纯视细胞移植术后RCS鼠视皮质内γ-氨基丁酸的分布

目的 通过成功纯视细胞移植 ,观察 RCS鼠视皮质内抑制性神经递质 γ-氨基丁酸 (GABA)的分布和变化。 方法 取同龄 Wistar/皇家外科学院 (Royal College of Surgeon,RCS)鼠为供 /受体 ,准分子激光切削法制备视细胞层 ,外路途径移入 RCS鼠的视网膜下腔 ,术后 2周取 RCS鼠手术组眼、手术对照组眼、RCS对照组眼及其视皮质分别做冰冻切片 ,免疫组织化学染色法染色 ,普通光学显微镜下观察。 结果 视细胞移植术后 2周 ,移植视细胞存活 ,外丛状层重建 ,与手术对照眼、RCS对照眼相比 ,重建视网膜受体 RCS鼠对侧视皮质内 GABA免疫反应神经元数量较多 ,而同侧视皮质内无 GABA免疫反应神经元。 结论 成功纯视细胞移植可以重建 RCS鼠的视觉传导通路 ,移植的纯视细胞使 RCS鼠视皮质内 GABA免疫反应的分布发生变化。

Wistar鼠和RCS鼠视网膜神经递质的分布和比较

目的观察正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠和皇家外科学院鼠（ＲＣＳ）的视网膜兴奋性神经递质谷氨酸（Ｇｌｕｔａｍａｔｅ）和抑制性神经递质γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）的分布和两者间的差异。方法７４天Ｗｉｓｔａｒ鼠和ＲＣＳ鼠各６眼分为２组，免疫组织化学染色法，光镜下观察上述组织视网膜内谷氨酸和ＧＡＢＡ的分布。结果Ｗｉｓｔａｒ鼠视网膜ＧＡＢＡ阳性免疫反应分布于视网膜内丛状层的部分神经纤维、ＧＡＢＡ阳性免疫反应的无长突细胞和节细胞层的部分纤维。ＲＣＳ鼠则分布于视网膜内丛状层的少量神经纤维、极少量ＧＡＢＡ阳性免疫反应的无长突细胞和节细胞层的部分纤维。Ｗｉｓｔａｒ鼠视网膜Ｇｌｕｔａｍａｔｅ阳性免疫反应主要分布于外丛状层、内丛状层及节细胞层的神经纤维。ＲＣＳ鼠则主要分布于内丛状层及节细胞层的神经纤维。ＲＣＳ鼠视网膜中Ｇｌｕｔａｍａｔｅ阳性免疫反应的神经纤维的相对密度和ＧＡＢＡ阳性免疫反应的无长突细胞的相对密度减少。结论７４天时ＲＣＳ鼠视网膜中的视细胞完全萎缩，使Ｇｌｕｔａｍａｔｅ和ＧＡＢＡ的分布受到影响。

Wistar鼠和RCS鼠视网膜内一氧化氮合酶的分布

目的观察正常Wistar大鼠和患遗传性视网膜病变的RCS鼠视网膜内一氧化氮合酶(NOS)的分布。方法74天Wistar鼠和74天RCS鼠各6眼分为2组,冰冻切片,用NADPH黄递酶组织化学染色法(NDP),光镜下观察。结果一氧化氮合酶主要存在于Wistar鼠,RCS鼠的无长突细胞内,在双侧锯齿缘、赤道部和后极部内丛层均有分布,二者间的数量有差异。结论一氧化氮合酶分布在Wistar鼠,RCS鼠的无长突细胞,但视细胞萎缩对含一氧化氮合酶的阳性无长突细胞数量有影响。

