结核分枝杆菌Rv3873抗原的同源表达及其在结核病血清学诊断中的应用

目的在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msm)中克隆并表达结核分枝杆菌(M.tuberculosis,Mtb)RD1区蛋白Rv3873,并评价其在结核病(tuberculosis,TB)血清学诊断中的价值。方法以Mtb H37Rv标准株全基因组DNA为模板,扩增得到rv3873基因完整序列,克隆至分枝杆菌表达载体pMF406,构建重组质粒pMF406-rv3873,电转化至Msm mc2155,加入乙酰胺诱导表达Rv3873同源重组蛋白(mRv3873),利用亲和层析进行纯化,Western blot分析抗原特异性;ELISA法检测27份TB患者和31份健康者血清IgG抗体,以大肠埃希菌表达的Rv3873(r Rv3873)和免疫优势抗原Ag85A作为对照抗原,评价mRv3873在TB血清学诊断中的作用。结果在Msm中成功表达了重组Mtb蛋白mRv3873,主要以可溶形式存在,经Ni2+亲和层析柱纯化可获得高纯度(95%)的可溶性重组蛋白,蛋白浓度约为2.0 mg/mL;TB患者组血清中抗mRv3873和Ag85A抗原特异性IgG水平均显著高于健康组(P<0.05),而两组血清r Rv3873特异性IgG水平差异无统计学意义(P>0.05);mRv3873抗原与对照抗原Ag85A的诊断效能相当,ROC曲线下面积分别为0.7760和0.7784,显著高于异源表达抗原r Rv3873的曲线下面积(0.5866)。结论在快速生长分枝杆菌Msm中可高水平表达并纯化Mtb RD1区抗原Rv3873,较之异源表达抗原,TB患者产生针对mRv3873的IgG水平显著高于健康人群,分枝杆菌同源表达的mRv3873具有作为TB血清诊断的潜力。