氧 (DO)维持在 2 0 %～ 45 %时 ,对细胞表达产物和葡萄糖代谢无明显影响 ,但溶氧降至 7%～ 9%时 ,细胞表达水平明显降低 。

表达内皮抑素的rCHO细胞的微囊化培养

微囊化重组细胞移植治疗肿瘤是一种新兴的肿瘤基因治疗方法,如果将此技术应用到临床研究,就需要制备大量的细胞活性良好、重组蛋白表达量高的生物微胶囊。种子细胞是生物微胶囊治疗作用的执行者,是构建微囊微反应器的基本元素。如何获得大量高活性的种子细胞已经成为规模化制备生物微胶囊所面临的关键的限制因素。考察了搅拌式生物反应器内扩增的rCHO细胞进行包囊及微囊化细胞在生物反应器内规模化培养的可行性。实验结果显示:rCHO细胞在生物反应器内可以快速生长,并且对数期细胞包囊,微囊化细胞活性良好。制备的微囊化细胞可以在生物反应器内培养,与培养板培养比较细胞生长较快、内皮抑素表达量较高。应用生物反应器培养技术能够在体外快速、大量扩增rCHO细胞,满足微囊化细胞制备对种子细胞量与质的要求,微囊化细胞可以在生物反应器内培养。

谷氨酰胺限制对rCHO细胞生长和代谢的影响

考察了rCHO细胞(Ch inese ham ster ovary,中国仓鼠卵巢细胞)在批培养和谷氨酰胺限制流加培养过程中的生长、代谢特性。实验发现随着谷氨酰胺浓度的下降,谷氨酰胺的比消耗速率以及氨和丙氨酸的比生成速率显著下降。与批培养相比,在谷氨酰胺限制流加培养过程中,培养时间延长,活细胞密度增加,达到2.4×106cells/mL;谷氨酰胺的代谢途径发生改变,代谢副产物生成明显减少,YAmm/G ln由1.04 mm o l/mm o l略微下降到0.92 mm o l/mm o l,YA la/G ln由0.35 mm o l/mm o l下降到0.08 mm o l/mm o l,YX/G ln由0.383×109cells/mm o l增加至0.504×109cells/mm o l,YAmm/X由2.59×1-0 9mm o l/cell下降到1.85×1-0 9mm o l/cell,表明谷氨酰胺代谢的能量利用率显著提高,也证明其参与细胞合成代谢的分率增加。