补肾益精方对先天性视网膜色素变性RCS大鼠感光细胞凋亡的抑制作用

目的探讨补肾益精方对先天性视网膜色素变性RCS大鼠感光细胞凋亡的影响。方法将先天性视网膜色素变性模型RCS大鼠24只随机分为补肾益精方组及蒸馏水组,分别给予补肾益精方药液及蒸馏水灌胃,12只健康SD大鼠常规饲养作为正常组。在给药7 d及28 d后HE染色观察各组大鼠视网膜组织病理学变化,TUNEL法检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测视网膜中睫状神经营养因子、脑源性神经营养因子以及碱性成纤维细胞生长因子表达情况。结果 HE染色切片光学显微镜下正常组SD大鼠视网膜结构清晰,层次分明,各层细胞排列整齐。蒸馏水组大鼠视网膜内核层及外核层均较正常组明显变薄,细胞排列稀疏,可见空泡样改变,感光细胞数减少,且随鼠龄增加减少日益显著。补肾益精方组大鼠视网膜内核层及外核层亦较正常组变薄,但与蒸馏水组相比增厚,感光细胞数较后者增多,细胞排列也较为整齐。给药7 d及28 d时补肾益精方组每个高倍视野感光细胞数分别为140±9和80±9,蒸馏水组分别为113±8和44±6,补肾益精方组较蒸馏水组明显增多,差异有统计学意义(均为P<0.05)。TUNEL检测结果显示给药7 d及28 d时补肾益精方组感光细胞凋亡率分别为31.67±5.39%及29.68±4.31%,蒸馏水组分别为50.34±5.21%及44.02±7.17%,补肾益精方组较蒸馏水组均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示给药7 d及28 d补肾益精方组视网膜睫状神经营养因子表达均较蒸馏水组增加(均为P<0.05),给药7 d时补肾益精方组视网膜脑源性神经营养因子表达较蒸馏水组明显增加(P<0.05),28 d时两组差异无统计学意义(P>0.05);给药7 d及28 d两组碱性成纤维细胞生长因子的表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论补肾益精方对RCS大鼠感光细胞凋亡有明显的抑制作用,其作用机制可能与补肾益精方促进视网膜分泌神经营养因子有关。

RCS大鼠眼球冰冻切片前固定的方法

目的寻找一种适合于遗传性视网膜色素变性的动物模型皇家外科学院大鼠(royal college of surgeons rat,RCS)眼球冰冻切片前的固定方法。方法 RCS大鼠5只,麻醉灌注后,5只眼行4%多聚甲醛固定1 h,30%蔗糖脱水过夜;5只眼用福尔马林、酒精、冰醋酸混合固定液(Davidson’s Fluid)固定12h后,以5%、10%、20%、30%蔗糖进行梯度脱水各4 h;再行眼杯OCT包埋后冰冻切片。结果 Davidson’s固定后的视网膜组织结构清晰,视网膜各层结构内的细胞排列紧密,无明显裂隙存在,且发生人为视网膜脱离概率低,无自发荧光干扰;相反,采用4%多聚甲醛固定的视网膜组织各层细胞排列较疏松,有一定的裂隙或空泡存在。结论 Davidson’s固定液适用于RCS大鼠视网膜组织的固定,效果优于单纯的4%多聚甲醛固定液。

枸杞丹参对RCS大鼠视网膜组织中Bcl-2、Bid表达的影响

目的观察枸杞加丹参对视网膜色素变性大鼠视网膜Bcl-2、Bid表达的影响。方法实验对象分五组。空白组:RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠,8只,雌雄均4只,灌胃生理盐水;将RCS(rdy-/-,p-/-)雌性及雄性大鼠均随机分为4组,分别为:模型组、枸杞组、丹参组和枸杞加丹参组(杞参组),每组雌雄均4只,共8只,分别给予灌胃生理盐水、生理盐水、枸杞、丹参、枸杞加丹参。灌胃28天后,免疫组化、Real-time PCR、WB检测各组RCS大鼠视网膜Bcl-2、Bid的相对表达量。结果①免疫组化检测显示:RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组大鼠视网膜上Bcl-2蛋白阳性表达较RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠模型组明显增多;RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组大鼠视网膜上Bid蛋白阳性表达较RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠模型组明显减少,但较RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白组多。②RT-qPCR检测显示:RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组Bcl-2 mRNA相对表达量明显高于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且接近RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白对照组。RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组Bid mRNA相对表达量明显低于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且接近RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白对照组。③WB检测显示:RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组Bcl-2蛋白相对表达量明显高于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且接近RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白对照组。RCS(rdy-/-,p-/-)杞参组Bid蛋白相对表达量明显低于RCS(rdy-/-,p-/-)模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且接近RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠空白对照组。结论视网膜色素变性经典动物模型RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠视网膜组织中Bcl-2表达下降、Bid表达上升;枸杞加丹参灌胃促进RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠视网膜抗凋亡因子Bcl-2表达上调,同时,下调促凋亡因子Bid表达,在抗线粒体凋亡途径上减轻视网膜色素变性大鼠的视网膜细胞凋亡,从而保护视功能。

枸杞子加丹参对RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠视网膜组织形态及感光细胞凋亡的影响

目的观察枸杞子加丹参对皇家外科学院(royal college surgeons,RCS)(rdy-/,p-/-)大鼠视网膜组织形态及感光细胞凋亡的影响。方法40只RCS大鼠随机平均分为空白组、模型组、枸杞组、丹参组、杞参组,空白组及模型组灌胃蒸馏水,枸杞组灌胃枸杞子中药配方颗粒水溶液,丹参组灌胃丹参中药配方颗粒水溶液,杞参组灌胃枸杞子加丹参中药配方颗粒水溶液。灌胃28 d后,HE染色观察各组RCS大鼠视网膜组织形态,TUNEL法检测视网膜感光细胞凋亡情况,并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果HE染色显示:空白组大鼠视网膜各层结构排列有序,形态规则;模型组大鼠视网膜各层结构紊乱,视网膜变薄;枸杞组与丹参组视网膜各层组织结构同模型组大鼠结构类似;杞参组视网膜外层萎缩现象较模型组减轻。TUNEL染色显示:空白组大鼠视网膜未见明显感光细胞凋亡;模型组大鼠视网膜各层见大量感光细胞凋亡;枸杞组与丹参组大鼠视网膜见大量感光细胞凋亡;杞参组大鼠视网膜见少量感光细胞凋亡。视网膜感光细胞AI:杞参组(14.13±5.64)%明显低于模型组(24.38±9.62)%、枸杞组(21.25±10.21)%、丹参组(19.25±7.98)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论枸杞子加丹参可以减轻RCS大鼠视网膜感光细胞凋亡,从而保护视功能。

滋阴明目丸对RCS大鼠视网膜Bax及Caspase-3表达的影响

目的观察滋阴明目丸对皇家外科学院(royal college surgeons,RCS)大鼠视网膜Bax及Caspase-3表达的影响。方法实验对象分3组,分别为:空白组、模型组、滋阴明目丸组(每组雌雄各4只共8只)。空白组:RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠,灌胃生理盐水;模型组:RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠,灌胃生理盐水;滋阴明目丸组:RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠,灌胃滋阴明目丸混悬液。灌胃30 d后,免疫组化法检测各组大鼠视网膜组织中Bax及Caspase-3表达,RT-q PCR法及Western Blot法分别测定各组视网膜组织中Bax及Caspase-3 m RNA及蛋白相对表达水平。结果 Bax、Caspase-3蛋白在滋阴明目丸组视网膜中的阳性表达显著低于模型组,但高于空白组。与空白组比较,模型组Bax、Caspase-3平均光密度值均增加,滋阴明目丸组Bax平均光密度值增加(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,滋阴明目丸组Bax、Caspase-3平均光密度值均显著减少(P<0.01)。与空白组比较,模型组Bax、Caspase-3 m RNA、蛋白表达均增加,滋阴明目丸组Bax m RNA、蛋白表达均增加(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,滋阴明目丸组Bax、Caspase-3 m RNA、蛋白表达均显著减少(P<0.01)。结论 (1)滋阴明目丸RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠视网膜的超微结构具有保护作用;(2)滋阴明目丸能抑制RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠视网膜上Bax及Caspase-3的表达;(3)滋阴明目丸可能是通过下调视网膜上Bax及Caspase-3的表达,从而减轻视网膜感光细胞的凋亡,达到保护视细胞的目的。

RCS大鼠病变发育过程中视网膜神经节细胞形态学变化的研究

目的 研究皇家外科学院大鼠(royalcollegeofsurgeonrat,RCS)病变发育过程中视网膜神经节细胞(retinalganglioncells ,RGCs)形态学变化。方法 取RCS大鼠、RCS rdy+ 大鼠3、5、7、9、11周龄视网膜,固定后行视网膜平铺片,甲酚紫染色,使用LEICADMTRET显微镜及自带的LEICAQWIN系统软件,观察视网膜神经节细胞层细胞数量总数及RGCs亚群数量上的变化。结果 RCS大鼠病变发育过程中,其节细胞层中细胞横径≥12 μm的细胞在数量上,7、9、11周龄段相较与3周龄段出现显著减少(P <0 0 1)。相同周龄段上的视网膜节细胞层中,RCS大鼠与RCS rdy+ 大鼠在横径≥12 μm的细胞数量上相互比较,可见RCS大鼠从5周龄段开始相较于RCS rdy+ 大鼠出现显著减少(P <0 0 5 ) ,7、9、11周龄段相较与RCS rdy+ 大鼠减少更为显著(P <0 0 1)。但是节细胞层细胞总数及横径≥9μm的细胞数量上,RCS大鼠自身发育前后对照以及与RCS rdy+ 大鼠相比较没有显著差异。结论 RCS大鼠视网膜色素变性过程中,随着光感受器细胞的变性和缺失,虽然视网膜节细胞层细胞在整体数量上没有明显变化,但是RCS大鼠视网膜病变发育早期,其节细胞层中胞体横径≥12 μm的RGCs在数量上开始出现明显缺失。

细胞周期依赖性蛋白激酶5／P25激酶活性与RCS大鼠视网膜神经细胞凋亡的关系

背景视网膜色素变性（RP）是眼科常见的遗传性、致盲性眼病，可能与阿尔茨海默病等慢性神经退行性疾病具有共同的病理生理机制，细胞周期依赖性蛋白激酶5（Cdk5）与光感受器细胞及视网膜神经节细胞正常功能的维持相关，可能是引起RP光感受器细胞凋亡的途径，有可能成为新的治疗靶点。目的探讨Cdk5／P25激酶活性在RCS大鼠视网膜神经细胞凋亡中的作用。方法SPF级RCS变性大鼠及RCS—rdy‘正常对照大鼠各18只，按随机数字表法亚分至出生后17、25、35d组，每亚组各6只大鼠。各组大鼠分别在相应时间点直接处死后摘除眼球，并取视网膜组织，以Westernblot法检测大鼠视网膜组织中Cdk5、P35、P25蛋白的表达和tau蛋白磷酸化水平，并利用紫外分光光度计用光谱法测定两组不同Et龄大鼠视网膜组织吸光度（A。）峰值的变化，定量分析各组Cdk5／P25激酶的活性。结果P35蛋白在17日龄的RCS大鼠和RCS—rdy’大鼠的视网膜组织中表达水平（A。）差异无统计学意义（t=0．52，P〉0．05），25日龄和35日龄RCS大鼠视网膜组织中P35蛋白表达水平分别为2．20±0．48、1．23±0．14，明显高于RCS—rdy’大鼠的1．43±O．13和0．93±0．10，差异均有统计学意义（t：3．78、4．28，P〈0．05）；P25蛋白在17日龄的RCS大鼠及RCS—rdy’大鼠的视网膜组织中均未检测到，但在25日龄和35Et龄的RCS大鼠视网膜组织中表达水平（A。）为0．300~0．003、0．230＋0．004，明显高于RCS—rdy’大鼠的0．040±0．004和0．070±0．004，差异均有统计学意义（t=121．81、77．51，P〈0．01）；Cdk5蛋白在各Et龄的RCS大鼠视网膜组织中的表达水平与RCS—rdy’大鼠相比差异均无统计学意义（t=-0．60、0．19、1．62，P〉0．05）；17日龄RCS大鼠和RCS—rdy’大鼠视网膜组织中Cdk5／P25激酶活性差异无统计学意义（t=0．19，P〉0．05），25日龄和35日龄的RCS大鼠视网膜组织中Cdk5／P25激酶活性分别为0．0058±0．0005、0．0056±O．0004，明显高于RCS—rdy’大鼠的0．0038±O．0003和0．0032±0．0007，差异均有统计学意义（t=8．07、5．97，P〈0．01）；25日龄和35日龄RCS大鼠视网膜组织中tau蛋白磷酸化水平明显高于RCS—rdy’大鼠，差异均有统计学意义（t=4．71、3．17，P〈0．05）。结论RCS大鼠视网膜组织中Cdk5／P25激酶活性与P25蛋白表达水平和tau蛋白磷酸化水平的变化趋势一致，提示P25表达增加可能诱导Cdk5／P25激酶活性升高，并通过磷酸化其作用底物引起视网膜神经细胞凋亡。

RCS大鼠感光细胞凋亡与 Fas蛋白表达

为了探讨遗传性视网膜变性时感光细胞凋亡及其基因调控机制 ,本研究对出生后 9、15、2 0、2 5、3 0、3 5、40、60 d的 RCS大鼠及同龄 SD大鼠各 4只的视网膜进行了 TU NEL 凋亡检测及 Fas蛋白免疫组织化学反应。结果表明 ,出生后 2 5～ 40 d,RCS大鼠视网膜外核层可见 TUNEL阳性的感光细胞核 ,TUNEL阳性细胞数到 3 5 d达高峰 ( P<0 .0 5 )。Fas蛋白免疫组织化学检测发现 ,RCS大鼠视网膜内核层在 15～ 40 d可见 Fas免疫阳性细胞 ,阳性细胞数以 2 5 d为最多 ( P<0 .0 5 ) ;外核层在 2 5 d也可见Fas蛋白免疫阳性反应 ,一直持续到 40 d;节细胞层在 15～ 40 d可见 Fas蛋白表达。到 60 d时则各层又都不见明显的 Fas蛋白阳性反应。本研究结果提示 ,在 RCS大鼠视网膜变性过程中 ,感光细胞发生凋亡 。

促红细胞生成素对视网膜色素变性的RCS大鼠的作用

为观察促红细胞生成素对视网膜色素变性的RCS大鼠的作用,探讨其对视网膜变性神经元保护的可能机制。我们把出生后雄性RCS大鼠48只,随机分为给药组和对照组。RCS大鼠给药组从生后5d开始腹腔注射重组人促红细胞生成素(rhEPO),每5d注射一次,剂量为4000IU/kg。RCS大鼠对照组注射生理盐水,剂量同上。HE染色和TUNEL检测观察rhEPO对视网膜色素变性神经元的保护作用。应用免疫组织化学方法检测caspase2蛋白的表达。结果显示:(1)RCS大鼠给药组20d,25d,感光细胞的数目与对照组大鼠相比明显增加(P<0.05);(2)RCS大鼠给药组25dTUNEL检测阳性细胞数目与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);(3)生后25d到40d,RCS大鼠给药组和对照组在节细胞层和内核层观察到caspase2阳性染色,RCS大鼠给药组在20d和25d内核层caspase2阳性细胞数目多于对照组(P<0.05)。结果提示:在RCS大鼠视网膜变性的早期,rhEPO对神经元起保护作用,可以使感光细胞得到更多存留;rhEPO对视网膜变性神经元的早期保护作用可能是通过抑制凋亡的方式进行的;caspase2蛋白在视网膜的一过性高表达提示其参与了视网膜感光细胞的凋亡过程,rhEPO可减少其早期的表达,对早期变性的神经元发挥保护作用。

枸杞子提取液对RCS大鼠遗传性视网膜色素变性的神经保护作用(英文)

为了观察枸杞子提取液(LBA)对RCS大鼠遗传性视网膜色素变性的治疗作用,将出生后的24只RCS大鼠,随机分为对照组和实验组,每组12只。在实验组RCS大鼠出生后10 d开始喂食1 mg/kg LBA,对照组正常饲养。对照组和实验组RCS大鼠分别在出生后25、35、45 d处死,应用HE染色和TUNEL检测观察视网膜感光细胞的坏死和凋亡,并应用免疫组化的方法检测Caspase-2的表达。结果显示:RCS大鼠实验组25 d和35 d时TUNEL检测阳性细胞数目与对照组相比明显减少(P<0.05);实验组和对照组大鼠生后25 d和50 d时Caspase-2在节细胞层和内核层均有表达,但在25 d时实验组比对照组明显减少(P<0.05)。上述结果提示:在RCS大鼠视网膜变性的早期,LBA通过抑制细胞的凋亡对神经元起保护作用,可以使感光细胞得到更多存留,Caspase-2可促使视网膜变性,LBA则可通过抑制其表达对早期变性的神经元发挥保护作用。

枸杞子提取液对RCS大鼠遗传性视网膜变性的作用

目的观察枸杞子提取液(LBA)对RCS大鼠遗传性视网膜变性的治疗作用。方法出生后RCS大鼠24只,随机分为对照组和治疗组,每组12只。治疗组RCS大鼠出生后10d开始喂食1mg/kg的LBA,对照组正常饲养。两组大鼠分别在出生后25、35、45d取眼球,制备组织切片,应用苏木精-伊红(HE)染色和TUNEL染色观察视网膜感光细胞坏死和凋亡情况,并应用免疫组化方法检测Caspase-2的表达。结果治疗组大鼠出生后25d和35d时TUNEL染色阳性细胞与对照组相比明显减少(t=3.33～6.72,P<0.05);治疗组和对照组大鼠生后25～45d时Caspase-2在节细胞层和内核层均有表达,但在25d时治疗组与对照组相比明显减少(t=6.33,P<0.05)。结论在RCS大鼠遗传性视网膜变性的早期,LBA通过抑制细胞凋亡及Caspase-2表达对神经元起保护作用。

RCS大鼠视网膜内核层变性的超微结构研究

目的 证实RCS大鼠视网膜内核层存在神经原变性。方法 利用光学显微镜和透射电子显微镜观察出生后第 18、2 0、2 8、3 5、42、45、5 6、60、70和 10 0d的RCS大鼠视网膜和正常SD大鼠视网膜组织结构的变化。并用TUNEL方法证实视网膜神经细胞存在凋亡。结果 和正常SD大鼠视网膜比较 ,RCS大鼠 18～ 2 0d开始视网膜变性 ,光感受器细胞死亡 ,内核层细胞也有不同程度的变性。RCS大鼠在出生后 2 5d ,视网膜外核层细胞核TUNEL呈阳性 ,出生后 3 5～ 45d呈强阳性 ,视网膜内核层细胞核TUNEL标记呈阳性。结论 RCS大鼠视网膜内核层细胞存在神经原变性 ,视网膜内核层细胞死亡存在凋亡这一方式。跨神经原变性很可能是这些细胞变性的机制。RCS大鼠视网膜外核层细胞存在神经原变性 。

RCS大鼠生长繁殖性能的观察

目的 在一定的饲养条件下 ,观察RCS大鼠的生长繁殖能力。方法 选RCS大鼠 70— 80日龄 4 6只 (雌、雄各半 ) ,分为两组 ,进行交配繁殖 ,并统计其生产繁殖性能。结果 两组RCS大鼠平均窝产仔数为 7 9只 ,离乳时第 2组比第 1组仔鼠死亡率低 10 3%。

枸杞子加丹参对RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠视网膜匀浆中cAMP、cGMP含量的影响

目的探讨枸杞子加丹参对视网膜色素变性模型大鼠RCS(rdy-/-, p-/-)视网膜匀浆中cAMP含量、cGMP含量以及cAMP/cGMP值的影响。方法实验动物随机分为5组:空白组为RCS(rdy+/+, p+/+)大鼠8只,模型组、枸杞子组、丹参组及枸杞子加丹参组(杞参组)为RCS(rdy-/-, p-/-)大鼠各8只,每组均雌雄各半。5组大鼠分别给予生理盐水、生理盐水、枸杞子、丹参、枸杞子加丹参灌胃。灌胃28 d后,ELISA法测定视网膜组织匀浆中cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP值。结果与空白组比较,模型组大鼠视网膜匀浆组织中cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP值均增高,差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组比较,杞参组视网膜匀浆组织中cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP值均明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论 "补虚活血"代表中药枸杞子加丹参可以降低RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠视网膜组织匀浆中cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP值,改善其"虚"证指标。

滋阴明目丸对RCS大鼠视网膜Fas/FasL表达的影响

目的观察滋阴明目丸对RCS大鼠视网膜Fas/FasL表达的影响。方法选择RCS大鼠,(1.51±0.27)月龄,共24只,按随机数字表法将其分为三组:空白组、模型组、滋阴明目丸组(雌雄各4只,n=8)。空白组:RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠,灌胃生理盐水;模型组:RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠,灌胃生理盐水;滋阴明目丸组:RCS(rdy-/-,p-/-)大鼠,灌胃滋阴明目丸。灌胃30 d后,免疫组化染色观察标本视网膜各层结构的形态学变化,Western blot法测定RCS大鼠视网膜Fas/FasL表达水平。结果免疫组化染色结果显示:空白组大鼠视网膜各层结构清晰;模型组大鼠视网膜的厚度低于空白组,且各层结构不清晰;滋阴明目丸组大鼠视网膜厚度低于空白组但高于模型组,视网膜各层结构较清晰。Western blot法检测结果显示:滋阴明目丸组大鼠视网膜Fas、FasL蛋白相对表达量明显低于模型组,差异有高度统计学意义(P <0.01)。结论滋阴明目丸对视网膜的超微结构具有保护作用,能抑制视网膜上Fas/FasL的表达,从而减轻视网膜感光细胞的凋亡,达到保护视细胞的目的。

RCS大鼠视网膜中caspase 3 mRNA的表达

目的观察半胱氨酸天冬氨酸酶３ （ｃａｓｐａｓｅ ３） ｍＲＮＡ在ＲＣＳ大鼠视网膜中的表达，分析ｃａｓｐａｓｅ ３ ｍＲＮＡ表达与ＲＣＳ大鼠视网膜发育的关系。 方法应用逆转录－多聚酶连反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＲＣＳ大鼠出生后不同时间视网膜中ｃａｓｐａｓｅ ３ ｍＲＮＡ的表达。结果ＲＣＳ大鼠出生后１４～６０天视网膜ｃａｓｐａｓｅ ３ ｍＲＮＡ均有表达，２５天ｃａｓｐａｓｅ ３ ｍＲＮＡ水平明显升高，达到高峰。ＳＤ大鼠视网膜１５～６０天的表达量无明显差异，与ＲＣＳ大鼠１４天水平接近。结论ｃａｓｐａｓｅ ３ ｍＲＮＡ的表达升高可能对ＲＣＳ大鼠视网膜变性中细胞凋亡起着关键的作用。